李　欣，李中改，张小艺，周送桂，王玉坤，冯　将，易　琼，王　鲁*

(1.贵州大学 贵州省生化工程中心，贵阳 550025；2.贵州大学 动物科学学院，贵阳 550025；3.贵州大学 药学院，贵阳 550025)



金英黄归汤对LPS介导乳腺上皮细胞TLR4信号通路中相关因子的影响

李欣1，2，李中改1，2，张小艺1，2，周送桂1，3，王玉坤1，2，冯将1，2，易琼1，王鲁1*

(1.贵州大学 贵州省生化工程中心，贵阳 550025；2.贵州大学 动物科学学院，贵阳 550025；3.贵州大学 药学院，贵阳 550025)

摘要：为了评价金英黄归汤抗LPS致炎的作用机制，作者采用ELISA法检测金英黄归汤对细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-8的影响，采用qPCR法研究药物对TLR4通路中IL-1受体相关激酶-1(IRAK-1)、肿瘤坏死因子受体6(TRAF-6)、转化生长因子激活激酶(TAK-1)、NF-κB诱导激酶(NIK)、抑制性NF-κB(IκB) mRNA的转录影响。结果显示，金英黄归汤低剂量组(39.1 μg·mL-1)、中剂量组(391 μg·mL-1)、高剂量组(3 910 μg·mL-1)能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少LPS介导的TNF-α和IL-8分泌；能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少LPS介导的IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、IκB、NIKmRNA的转录。结果提示，金英黄归汤通过抑制小鼠MECs 的TLR4/NF-κB信号通路中IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/NIK途径的活化来控制炎性因子的释放而发挥抗炎作用，而不是通过IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/IκB途径实现的，这可能是金英黄归汤的抗炎机制。

关键词：金英黄归汤；LPS；乳腺上皮细胞；TLR4信号；mRNA转录

在免疫细胞研究中Toll样受体(TLRs)能启动和调节机体炎症和免疫反应[1]，且TLR4是TLRs家族中研究最多的一种，它在脂多糖(LPS)介导的TLR4的途径中有激活髓样分化因子88(MyD88)、IL-1受体相关激酶-1(IRAK-1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、NF-κB抑制酶(IκB) 或NF-κB诱导激酶(NIK)相关因子参与信号的传导[2]，最终使NF-κB转移至核内启动相关基因的转录，细胞分泌前炎症因子TNF-α、IL-1、IL-8、IL-6等。前期研究发现小鼠MECs细胞膜上存在TLR2和TLR4受体，TLR4是小鼠MECs上LPS介导细胞因子TNF-α、IL-8分泌的主要受体[3]。

近年来有大量研究报道中药复方、中药提取物及中药有效成分对TLR4/NF-κB信号通路具有调节作用，并用以探讨中药对相关疾病治疗的分子基础[4-6]。前期研究发现金英黄归汤具有良好的抗炎作用[7]，对金黄色葡萄球菌所致乳房炎家兔血清及乳汁中IL-6和TNF-α的分泌也有显著的抑制作用[8]。……