董丹丹， 孙燕侠， 郭华荣

(中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛 266003)



斑马鱼性腺组织的原代细胞培养技术的建立

董丹丹， 孙燕侠， 郭华荣*

(中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛 266003)

摘要[目的]建立斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养技术，获得原代和传代培养细胞单层。[方法]采用组织块贴壁法进行斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养，采用0.25%胰蛋白酶消化法进行传代培养。[结果]斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件为：最适培养基为DMEM/F12(pH 7.0～7.2)，培养温度为24 ℃，在添加20 ng/mL 表皮生长因子(EGF)、20 ng/mL 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、0.5 mmol/L β-巯基乙醇和15%胎牛血清时更有利于细胞的存活。其中，卵巢的组织块接种3～4 d后，上皮样细胞首先开始迁出，迁出的上皮样细胞生长5 d后，逐渐凋亡；此后，成纤维样细胞和另一种上皮样细胞开始大量迁出， 10 d后可生长汇合成80%的原代细胞单层；可成功传代培养1次，但传代后的上皮样细胞不贴壁，很快死亡,而传代后的成纤维样细胞可贴壁生长，但基本不分裂，健康存活7 d后开始逐渐凋亡。精巢组织接种5 d后，上皮样细胞和成纤维样细胞同时开始迁出，培养16 d后逐渐凋亡，仅得到60%原代培养细胞单层。[结论]初步建立了斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件，并将卵巢组织块迁出的成纤维样细胞成功传代1次。

关键词斑马鱼；性腺组织；原代细胞培养；传代培养

斑马鱼是原产于印度和巴基斯坦淡水河流中的一种热带硬骨鱼，具有易于饲养、繁殖周期短、多次产卵和胚胎透明等优点，是功能基因组时代生命科学研究中最重要的一种水生模式脊椎动物[1-2]。……