李　腾，姜　平，王　芳*，宋艳华，胡　波，范志宇，魏后军，仇汝龙，刘　星

(1.南京农业大学动物医学院，南京 210095；2.江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014)



兔肝细胞中与RHDV VP60 P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定

李腾1，2，姜平1*，王芳1，2*，宋艳华2，胡波2，范志宇2，魏后军2，仇汝龙2，刘星2

(1.南京农业大学动物医学院，南京 210095；2.江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014)

摘要：兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60 P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用，为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质，以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质，通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质。经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究。提取兔肝细胞总RNA，反转录扩增LamR基因，将其插入pGEX-6p-1载体，经IPTG诱导表达，获得GST-LamR融合蛋白，并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合。结果显示，以P2蛋白为诱饵蛋白质，免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质，其中LamR蛋白是多种病毒的受体。通过原核表达系统表达了LamR蛋白，经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用。本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60 P2蛋白的相互作用，为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索。

关键词：兔出血症病毒(RHDV)；VP60 P2亚区；免疫共沉淀；……