张静雯　伍蔚萍（浙江燎原药业股份有限公司　临海　317016）

HPLC法测定硫酸氢氯吡格雷中的左旋樟脑磺酸杂质的含量

张静雯伍蔚萍（浙江燎原药业股份有限公司临海317016）

摘要：目的：建立硫酸氢氯吡格雷中左旋樟脑磺酸杂质的HPLC检测方法。方法：采用Agilent 1200色谱系统；色谱柱为Welch XB C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相A为三乙胺缓冲液（用磷酸调节pH为2.5），流动相B为乙腈，梯度洗脱：0～10min，流动相B 为20%，10～15min流动相从20%升到80%，15～20min流动相B为80%，20～21min流动相B从80%下降到20%，21～30min，流动相B为20%；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长为207nm；进样量为10μL。结果：左旋樟脑磺酸杂质可与硫酸氢氯吡格雷中的杂质分开，检测限为0.02%。结论：该法简单、快速、准确和重复性好，可用于硫酸氢氯吡格雷原料药中左旋樟脑磺酸杂质的控制。

关键词：左旋樟脑磺酸 硫酸氢氯吡格雷 杂质含量 HPLC

硫酸氢氯吡格雷，化学名为2-（2-氯苯基）-2-（6，7-二氢噻吩并［3，2-c］吡啶-5-基）乙酸甲酯硫酸氢盐，是一种新型高效安全的抗血小板凝结药物。大量的临床研究表明，它具有药效显著、安全和耐受性强的优点，具有良好的市场前景［1］。硫酸氢氯吡格雷合成工艺中需要左旋樟脑磺酸作为其中间体消旋体的拆分剂，因此在硫酸氢氯吡格雷原料药中需要控制左旋樟脑磺酸的残留量，限度要求为0.10%。笔者查阅大量文献，并未发现有对硫酸氢氯吡格雷中左旋樟脑磺酸的检测报道，因此笔者通过试验，确定可使用HPLC方法对硫酸氢氯吡格雷中的左旋樟脑磺酸进行检测。通过对此方法进行验证，证明该方法的专属性强，灵敏度高，稳定性好，可有效控制硫酸氢氯吡格雷原料药中的左旋樟脑磺酸杂质的含量。

1实验材料

Agilent 1200（包括二元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、VWD检测器、Chemistaion色谱工作站）；UV-2540紫外分光光度计（岛津）；XS205型电子天平（梅特勒-托利多公司）。

左旋樟脑磺酸对照品（Adamas-beta），硫酸氢氯吡格雷样品（浙江燎原药业股份有限公司自制），甲醇、乙腈（色谱级，天津康科德科技有限公司）、纯净水（娃哈哈品牌），三乙胺（分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司）磷酸（分析纯，国药集团）。

2方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1标准储备溶液：精密称取适量的左旋樟脑磺酸对照品，用稀释液［乙腈:水（20:80）］溶解制成浓度为1.0mg/mL的溶液。

2.1.2标准溶液：移取1.0mL标准储备溶液，置于100mL量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，即得浓度为10μg/mL的溶液。

2.1.3样品溶液：称取适量硫酸氢氯吡格雷样品，用稀释液溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液。（必要时可超声以使样品溶解完全！）2.1.4加样混合溶液：称取约100mg硫酸氢氯吡格雷样品，置于10.0mL量瓶中，用1.0mL稀释液溶解，再移取0.1mL标准储备溶液置于上述量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，即得。

2.2色谱条件：Welch XB C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相A:取1.0mL三乙胺置于1000mL水中，用50%磷酸调节pH 为2.5；流动相B：乙腈；洗脱程序：梯度洗脱，具体洗脱程序见表1；检测波长为207nm；流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃；进样量为10μL；运行时间30min。

2.3方法学考察

2.3.1紫外波长的确定：使用UV-2540紫外分光光度计，以甲醇作为空白参比，取标准溶液作为测试溶液，在190～400nm波长范围内进行光谱扫描，获得紫外吸收光谱见图1。

从图1看出，左旋樟脑磺酸仅在200nm左右有少许紫外吸收，考虑波长太低，溶剂空白干扰变大，选择207nm作为测定波长。

2.3.2专属性考察：分别取标准溶液、样品溶液、加样混合溶液进样测定，获得色谱图2～4。由图4可见，左旋樟脑磺酸与相邻色谱峰得到较好的分离，硫酸氢氯吡格雷中其他杂质峰均未对左旋樟脑磺酸的测定造成干扰。

表1梯度洗脱程序

2.3.3检测限（LOD）：按照信噪比为3∶1的要求配制左旋樟脑磺酸的检测限溶液（移取标准溶液2.0mL置于10.0mL量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀，即得，浓度约为2μg/mL）。检测限溶液须连续进样3针，从Agilent Chemstation工作站图谱数据获得3次进样的信噪比S/N值分别为3.2、3.3、3.5，平均值为3.3，符合结果要求。当检测限浓度约为2μg/mL时，相当于在样品中的含量为0.02%，对于限度要求0.10%来说，此方法灵敏度已可满足杂质定量的要求。

2.4样品测定：取3批硫酸氢氯吡格雷样品，按“样品溶液”方法操作制备溶液，每批样品平行制备2份，每份测定1次，记录色谱图。

左旋樟脑磺酸含量计算方式：限量法即要求样品溶液中左旋樟脑磺酸的峰面积（AU）不得大于标准溶液中左旋樟脑磺酸峰面积（AS），即AU≤AS。（限度为0.10%）

具体结果见表2。

表2　3批样品中左旋樟脑磺酸的测定

3讨论

3.1左旋樟脑磺酸仅在200nm左右低波处有紫外吸收，由于乙腈截止波长比甲醇低很多，选择乙腈作为流动相有机相较好，可以避免溶剂的干扰。

3.2由于考虑到左旋樟脑磺酸在成品硫酸氢氯吡格雷中潜存性不大，方法开发实验中对多批硫酸氢氯吡格雷样品检测，均未检出此杂质，再考虑到方法验证的成本以及检测方法的简便性，对此杂质的检测方法用限量法较合适。

3.3因为本检测方法属于杂质限量控制，按照ICH Q2［2］以及《中国药典》附录9101［3］等对分析方法验证指南，对杂质限量检测方法验证，方法学考察专属性和检测限即可。

参考文献

［1］姜丹.急性缺血性脑血管病早期诊断和对策 ［J］.安徽医药，2005，9（8）：624-626.

［2］ICH Q2（R1）：Validation of Analytical procedures:Text and Methodology.

［3］2015版中华人民共和国药典四部通则：9101药品质量标准分析方法验证指导原则.

中图分类号：R927.2

文献标识码：A

文章编号：1672-8351（2016）07-0012-02