隋　译

(鸡西市食品药品检验检测中心食保化室，黑龙江 鸡西　158100)



液相色谱-质谱法快速测定小儿清解颗粒中非法添加的氨基比林

隋译*

(鸡西市食品药品检验检测中心食保化室，黑龙江 鸡西158100)

摘要目的：建立快速准确鉴定小儿清解颗粒中非法添加氨基比林的方法。方法：用液相色谱质谱联用技术对4种不同厂家小儿清解颗粒中非法添加消肿止痛类化学药品氨基比林进行筛查，与氨基比林对照品的一、二级质谱图进行比较。结果:在样品质谱图中有3家样品的图谱与对照品有不一致的一级质谱峰与二级质谱峰，1个厂家的样品图谱有与对照品有一致的一级质谱峰与二级质谱峰。结论：应用液相色谱-质谱法可快速准确鉴定出中药制剂中是否含有非法添加的氨基比林，并可以准确计算添加氨基比林的含量。

关键词液相色谱-质谱法； 小儿清解颗粒； 氨基比林

小儿清解颗粒为棕褐色的颗粒，气微香，味甜、微苦。主要成分为：金银花、连翘、地骨皮、青黛(包煎)、白薇、地黄、广藿香、石膏，具有除瘟解毒、清热退烧的功效。临床多用于小儿外感风热火时疫感冒引起的高烧不退，汗出热不解，烦躁口渴、咽喉肿痛，肢酸体倦，尤其对儿童高热不退效果比较显著。目前，小儿清解颗粒的检验标准执行的是《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》的检验标准。目前，较多家长对小儿中药制剂比较信任，一些非法分子为了牟取暴利，在儿童用药中非法添加化学药物。而非法添加的药物将会给儿童身体健康造成较大影响。液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS/MS)兼具液相的高分辨率，质谱的高灵敏性及专属性，且样品用量少，分析速度快，应用范围广，是目前鉴别中成药及保健品非法添加化学药物最有效的分析方法[2-6]。本研究将对小儿清解颗粒中是否含有氨基比林进行筛查，按照《药品检验补充检验方法和检验项目批准件》并参考了一些文献[7-12]，采用LC-MS/MS技术鉴定小儿清解颗粒中非法添加的氨基比林，现报告如下。

1材料

Agilent 6430型三重串联四极杆液质联用仪(美国安捷伦公司)；甲醇[赛默飞世尔科技(中国)有限公司,批号：154027]，乙酸铵(HNO3优级纯)、乙酸(H2O2优级纯)；实验用水为超纯水(屈臣氏蒸馏水)。对照品：氨基比林(中国药品生物制品检定所，批号：100503-200301，含量：100%)；分别取4个厂家的的药品：(1)小儿清解颗粒(北京北卫药业有限责任公司，批准文号：国药准字Z11020994，批号：150117)；(2)小儿清解颗粒(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批准文号：国药准字Z11020222，批号：140107)；(3)小儿清解颗粒(天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂，批准文号：国药准字Z12020656，批号：141009)；(4)小儿清解颗粒(贵州福特加制药有限公司，批准文号：国药准字Z20054660，批号：141211)。所用玻璃器皿均以10%硝酸浸泡24 h以上，用水反复冲洗，最后用超纯水冲洗干净，阴干备用。

供试品溶液的制备：取该样品用研钵研磨样品后，准确称样品适量(约相当于300 mg)置于50 ml容量瓶中，用液相色谱流动相溶液40 ml稀释后，超声提取10 min，放冷至室温(25 ℃)用液相色谱流动相溶液稀释至刻度，摇匀，待测。

2.2对照品的处理

对照品溶液的制备:精密称取氨基比林对照品50 mg，置于50 ml容量瓶中，加入流动相35 ml，超声10 min使溶解放冷至室温用液相色谱流动相溶液稀释至刻度，混合均匀，制成储备液(1 mg/ml)，再用流动相使稀释成200 ng/ml的对照品溶液摇匀，待测。

2.3仪器工作条件

2.3.1色谱条件：以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂(柱头加装相同规格填料的预色谱柱)；检测波长为280 nm；以含0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸的水溶液∶甲醇溶液(V∶V=20 ∶80)为流动相。

2.3.2质谱的条件:电喷雾离子化源，源电压5 KV，毛细管温度275 ℃，鞘气流速40 arb，正离子检测方式，扫描方式为全扫描一级质谱、全扫描二级质谱，扫描范围100～1 000 amu。

2.4测定法

分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μl注入液质联用仪，记录液相色谱图、一级质谱图和二级质谱图。采用比较供试品与对照品的色谱图、一级质谱图和二级质谱图的方法进行定性分析，确定供试品中添加的化学成分。如果供试品图谱成阳性结果再与对照品图谱比较后进行定量分析，见图1。

图1　氨基比林一级质谱图和二级质谱图Fig 1　Primary and secondary mass spectrum of amidopyrine

2.5线性关系考察

精密称取氨基比林对照品溶液(每1 ml含1 μg 的溶液)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ml分别置于10 ml容量瓶中以流动相稀释至刻度，制成质量浓度分别为50、100、200、400、800 ng/ml各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以样量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算回归方程为Y=1.5E+6X+21 409，r=0.998 5，结果进样量在0.05～8.00 μg/ml时，峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.6灵敏度考察

取对照品溶液“2.2”适量，加流动相逐步稀释，按“2.3.1”“2.3.2”项下条件测定，上述药物的待测量在20 ng之间时，选择离子监测质谱峰信噪比(S/N)在3左右。

2.7精密度考察

在所选定测试条件下，以浓度为200 ng/ml的氨基比林对照品溶液为考察对象，重复进样6次进行精密度实验，测得RSD=0.9%，表明该分析方法精密度良好。

2.8加样回收率考察

准确称取样品小儿清解颗粒(批号为：140107)0.3 g(3份)，按“2.1”项处理后，按“2.3.1”项条件检测后，然后在样品中按照低、中、高浓度分别加入标准样品0.05、0.20、0.80 μg，做回收率试验。结果表明，样品小儿清解颗粒加标回收率分别为89.05%、90.10%、89.89%，RSD为0.4%。

2.9测定结果

小儿清解颗粒中非法添加的氨基比林化学成分的测定:分取研磨好的小儿清解颗粒批号为：140107、141009、140107、141211共4份(n=4，按“2.1”“2.2”“2.3.1”“2.3.2”的项下方法，测定编号为样1，样2，样3，样4的样品中，结果比较供试品与对照品的色谱图、一级质谱图和二级质谱图的方法进行定性分析，确定前3个供试品中未添加化学成分氨基比林。后1个样品中含有氨基比林的含量成阳性，样品规格为：1袋10 g，经定量分析后测得氨基比林含量为1.38 μg/g，不符合规定。

3讨论

随着科学技术的进步与发展，不断更新的检测技术将使假劣药物无藏身之地。多年的检验经验证明，正确应用仪器及方法对检验掺伪药物非常重要[13-17]，检验人员应熟练掌握检验仪器的操作。

该质谱检验为有对照品的仪器检验，在保留时间一致的情况下，且在该阳性样品图谱并无杂质干扰，则无需查看出峰所对应的棒状图。如果该阳性样品图谱出峰多，且杂质分离不开，打出棒形图谱能更好的分辨出氨基比林峰。

本研究对原标准[18]使用的流动相进行了相应的调整。原标准流动相为0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸的水溶液∶乙腈(V∶V=30 ∶70)，将乙腈调整为甲醇。虽然乙腈的洗脱能力强于甲醇，且黏度小、传质快，但是乙腈的价格相对昂贵，毒性也较强。相关资料报道，用甲醇做流动相，紫外波长须设在>230 nm，乙腈则>210 nm。在本试验中，波长为280 nm，不超限，而且用甲醇替代乙腈后，经过更改流动相的比例，峰型效果很好，未影响检验结果的准确性。故采用该检验方法能更好的应用LC-MS/MS技术鉴定出小儿清解颗粒中非法添加的氨基比林。

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Liquid Chromatogram and Mass-spectrography for Rapid Determination of Illegally Added Amidopyrine in Pediatric Qingjie Particles

SUI Yi

(Food, Supplements and Cosmetics Room, Jixi Food and Drug Testing Center, Heilongjiang Jixi 158100, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a rapid accurate identification method of illegally added amidopyrine in pediatric Qingjie particles. METHODS: Illegally added acetanilide detumescence chemical drug amidopyrine from four different companies were screened by liquid chromatogram(LC) and mass-spectrography(MS), and reference substance of secondary mass spectra were compared. RESULTS: In the sample mass spectrum, there were three samples were not consistent with the reference substance of primary and secondary mass spectrum peak, and a manufacturer of sample pattern was consistent with the reference substance of primary and secondary mass spectrum peak. CONCLUSIONS: Application of LC and MS method can accurately identify whether Chinese medicine preparations contains illegal added amidopyrine, and the content of aminopyrine can be calculated accurately.

KEYWORDSLC and MS; Pediatric Qingjie particles; Amidopyrine

2方法与结果

2.1样品处理

中图分类号R985

文献标志码A

文章编号1672-2124(2016)06-0798-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.06.029

(收稿日期：2016-01-12)