黄　慧，刘保光，孙亚伟，马彩珲，陈丽鹏，苑　丽，潘玉善，胡功政*

(1河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002；2 河南科技学院动物科技学院，新乡 453001)



鼠伤寒沙门菌cpxR和acrB双基因缺失菌株的构建及其对抗菌药物敏感性分析

黄慧1，刘保光1，孙亚伟2，马彩珲1，陈丽鹏1，苑丽1，潘玉善1，胡功政1*

(1河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002；2 河南科技学院动物科技学院，新乡 453001)

摘要：为了探索cpxR基因对鼠伤寒沙门菌多重耐药性的调控机制，同时避免外排泵acrB的存在掩盖cpxR对其他外排泵或外膜蛋白的调控作用，利用基于Red同源重组系统的一步法失活染色体基因，用含有同源臂的线性打靶DNA片段替换目的基因，构建鼠伤寒沙门菌JS株的acrB基因缺失株JSΔacrB。然后利用噬菌体转导技术，以前期构建的cpxR缺失株JSΔcpxR∷kan为供体菌，本研究新构建的JSΔacrB为受体菌，在P22噬菌体的作用下构建双基因缺失菌株JSΔacrBΔcpxR∷kan，同时制备cpxR基因回补菌株JSΔacrBΔcpxR∷kan/pcpxR。最后用微量稀释法测定10种临床常用代表性抗菌药物对JS和各缺失株的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,成功构建鼠伤寒沙门菌的双基因缺失菌株JSΔacrBΔcpxR∷kan以及其cpxR基因互补菌株JSΔacrBΔcpxR/pcpxR。MIC结果显示，acrB基因缺失后，多西环素、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢曲松和头孢噻呋的MIC值分别降低32、4、4、16、32、4、2和128倍；双基因缺失后，多西环素、庆大霉素、阿米卡星和头孢噻呋的MIC值进一步降低2、8、2和2倍；而将cpxR基因回补之后，这4种抗菌药物的MIC值会升高4、16、2和4倍。结果表明，cpxR能调控鼠伤寒沙门菌对多西环素、庆大霉素、阿米卡星和头孢噻呋的敏感性。……