庹媛媛， 尚鲁俊, 夏海雄, 何志旭，4**， 舒莉萍,,4**

(1.贵州医科大学 儿科教研室， 贵州 贵阳　550004； 2.贵州医科大学 免疫学教研室， 贵州 贵阳　550004； 3.贵州医科大学 实验动物中心， 贵州 贵阳　550004； 4.贵州医科大学 组织工程与干细胞实验中心， 贵州 贵阳　550004)



band3基因在斑马鱼早期胚胎中的表达*

庹媛媛1， 尚鲁俊2, 夏海雄3, 何志旭1，4**， 舒莉萍2,3,4**

(1.贵州医科大学 儿科教研室， 贵州 贵阳550004； 2.贵州医科大学 免疫学教研室， 贵州 贵阳550004； 3.贵州医科大学 实验动物中心， 贵州 贵阳550004； 4.贵州医科大学 组织工程与干细胞实验中心， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 用band3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交，检测band3基因在野生型Tüebingen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法： Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物，采用RT-PCR法扩增band3基因cDNA编码区片段；通过基因重组技术构建PBSK-band3重组质粒，用BamHⅠ酶切得到线性化PBSK-band3；以T7 RNA聚合酶转录合成反义地高辛标记的band3 RNA探针，用全胚胎原位杂交法检测band3基因在斑马鱼胚胎早期的表达情况。结果： 成功克隆band3基因片段，构建PBSK-band3重组质粒；经体外转录获得地高辛标记的反义band3 mRNA探针，原位杂交后检测证实band3基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中间细胞群(ICM)和主动脉性腺中肾区(AGM)呈现高表达。结论： 地高辛标记的反义band3 mRNA探针可检测到斑马鱼胚胎中band3基因的定位表达。

[关键词]斑马鱼； 胚胎； band3； 全胚胎原位杂交； 探针

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物野生型Tüebingen斑马鱼品系由上海生命科学院健康研究所刘廷析研究员馈赠，本实验室繁殖培育。养殖条件：(28±2)℃，带有过滤系统的循环水系统养殖，12 h/d光照,予以草履虫及虾卵饲养[7]。……