刘波杨学军张辰于圣平林雨海龙周星辰李帅李涛王伟程铖杨亦寒

ADAM12基因表达沉默对CD133阳性胶质瘤细胞自我更新能力的影响☆

刘波*杨学军*张辰*于圣平*林雨*海龙*周星辰*李帅*李涛*王伟*程铖*杨亦寒*

目的研究解整合素-金属蛋白酶12（a disintegrin and metalloprotease 12，ADAM12）基因表达沉默抑制CD133阳性（CD133+）胶质瘤细胞的自我更新能力。方法 采用shRNA重组慢病毒转染技术沉默胶质瘤U87细胞系ADAM12基因表达分为ADAM12基因表达干扰序列组（shRNA-ADAM12）、阴性对照组（shRNA-NC）及空白对照（shRNA-C）组。通过Western blotting以及Real-time PCR验证各组细胞ADAM12表达情况；采用悬浮培养得到胶质瘤细胞球以富集CD133+的胶质瘤细胞；并通过免疫荧光染色技术检测ADAM12与CD133在细胞球与贴壁细胞的表达情况；通过神经肿瘤球形成实验检测三组细胞的自我更新能力；利用Western blotting分别检测三组细胞成球后未分化或分化相关蛋白CD133、GFAP及TUBB3以及Notch通路靶基因Hes1的蛋白表达情况。结果慢病毒转染技术可显著下调U87胶质瘤细胞ADAM12的mRNA及蛋白的表达量，shRNA-ADAM12组与shRNA-NC组较shRNA-C组mRNA的相对表达量为0.22±0.03与0.98±0.06（F=425.37，P＜0.01）；三组ADAM12蛋白的相对表达量分别为28.72%±2.36%、69.21%±3.92%及69.04%±3.57%（F=145.42，P＜0.01）；免疫荧光染色显示细胞球中ADAM12与CD133表达量明显高于普通细胞；神经肿瘤球形成实验结果显示，三组成球数分别为45.5±2.3、104.2±5.8以及109.6±6.2，与shRNA-NC组及shRNA-C组相比，shRNA-ADAM12组的成球能力明显降低，差异具有统计学意义（F=147.03，P＜0.01）。shRNA-ADAM12组与shRNA-C组相比，GFAP与TUBB3蛋白表达量分别上调约166%与146%，CD133与HES1的蛋白表达量分别下调了54%与50%，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。结论 ADAM12基因表达沉默可能通过抑制Notch通路活性降低CD133+胶质瘤细胞的自我更新能力。

解整合素-金属蛋白酶12 CD133+胶质瘤细胞……