安志英

(廊坊市中医医院中药房，河北 廊坊　065000)



验方煎剂中有效成分影响因素探讨Δ

安志英*

(廊坊市中医医院中药房，河北 廊坊065000)

摘要目的：探讨验方煎剂中有效成分的影响因素。方法：利用高效液相色谱技术，以选定的验方药材中芍药苷和党参炔苷含量为评价指标，分析提取温度、提取溶剂、提取方法、药材配伍等因素对其的影响。结果：50%乙醇、60 ℃水浴加热结合微波辅助法对有效成分的保留效果最好，芍药苷、党参炔苷在验方中的含量分别为42.15、0.67 mg/g，在单一药材赤芍和党参中的含量分别为39.99、0.68 mg/g。60 ℃以上水浴温度不利于芍药苷成分保留。药材配伍对党参炔苷含量的影响较小，但对芍药苷含量的影响显著。结论：在验方煎制过程中，采用有机溶剂提取、适当水浴加热及微波辅助法，有利于保留其有效成分。不同的提取对象所受到的影响因素及效果各不相同，煎制时应综合考虑药材配伍、提取对象理化性质、酸碱度等多种因素。

关键词芍药苷； 党参炔苷； 质量标准； 高效液相色谱

现代中药质量控制和评价的手段包括生物活性检测、效价检测等，虽然借鉴化学药品质量控制的模式存在一定的局限性，但对于许多临床疗效已得到充分验证的中医验方和经方而言，在煎制过程中最大限度地保留或提取其有效成分仍是质量控制的有效手段之一[1-3]。本研究以治疗慢性乙型病毒性肝炎的验方为研究对象，该方以黄芪、党参、柴胡、赤芍、当归、白花蛇色草、五味子、甘草等为主药，视患者病症予以加减，经临床验证其有较好疗效。本研究选定芍药苷和党参炔苷的含量为评价指标，以高效液相色谱法为检测手段，考察了提取溶剂、提取温度、提取方法、药材配伍对验方有效成分的影响，为中药验方煎制中多种有效成分的最大化保留提供一定的参考依据。

1材料

1.1仪器

Agilent 1200型高效液相色谱分析仪(美国Agilent公司)；Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQ-50B超声波清洗器(江苏昆山超声仪器有限公司)；MP17C-KE微波炉(美的公司)；Laborato 4000 effiencient 旋转蒸发仪(德国海道夫仪器有限公司)。

1.2药品与试剂

中药材黄芪、党参、柴胡、赤芍、当归、白花蛇色草、五味子、甘草(购于河北安国东方药城)；芍药苷与党参炔苷标准品(购于上海同田生物技术有限公司)；乙腈、冰醋酸、乙醇均为色谱纯(购于Sigma公司)；水为超纯水(由Millipore公司的Milli-QA超纯水机制得)。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液；采用梯度洗脱程序，0～8.0 min，20%乙腈；8.0～12.0 min，30%乙腈；12.0～22.0 min，40%乙腈；22.0～32.0 min，12%乙腈；流速为1.0 ml/min；柱温为25 ℃；检测波长为280 nm。

2.2试验样品预处理

选取验方主药材用于本研究，将药材粉碎成细粉，过50目筛。按验方各药材用量准确称定质量(党参15 g、黄芪30 g、甘草10 g、当归15 g、五味子10 g、赤芍20 g、白花蛇舌草10 g、柴胡10 g)，混合均匀备用。准确称取5.000 g验方预处理后药材，加50 ml双蒸水，于60 ℃水浴中浸泡30 min，微波炉小火(100 W)操作5 min。过滤后滤液减压回流至干，用流动相乙腈-1%冰醋酸水溶液(V∶V=1 ∶4)溶解并定容至10 ml，摇匀，待用。单一赤芍与党参药材样品按同一方法处理待用。

2.3芍药苷与党参炔苷混合标准溶液

分别准确称取干燥至恒质量的芍药苷、党参炔苷标准品各10 mg，用流动相乙腈-1%冰醋酸水溶液(V∶V=20 ∶80)溶解定容，配制成质量浓度为1 mg/ml的标准溶液待用。

2.4提取温度的影响

设计了常温(21 ℃)和40、60、70、80 ℃水浴共5种不同的处理状况，以水为提取剂，将验方样品按“2.2”项下方法进行处理后测定芍药苷和党参炔苷的含量。结果显示，60 ℃时芍药苷与党参炔苷提取效果最好，其测定含量分别为42.15、0.67 mg/g；60 ℃以上提取温度对党参炔苷含量的影响不大，但对芍药苷含量的影响则呈明显下降趋势，见图1。

图1　不同提取温度对验方中芍药苷和党参炔苷含量的影响Fig 1　Effects of different extraction temperature on contents of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine

2.5提取溶剂的影响

选定双蒸水和50%、70%乙醇为提取溶剂，将验方样品按“ 2.2”项下方法进行处理后测定芍药苷和党参炔苷的含量。结果显示，选用乙醇为提取剂时，芍药苷和党参炔苷的提取效率明显高于双蒸水，见图2。

图2　不同提取溶剂对验方中芍药苷和党参炔苷含量的影响Fig 2　Effects of different extraction solvent on contents of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine

2.6提取方法的影响

分别以双蒸水和50%乙醇为提取剂，设计了浸泡、超声、微波及索氏回流4种提取方法，均以60 ℃水浴加热辅助提取，对验方样品进行处理，采用高效液相色谱法测定芍药苷和党参炔苷的含量。结果显示，微波辅助提取方法对有效成分的提取效率最高，见图3。

A.双蒸水；B.50%乙醇A. double distilled water；B.50% ethanol图3　不同处理方法对验方中芍药苷和党参炔苷含量的影响Fig 3　Effects of different dealing method on contents of pae-oniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine

2.7药材配伍的影响

设计了常温浸泡、加热浸泡、超声、微波及索氏回流等5种提取方法，以50%乙醇为提取剂，对赤芍、党参及验方药材进行处理，采用高效液相色谱法同时测定芍药苷和党参炔苷的含量。结果显示，验方药材中芍药苷的含量比单一药材赤芍高，而验方药材与单一药材党参中党参炔苷含量的差异并不明显，见图4。

A.芍药苷；B.党参炔苷A. paeoniflorin；B.lobetyolin图4　单一药材与验方中芍药苷和党参炔苷含量比较Fig 4　Comparison of contents of paeoniflorin and lobetyolin between the selected prescription medicine and single medicine

验方或经方常需结合病症在药材类型或用量方面予以加减，起主要作用的有效成分具有极大的差异，煎制过程应同时兼顾保留多种有效成分。本研究尽可能贴近传统中医对中药材的煎制方法，不考虑中药制剂过程中一些特殊的处理手段和方法，同时着重考虑了煎制过程中的影响因素，而药材产地、取样部位、采集时间等因素未列入观察范围。

3.1提取温度的影响

温度等外因对提取率往往起着比较重要的作用。本研究结果显示，提取温度对芍药苷的含量存在显著的影响。水浴温度在达到60 ℃以前，提取效率随温度升高逐渐增大，到60 ℃时达峰值，随后在70～80 ℃时提取效率明显下降。表明高温时有效成分芍药苷因受热而分解，导致其含量偏低。但对于党参炔苷而言，水浴温度在达到60 ℃以前，提取效率随温度升高逐渐提高，而在60～80 ℃时温度的升高对其提取率未见明显影响。于定荣等[4]、马冰等[5]在研究中均指出，芍药苷易于水解，提取过程中应避免长期高温受热。由此可见，提取温度对不同研究对象的影响存在差异。

3.2提取方法和提取溶剂的影响

以微波提取法为例，以双蒸水、50%乙醇和70%乙醇为提取剂时，验方药材中芍药苷的含量分别为23.60、42.15、40.06 mg/g；党参炔苷含量分别为0.48、0.67、0.65 mg/g，表明50%乙醇有利于提高提取效率。在提取方法的比较中，分别以双蒸水、50%乙醇为提取剂处理样品，检测结果显示，微波法辅助提取的效率均为最高，芍药苷的含量分别为23.60、42.15 mg/g，党参炔苷的含量分别为0.48、0.67 mg/g。表明对于芍药苷和党参炔苷的提取，加热比常温更加有利，有机溶剂比水更加有利，而且在提取溶剂相同的前提下，微波辅助提取法的效果明显高于其他方法。李越等[6]、司爱永等[7]分别研究了五味子、复方四参颗粒的提取工艺，结果显示，同一药材不同提取方法得到的提取物活性的差异很大。验方制剂在制备过程中应尽可能保留各味药材的有效成分。有文献报道，单一药材有效成分的提取方法对验方药材有效成分的提取与保留有着重要参考价值，但中药验方由多种药材组成，成分复杂，因此，研究验方药材中有效成分的提取方法具有重要意义[8-12]。本研究结果证实，不同的提取方法和提取溶剂作用于同一药材，也会导致提取效率的差异。

3.3药材配伍的影响

本研究采用5种提取方法进行处理的结果显示，验方药材中芍药苷的含量均高于单一药材赤芍，表明药材配伍对芍药苷的提取有促进作用，可提高芍药苷的提取率；而验方药材与单一药材党参中党参炔苷的含量无明显差异；微波辅助提取法的效率均为最好。有研究指出，中药组方与单一药材药动学的差异可能与复方间的相互配伍以及复方组成有关[13-15]。因此，对于验方药材有效成分的提取，不仅要考虑提取工艺，而且要考虑药材配伍的影响。目前尚未发现一种提取方法对于验方药材多种有效成分的保留均具有最佳效果。

综上所述，50%乙醇比双蒸水的提取效果好，加热状态比常温状态的效果好，微波辅助提取法亦优于其他提取方法。此外，多味药材的验方中，药材配伍对有效成分的提取可能存在相互作用和影响。实际工作中，对于复杂药材配伍的验方有效成分的提取，仍需考虑提取方法、提取温度、提取溶剂及酸碱度等多种因素，进行多次正交试验来确定验方煎剂的制取方法，以确保多种有效成分的最佳保留效果。

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Discussion on Effect Factors of Active Ingredient Extraction in Empirical PrescriptionΔ

AN Zhiying

(Dept.of Traditional Chinese Medicine Pharmacy, Langfang Traditional Chinese Medicine Hospital, Hebei Langfang 065000, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To probe into the effect factors of active ingredient extraction in empirical prescription. METHODS: High-performance liquid chromatography(HPLC) were adopted, to set the content of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine as evaluation indicators, effects of extraction method, temperature, solvent and compatibility on active ingredient extraction were studied. RESULTS: 50% ethanol solution and 60 ℃ water path combined with microwave method could extract the highest rate of active ingredient. Contents of paeoniflorin and lobetyolin in the selected prescription medicine were respectively 42.15 mg/g and 0.67 mg/g; which were 39.99 mg/g and 0.68 mg/g in radix paeoniae rubra and codonopsis respectively. Temperature over 60 ℃ was not conducive to the extraction of active ingredient. Compatibility had greater influence on paeoniflorin extraction than that on lobetyolin. CONCLUSIONS: During the process, organic solvent extraction, appropriate water bath heating and microwave method are helpful for the increase of extraction efficiency of active ingredient. Different extraction objections can be influenced by different factors and the effects are different, therefore, it is necessary to comprehensively take the compatibility, physic-chemical property of objects and pH into consideration.

KEYWORDSPaeoniflorin; Lobetyolin; Quality standard; HPLC

3讨论

Δ基金项目：河北省廊坊市科技计划项目(No.2012013070)

中图分类号R932

文献标志码A

文章编号1672-2124(2016)06-0734-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.06.004

(收稿日期：2016-04-15)

*主管中药师。研究方向：中药标准化和质量控制。E-mail：605600919@qq.com