李鹏飞，孟金柱，于雪静，庞钰莹，杜海燕，李晓明，姚晓磊，赵妙妙，吕丽华*

(1.山西农业大学生命科学学院，太谷 030801； 2.山西农业大学动物科技学院，太谷 030801)



外源性dsRNA 对蛋鸡卵泡CART基因表达及雌激素和孕酮分泌的影响

李鹏飞1，孟金柱2，于雪静2，庞钰莹2，杜海燕2，李晓明2，姚晓磊2，赵妙妙2，吕丽华2*

(1.山西农业大学生命科学学院，太谷 030801； 2.山西农业大学动物科技学院，太谷 030801)

摘要：旨在研究双链RNA(Double-stranded RNA，dsRNA)对海兰褐蛋鸡卵泡可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript，CART)基因表达及雌激素(Estrodiol，E2)和孕酮(Progestin，P)分泌的影响。选择60只20周龄海兰褐蛋鸡，全价日粮预饲30 d后，随机平均分为3个处理组：对照组(A组)、dsRNA每5 d注射1次(B组)、dsRNA仅第1天注射1次(C组)；30 d后每组各选择10只健康蛋鸡宰杀，分别采集3～5、6～8、9～12 mm卵泡，提取总RNA进行qRT-PCR检测；并对E2和P浓度进行测定。结果显示：注射dsRNA后，处理组B和C组CART表达量与对照组相比均降低，且在6～8 mm卵泡CART表达量显著低于对照组(P<0.05)；B组注射dsRNA后，可显著提高6～8、9～12 mm卵泡E2的分泌(P<0.05)；但各处理组对各卵泡P浓度无显著影响。表明体外静脉注射dsRNA可抑制蛋鸡卵泡CART的表达，并进一步通过促进卵泡细胞E2的分泌来影响卵泡的发育。

关键词：蛋鸡；卵泡；CART；双链RNA；雌激素；孕酮

蛋鸡卵泡发育过程中有成熟卵泡和未成熟卵泡之分。未成熟卵泡可分为直径<2 mm小白卵泡、3～5 mm的大白卵泡、6～8 mm小黄卵泡和9～12 mm大黄卵泡[1-2]，其中每天都有6～8 mm卵泡发育成排卵前卵泡[3-4]，经5～10 d的终分化排卵[5-6]。蛋鸡卵泡闭锁特点是胞浆内有红细胞、膜细胞和颗粒细胞侵入，多出现在2～8 mm卵泡[7]，而9～12 mm卵泡很少闭锁[6]。蛋鸡卵巢大约包含4 000个原始卵泡，每个原始卵泡都有潜力形成一枚蛋黄，但只有不足1/4卵泡能够发育成熟和排卵，其余均在卵泡发生过程中闭锁和退化。卵泡发育中，促性腺激素对促进卵泡细胞的生长和增殖以及诱导排卵具有重要作用。研究表明，E2对调节卵泡的递次发育具有重要作用，E2在垂体前叶抑制FSH和排卵诱导素(OIH)的分泌，高浓度P抑制FSH和OIH的分泌，进而抑制卵泡发育和排卵。

CART是动物体内广泛分布的内源性神经肽，研究证实CART对牛[8-9]、猪[10]、绵羊[11]卵泡颗粒细胞的生长增殖及E2的分泌具有抑制作用。课题组前期研究已证实，CART在蛋鸡卵泡中有表达，并获得230 bp鸡卵泡CART序列[12]。而dsRNA在动物组织或细胞内可抑制同源序列的基因表达，引起干扰素反应。本试验探索性研究静脉注射dsRNA对蛋鸡不同大小卵泡内E2和P浓度的影响，探讨静脉注射dsRNA的可行性及其对鸡卵泡发育的影响，为后期研究提供技术和思路上的指导。……