黄　镛林钰文杨柳青（.广东省中医院药学部　广州　500；.广州市医药职业学校　广州　50430）

中药茅莓根、茎、叶中表儿茶素的含量测定

黄镛1林钰文2杨柳青1（1.广东省中医院药学部广州510120；2.广州市医药职业学校广州510430）

摘要：目的：比较中药茅莓不同部位中表儿茶素的含量，为临床用药提供参考。方法：采用HPLC法测定茅莓根、茎、叶中表儿茶素的含量，从化学成分上考察茅莓不同药用部位有效成分的分布。结果：不同产地茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有一定差异，以广西产地的含量稍高；茅莓根、茎、叶等部位均含有表儿茶素，三者含量有明显差异，含量的大小顺序依次为：叶＞根＞茎。结论：茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有显著差异，临床上作为药用应有所区别。

关键词：茅莓 药用部位 表儿茶素 含量测定 HPLC

茅莓为蔷薇科悬钩子属植物，是广东地区民间常用药，别名蛇泡簕、红梅消、三月泡、薅秧藨、天青地白草等，根、茎、叶及全草均可药用，具有清热凉血、散结止痛、利尿消肿等功效，广泛用于感冒发热、跌打损伤、急性咽喉炎、肾盂肾炎、痛经等疾病的治疗［1～2］。临床上常以茅莓根入药，《广东省中药材标准（第二册）》也仅收录了茅莓根，从功效上分析，其根、茎、叶功效基本一致。研究表明，茅莓中含有化学成分包括：微量元素类、糖类、色素类、三萜及其苷类、黄酮/酚类、甾体及其苷类，以及茅莓叶中大量的挥发油类成分等［3］。有文献报道，黄酮类成分是茅莓根中主要有效成分之一，表儿茶素在黄酮类成分中含量较大，具有保肝、抗癌的药理作用［4］，可作为茅莓根的主要药效评价成分。茅莓茎和叶中是否含有表儿茶素，本文将对其根、茎、叶不同部位中的表儿茶素进行测定，为临床用药提供参考。

1仪器与试药

Agilent-1100高效液相色谱仪，包括DAD检测器、自动进样器、在线脱气、四元泵（美国安捷伦科技有限公司）；SARTORIUS BP211D型电子天平（十万分之一）。表儿茶素对照品（批号：11878—201202）购于中国药品生物制品检定所（纯度≥98.0%）；茅莓采集于广东、广西等地，经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定为蔷薇科悬钩子属植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草。乙腈为色谱纯，甲醇等试剂均为分析纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Extend C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（12∶88）；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：280nm；进样量为20μL。

2.2对照品溶液的制备：精密称取表儿茶素对照品适量，置于25mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，制得0.6mg/mL对照品溶液，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.3供试品溶液制备：取茅莓根、茎、叶样品粉末1g，5份，精密称定，置100mL具塞锥形瓶，精密加入50%甲醇25mL，称定重量，超声提取90min（功率240W，频率45kHz），放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，离心取上清液，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.4标准曲线的制备：精密量取表儿茶素对照品溶液适量分别稀释成浓度为 0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL的标准溶液，按照上述的色谱条件进样20μL，测定表儿茶素的峰面积，以峰面积Y为纵坐标，进样浓度（mg/mL）为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程分别为：Y=12874X-12.475（R2=0.9998）。

2.5精密度试验：精密吸取表儿茶素对照品溶液20μL，按上述色谱条件重复进样5次，照上述色谱条件测定表儿茶素的峰面积。结果表儿茶素峰面积的RSD=1.08%（n=5），表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验：取同一份供试品溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件，在0、12、24、36、48h进样测定。结果表儿茶素峰面积的RSD=1.16%（n=5），表明供试品溶液在48h内稳定。

2.7重复性试验：取同一批供试品样品5份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件分别进样20μL。结果表儿茶素峰面积的RSD=0.97%（n=5），表明方法重复性良好。

2.8加样回收率试验：精密称取供试品样品0.05g，加入适量表儿茶素的对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，计算加样回收率。结果表儿茶素的平均回收率为98.7%，RSD=2.56%（n=5）。

2.9含量测定：按照上述含量测定方法，测定茅莓根、茎、叶中表儿茶素的含量。结果见表1、图1。

表1茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量测定结果（n=5）

表1结果表明，不同产地茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有一定差异，以广西产地的含量稍高；茅莓根、茎、叶等部位均含有表儿茶素，3个药用部位的含量有明显差异，含量的大小顺序依次为：叶＞根＞茎。

3讨论

由于用药习惯差异，茅莓在不同地方药用部位有所区别，2006年版《中药大辞典》、2008年版《广西壮药标准》、2003年版《贵州省中药材标准》、2009年版《辽宁省中药材标准》收录了茅莓干燥地上部分；2010年版《中国药典》附录、2002年版《山东省中药材标准》、1995年版《山东省中药材标准》、2010年版《广东省中药材标准》收录了茅莓根；临床上，茅莓的根、茎、叶功效相似，医家对茅莓根应用较为普遍，但茅莓不同部位化学成分、药理和临床应用是否有区别，有待研究。

目前有关茅莓化学成分的研究较少，近年来，国内学者对茅莓根、茎、叶的化学成分进行了初步分析，分离鉴定出黄酮、二萜、三萜及三萜皂苷类成分，有学者研究表明，茅莓中黄酮具有抗氧化活性［5］，被认为是主要有效成分之一。本文以表儿茶素为评价指标，考察茅莓不同部位成分含量，为临床用药提供参考。实验结果表明，茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有明显的差异，同时学者研究表明，茅莓根和叶中挥发油成分和抑菌作用也有一定差异［6～7］，因此，茅莓根、茎、叶作为药用于临床应有所侧重。

参考文献

［1］广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准（第二册）［S］.广州：广东科技出版社，2011：200.

［2］陈小露，梅全喜，周洪波.茅莓根化学成分研究［J］.中药材，2014，37（6）：995-997.

［3］胡小刚.茅莓化学成分分离及药理学活性初探［D］.第三军医大学硕士学位论文，2013.

［4］张旭，杨万青，苏聪，等.HPLC法测定茅莓根中表儿茶素的含量［J］.中国新药杂志，2014，23（24）：2915-2918.

［5］郑红，刘德胜，丁媛媛，等.茅莓黄酮体外抗氧化活性研究［J］.湖北农业科学，2013，52（23）：5828-5830.

［6］谭明雄，王恒山，黎霜.茅莓根和叶挥发油抑菌活性的研究［J］.科技进展，2002，9：21-22.

［7］谭明雄，王恒山，陈宪明.茅莓叶和根挥发油的主要化学成分［J］.科技进展，2003，17（6），46-47.

中图分类号：R284

文献标识码：A

文章编号：1672-8351（2016）07-0003-02

The Determination of the Content of L-epicatechin of Roots，Stems and Leaves from Rubus parvifolius L.

Huang Yong1Lin Yuwen2Yang Liuqing1（1.Pharmaceutical Department of Guangdong Provincial Hospital of TCM，Guangdong，Guangzhou，510120；China.2.Guangzhou Pharmaceutical School Guangzhou，510430.）

Abstract：Objective：To compare the content of L-epicatechin from different parts of Rubus parvifolius L，to provide reference for clinical application.Methods：Using the method of HPLC to determine the content of L-epicatechin from roots，stems and leaves of Rubus parvifolius L.，to evaluate similarities and differences of Clinical efficacy on the chemical composition.Results：There was some different of the content of L-epicatechin for different place of Rubus parvifolius L.，and the content of Rubus parvifolius L.from Guangxi was lightly higher，we found the compound of L-epicatechin from roots，stems and leaves of Rubus parvifolius L.，and there are significant differences in the content of the three，the size of the order was：leaf＞root＞stem.Conclusion：There was some different of the content of L-epicatechin for roots，stems and leaves of Rubus parvifolius L.，it should be different as a medicinal clinic.

Key words：Rubus parvifolius L.Medicinal parts L-epicatechin Determination HPLC