季艳菊，王林川

（1. 惠州工程技术学校，广东惠州 516000；2. 华南农业大学兽医学院，广东广州 510642）



番鸭三种细小病毒多联PCR检测方法的建立与初步应用

季艳菊1，王林川2

（1. 惠州工程技术学校，广东惠州 516000；2. 华南农业大学兽医学院，广东广州 510642）

摘 要：根据GenBank中番鸭“三周病”病毒（MDPV）、小鹅瘟病毒（GPV）的NS基因和VP基因，以及华南农业大学禽病组分离到的细小病毒型“白点病”病毒（MDWNV）的NS和VP基因序列，设计3对特异性引物，并在建立单项PCR技术的基础上，优化多联PCR反应条件（EX-Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度以及退火温度等），建立了MDPV、MDWNV和GPV三种病毒的多联PCR检测方法。本研究结果表明，该番鸭三种细小病毒多联PCR检测方法具有特异、快速、准确、敏感的特点，能同时鉴别诊断这三种番鸭细小病毒，并可直接应用于临床典型病变组织的检测。

关键词：番鸭细小病毒；多联PCR；建立；初步应用

近十年来，番鸭“三周病”（MDPV）、细小病毒型“白点病”（MDWNV）和小鹅瘟（GPV）是严重危害番鸭饲养业的传染病。这三种疾病引起番鸭临床发病的日龄相差不大，发病率及死亡率均较高，常在同一地区流行[1]，并会发生混合感染。同时该三种病毒的DNA序列相似性达到80%以上，因而临床鉴别诊断难度较大，常规诊断方法很难确诊，误诊现象严重，影响了对这三种疫病防治的有效实施。基于此，本研究在建立单项PCR技术的基础上，优化多联PCR反应条件，建立了三种病毒的多联PCR检测方法[2]，以便特异、快速、准确、敏感地鉴别诊断这三种番鸭细小病毒病毒。

1　材料与方法

1.1材料