西安医学院第二附属医院中心实验室(西安 710038)

严喜章　常　盼　于　军▲　铁　茹　张学策　陈建婷△



粪钙卫蛋白和乳铁蛋白检测在诊断溃疡性结肠炎中的临床意义*

西安医学院第二附属医院中心实验室(西安 710038)

严喜章常盼于军▲铁茹张学策陈建婷△

摘要目的：研究粪钙卫蛋白和乳铁蛋白在诊断溃疡性结肠炎中的表达水平及临床诊断价值。 方法:收集溃疡性结肠炎患者63例和健康对照43例，采用ELISA方法测定粪便中粪钙卫蛋白和乳铁蛋白，并进行统计学分析。 结果： 溃疡性结肠炎患者钙卫蛋白含量明显高于健康对照组(P<0.01)，且随活动期级别增高，粪钙卫蛋白的水平逐渐增高(P<0.05)。溃疡性结肠炎患者乳铁蛋白含量明显高于健康对照组(P<0.01)，随活动期级别增高，粪钙卫蛋白的水平逐渐增高(P<0.05)。乳铁蛋白(r=0.71，P<0.01)和钙卫蛋白(r=0.79，P<0.01)含量均与肠镜分级结果显著相关。 结论：粪便中钙卫蛋白和乳铁蛋白在评价溃疡性结肠炎具有一定的临床意义。

主题词@钙卫蛋白乳铁蛋白/诊断应用结肠炎，溃疡性/诊断

溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)是炎症性肠病的主要类型之一，主要与机体免疫应答、肠粘膜免疫识别失调相关[1]。目前临床上主要通过结肠镜和内镜下活组织检查来判断UC，属于侵入性检查，风险大及患者痛苦较多。因此寻找一种非侵入性检测手段评价UC已成为国内外学者关注的焦点之一。国内外有研究显示粪便炎性标志物在反应肠道局部的炎症程度上具敏感性和特异性[2-3]。

钙卫蛋白(Calprotectin)和乳铁蛋白(Lactoferrin)主要来源于中性粒细胞，有少部分来源于单核细胞和巨噬细胞[4-5]。是近年来新发现的急性炎症标志物，因具有耐热性和抗蛋白酶活性，同时在肠腔和外界环境中可长期保持相对稳定[6]，在炎症性肠道疾病中引起了越来越多学者的关注。本研究定量检测UC患者不同病变阶段患者粪便中钙卫蛋白和乳铁蛋白含量，并与肠镜检查结果进行相关性分析，旨在研究粪钙卫蛋白和乳铁蛋白在UC的临床诊断价值。

资料和方法

1一般资料2013年4月1日至2014 年11月30日在西安医学院第二附属医院内镜中心接受肠镜检查的UC患者63例和健康对照43例。UC患者依据内镜及病理分级诊断为缓解期22例，活动期41例，其中I级12例，Ⅱ级18例，Ⅲ级11例。留取患者肠镜检查1周内的粪便，2 h内送至医院，密封后置于- 20℃保存，以备钙卫蛋白和乳铁蛋白的检测。所有入选者行肠镜检查，肠镜检查时均取活检，病理诊断采用Truelove - Wiffs标准。

排除标准：严重心、肝、肾等重要脏器和血液、系统性疾病、包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等；近期肠道感染病史或其他部位感染病史；近1个月内曾应用过糖皮质激素和免疫抑制剂；2周内有使用非甾体抗炎药及乙醇成瘾者。

2仪器和试剂酶标仪为美国Bio-Rad 550型。检测粪钙卫蛋白和乳铁蛋白ELISA 试剂盒购自芬兰Hycult公司。

3检验方法将留存粪便在室温解冻后，挑取50～150 mg，准确称重。按照粪便质量/容积( mg/ml) = 1∶50的比例加入萃取液, 充分震荡30 min，混匀后取1 匀浆高速离心(10 000 r /10 min)，取上清液。酶联免疫反应严格按照ELISA检测试剂盒说明书进行，将蛋白提取液以1∶10比例稀释，样本均设复孔，行常规ELISA操作程序( 双抗体夹心法)。将酶标仪设置为450 nm进行测定，根据标准品的吸光度和浓度绘制标准曲线，测定范围为10～600 g/g，若>600 g/g，再取粪便抽提上清液，进一步扩大稀释比例，稀释后行常规ELISA流程操作。

4统计学方法应用SPSS17．0统计学软件，以中位数表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis检验，相关分析采用Spearman秩相关。P< 0.05为差异有统计学意义，P< 0.01为差异有显著统计学意义。

结果

1粪钙卫蛋白与UC活动性关系缓解期钙卫蛋白含量与健康对照组比较，无统计学差异(P>0.05)；UC活动期粪钙卫蛋白含量明显高于健康对照组和缓解期(P<0.01)；UC患者不同分期之间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)，且分期级别越高，钙卫蛋白含量越高，见表1。相关性分析结果表明，钙卫蛋白与肠镜分级显著相关(r=0.79，P<0.01)。

表1　不同分期UC患者钙卫蛋白含量与健康对照比较

注：与健康对照组相比，*P<0.01；与缓解期相比，#P<0.01;与活动Ⅰ期比较,△P<0.05;与活动Ⅱ期比较,▽P<0.01

2粪便乳铁蛋白与UC活动性关系缓解期UC患者粪乳铁蛋白含量与健康对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；UC活动期粪乳铁蛋白含量明显高于健康对照组及缓解期(P<0.01)，UC患者不同分期之间乳铁蛋白含量两两比较差异有统计学意义(P<0.05)，且分期级别越高，乳铁蛋白含量越高，见表2。相关性分析结果表明，乳铁蛋白与肠镜分级显著相关(r=0.71，P<0.01)。

表2　不同分期UC患者乳铁蛋白含量与健康对照比较

注：与健康对照组相比，*P<0.01；与缓解期相比，#P<0.01;与活动Ⅰ期比较,△P<0.05与活动Ⅱ期比较,▽P<0.01

讨论

UC是一种病因和发病机制尚未完全明确的炎症性肠病，为肠道慢性非特异性疾病，临床症状主要为腹泻伴黏液血便，不同程度的腹痛，腹泻，多呈反复发作，可癌变[1,7]。粪便标志物的检查与结肠镜相比，方便、廉价、更容易被患者接受，而且有利于进行实时监控，可连续的反映肠道局部炎症的变化情况。

有研究者对经过结肠镜检查并怀凝有肠道炎症的患者进行研究，发现在诊断炎症方面，粪钙卫蛋白相比结肠镜检查具有更高的敏感性[8]，新近的研究报道称，粪乳铁蛋白是肠道炎症可靠的生物标志物之一[9]，可见，粪钙卫蛋白和乳铁蛋白与炎症性肠道疾病的发生密切相关。

本实验通过ELISA检测发现UC患者活动期粪便中钙卫蛋白和乳铁蛋白含量增高。说明钙卫蛋白和乳铁蛋白含量增加是UC患者肠道发生病理改变之一。可见，粪钙卫蛋白联合乳铁蛋白检测，在一定程度上有利于医生对UC进行初筛，减轻患者痛苦、降低诊疗费用。由于UC病变部位有大量炎性细胞如中性粒细胞和单核细胞，其存在明显高于非炎症部位和健康对照者，因此测定中性粒细胞来源的钙卫蛋白和乳铁蛋白有望成为反应肠道炎症的可靠标志物。另一方面，本研究结果发现UC患者粪便中钙卫蛋白和乳铁蛋白含量与活动期疾病分级相关，提示炎性细胞可能通过钙卫蛋白和乳铁蛋白调节内脏敏感性参与UC的发生。

综上所述，钙卫蛋白和乳铁蛋白含量的检测为临床诊断UC提供了一种有价值且具良好发展前景的方法，同时对UC活动性的诊断、治疗、预后判断可起到指导作用。

参考文献

[1]Conrad K, Roggenbuck D, Laass MW. Diagnosis and classification of ulcerative colitis[J]. Autoimmunity Reviews, 2014, 13(4-5):463-466.

[2]Langhorst J, Elsenbruch S, Koelzer J,etal. Noninvasive markers in the assessment of intestinal inflammation in inflammatory bowel diseases: performance of fecal lactoferrin, calprotectin, and PMN-elastase, CRP, and clinical INDIces[J]. Am J Gastroenterol, 2008, 103 (1):162-9.

[3]李瑜元.第四届亚太消化疾病周会议纪要[J].中华消化杂志, 2004, 24 (11): 700-702.

[4]Poullis A, Foster R, Mendall MA,etal. Emerging role of calprotectin in gastroenterology[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2003,18 (7):756-762.

[5]Lehmann FS, Burri E, Beglinger C. The role and utILity of faecal markers in inflammatory bowel disease[J]. Therap Adv Gastroenterol, 2015, 8(1):23-36.

[6]Rogler G. Chronic ulcerative colitis and colorectal cancer [J]. Cancer Letters, 2014,345(2):235-241.

[7]Hardt J,Kienle P.Occult and manifest colorectal carcinoma in ulcerative colitis:How does it influence surgical decision making [J].Viszeralmedizin,2015,31(4):252-257.

[8]Hradsky O,Ohem J,Mitrova K,etal.Fecal calprotectin levels in children is more tightly associated with histological than with macroscopic endoscpy findings[J].Clin Lab,2014,60(12):1993-2000.

[9]Buderus S,Boone JH,Lentze MJ.Fecal lactoferrin:Reliable biomarker for intestinal inflammation in pediatric IBD [J].Gastroenterol Res Pract,2015,2015:578527.

(收稿:2015-08-24)

通讯作者：▲西安医学院第二附属医院中心实验室

【中图分类号】R574.1

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.07.63

Clinical significance of fecal calprotectin and lactoferrin in patients with ulcerative colitis

Central Laboratory, Secomd Affiliated Hospital of Xi’an Medical College (Xi’an 710038)

Yan XizhangChang PanYu Junet al

ABSTRACTObjective: To evaluate the expression and clinical diagnostic value of fecal calprotection and lactoferrin in patients with ulcerative colitis. Methods: 63 patients with ulcerative colitis and 43 healthy controls were enrolled from our hospital. The concentrations of calprotectin and lactoferrin in fecal was measured by ELISA assay and analyzed statistically.Results:The expression of fecal calprotection in ulcerative colitis patients was higher than that in healthy controls (P<0.01), with the increase of active grade of ulcerative colitis，the level of fecal calprotection gradually increased (P<0.05). The protein of lactoferrin was increased in ulcerative colitis patients (P<0.01), with the increase of active grade of ulcerative colitis，the level of fecal lactoferrin gradually increased (P<0.05). Levels of fecal lactoferrin (r=0.71，P<0.01) and calprotection (r=0.79，P<0.01) in active grade group were significantly related to histological grade under colonoscopy.Conclusion:Fecal calprotection and lactoferrin helped to evaluate the ulcerative colitis.

KEY WORDS@Calprotectin lactoferrinLactoferrin/diagnostic useColitis,ulcerative/diagnosis

*陕西省教育厅自然科学基金资助项目(12JK0776)

△西安医学院第二附属医院消化内科