庞卫花　徐娜　杨敬芳　安和兵　李金巍

075100　河北省张家口市，河北北方学院附属第二医院检验科(庞卫花、杨敬芳、安和兵、李金巍)，妇产科(徐娜)



·论著·

ABO血型初筛错误及微柱凝胶法正反定型不相符原因分析

庞卫花徐娜杨敬芳安和兵李金巍

075100河北省张家口市，河北北方学院附属第二医院检验科(庞卫花、杨敬芳、安和兵、李金巍)，妇产科(徐娜)

【摘要】目的分析ABO血型初筛错误及微柱凝胶法正反定型不相符的原因。方法对2012年4月至2014年4月共计3 000例患者、送检血样及献血员标本进行ABO血型初筛，并应用微柱凝胶法进行ABO血型正反定型实验，分析初筛错误及正反定型不相符的主要原因。结果3 000例标本中初筛错误4例，错误率0.13%，其中造成初筛定型错误的原因中人为因素2例，试剂效价降低1例，冷凝集素1例。正反定型结果不相符100例，不相符率3.33%，其中因为疾病因素引起75例，占75%，因为亚型因素引起16例，占16%，其它相关治疗因素引起9例，占9%。结论加强对操作人员责任心和专业技能培训、规范操作流程、做好试剂的保存和质控工作，能够有效降低血型初筛错误率。微柱凝胶法ABO血型鉴定正反定型不符主要由疾病因素及亚型因素引起，在实际工作中可结合血清学技术，确认正确的ABO血型，从而有效减少或预防临床输血反应的发生，保证临床输血安全。

【关键词】ABO血型；初筛错误；微柱凝胶法；正反定型

ABO血型检测是直接关系到患者健康和安危的重要措施。输血时若血型不合会使输入的红细胞(RBC)发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。通过研究和输血有关的死亡病例发现，有一半以上患者的死因与输入ABO不相容的血液有直接或者间接关系，其中有1/3是因为ABO血型鉴定有误造成的。由此可见血型检测与输血反应密切相关，在输血前必须作血型鉴定。而ABO血型正反定型相符是ABO血型鉴定关键所在。但受人为因素、环境因素等影响，ABO血型初筛及正反定型结果存在一定错误率[1,2]。因此，有必要查明引起ABO血型初筛及正反定型不相符的原因，以获得ABO血型的准确定型。本研究分析了我院2年内住院患者、送检血样及献血员标本进行ABO血型初筛，并对其中出现的ABO血型正反定型不一致标本结合临床及常规血型血清学技术做进一步鉴定，对结果进行统计分析，探讨影响ABO血型鉴定准确性的各种因素，旨在从根本上减少或预防临床输血反应的发生，提高ABO血型鉴定的准确性，保证临床输血安全[3,4]。

1资料与方法

1.1一般资料选取2012年4月至2014年4月医院门诊3 000例患者、送检血样及献血员标本，送本院检验科进行ABO血型鉴定。其中男1 800例，女1 200例；年龄5～85岁，平均年龄(38.7±12.4)岁。白血病患者325例，多发性骨髓瘤患者91例，骨髓纤维化患者24例，贫血患者288例，肠癌患者164例，消化道出血患者270例，外科手术患者269例，以及其它相关疾病患者。

1.2试剂抗A、抗B血清购自上海血液生物医药有限责任公司。ABO、RhD血型定型试剂卡购自长春博讯生物技术有限责任公司。ABO标准红细胞有本科室制备。

1.3仪器免疫微柱离心机、卡式专用离心机、免疫微柱孵育箱购自达亚美公司。

1.4血型鉴定方法

1.4.1ABO血型初筛:ABO血型正定型采用纸板法。

1.4.2ABO血型正反定型:使用长春博讯ABO、RhD血型定型试剂卡将全体血样标本进行ABO血型正反定型，筛选出正反定型不符的标本。对此初次出现正反定型不符的标本重新采集，并严格按照微柱凝胶卡操作规程重复试验，以排除人为因素及技术失误。对重新采集的血样，留取唾液做进一步的血型物质鉴定。

1.4.3ABO血型正反定型不相符的进一步鉴定:考察排除人为因素后的正反定型不符标本，将其中正定型[抗A和(或)抗B]呈现阴性结果及混合凝集的红细胞标本进行吸收放散试验，从而确定受检标本A、B抗原，结合正定结果明确抗原改变引起正反定型不符。采用常规血型血清学技术对上述确定抗原改变引起正反定型不符标本正确定型。唾液血型物质检测，红细胞H物质活性检测，试管法检测红细胞与抗A1及抗AB的凝集强度。

1.5鉴定标准一系列鉴定检测均参照《全国临床检验操作规程》和《临床输血诊疗技术》进行。

2结果

2.1ABO血型初筛结果3 000例患者ABO血型初筛正确2 896例，准确率96.53%，血型错误4例，错误率0.13%。见表1。

表1　ABO血型初筛错误4例及原因分类

2.2ABO血型正反定型结果3 000例患者ABO血型正反定型不相符100例，不相符率3.33%，并且我们通过一系列鉴定检测证实，ABO血型鉴定正反不相符的主要原因是疾病因素和亚型因素，除此之外还有其它治疗相关因素的影响。100例正反定型不符的标本中因为疾病相关因素引起75例，占75%，因为亚型相关因素引起16例，占16%，其他治疗因素引起9例，占9%。见表2、3。

表2　ABO血型鉴定正反定型不相符100例

表3　ABO血型鉴定正反不相符100例原因分类

3讨论

本次调查的本院3 000例患者、送检血样及献血员标本，ABO血型初筛错误4例，错误率0.13%，主要原因：(1)人为因素：本次调查判断错误2例，说明人为因素是造成ABO血型初筛错误的主要原因，与毛桂平[5]报道一致。人为因素主要包括：操作人员粗心大意，责任心不强，专业技能不过硬等原因导致抗A、抗B标准血清滴错；试管条码勾错；样本加入错误；离心速度不适当(过度或不够)等；(2)环境因素：夏季气温高，加之试剂放置时间长容易造成试剂效价下降；冬季气温低则易导致强冷凝集素出现，造成假凝集现象[6]；(3)抗原抗体比例不合适、反应时间不充足从而导致错误判断；(4)个别患者红细胞A抗原或B抗原极度弱化，与抗A或抗B标准血清的反应会非常弱，以至于不会发生凝集，从而导致肉眼判断错误[7]。

微柱凝胶法作为一种新式血型血清学的技术，在常规血型鉴定方面，因为其反应结果可靠与易于标准化，以及特异性强等特点，被西方国家广泛用于临床的常规红细胞血型血清学检测。美国食品及药品管理局(food and drug administ ration，FDA)已批准微柱凝胶技术作为红细胞抗体检测及ABO和RhD血型鉴定的选用方法。微柱凝胶法因为抗原抗体量是恒定的，操作标准化，所以对ABO亚型、弱抗原的反应强度高于传统的试管法，具有独特的优势，目前国内也已逐步应用于临床。本次研究采用微柱凝胶法进行ABO血型正反定型检测，结果发现正反定型不相符100例，不相符率3.33%。结合临床及常规血型血清学技术，我们进一步进行ABO血型正反定型的鉴定，结果显示疾病因素和亚型因素是导致ABO血型鉴定正反不相符的主要原因。

首先是疾病因素影响。近年来，国内已有多篇由于疾病引起血型抗原性减弱，从而出现ABO血型正反定型不相符的报道，而由白血病等血液系统疾病造成的血型正反定型不相符居大多数，几乎占到了80%左右。本研究显示，在100例ABO血型正反定型不符的患者中，75例因为相关一些疾病因素所造成，占75%。由此可见，在研究ABO血型正反定型不相符的因素时，疾病因素占主要部分。特别是一些白血病的患者中，这种因素就显现的更为突出。医疗人员在治疗急性髓细胞性白血病(AML)过程中发现有少数患者存在红细胞ABO血型正反定型不相符，这与红细胞ABO血型抗原表达强度明显减弱有关，然而迄今为止有关的机制研究尚未明确[8-10]。目前主要认为白血病时由于基因突变导致H转移酶缺乏或其合成受抑，从而导致血型抗原性减弱；或者白细胞病理性增生，红细胞增生相对受抑，这也造成血型抗原性减弱。因此，恶性肿瘤和红细胞生成异常均会造成血型抗原性减弱，且恶性肿瘤患者由于恶病质引发的贫血也使红细胞数量减少，这种情况下血型抗原性出现降低。此外，恶性肿瘤时唾液粘蛋白产生过多，遮盖了红细胞表面的原位点而导致血型抗原性减弱，以上诸多因素最终导致ABO血型正反不相符。本实验研究中显示，100例ABO血型正反定型不符的患者中，因为急性髓细胞性白血病而引起53例。这种情况，不仅出现在急性白血病中，在自身免疫性溶血性贫血患者中也再次得到验证。有自身免疫性溶血性贫血的患者血液冷凝集素增高，造成了自身红细胞的凝集。我们通过低倍镜下观察到红细胞呈簇团状堆积，凝集后难于鉴别，且在低温下这种想象更明显，从实验来看，一般温度在0～4℃时最明显，而随着温度升高，会不易观察到，当温度达到37℃时，凝集现象大部分消失。然而，极少数情况下即使在37℃情况下仍可出现红细胞的凝集。所以在实验研究中，对于这类患者都要在37℃温盐水清洗3次之后再进行实验，且室温要控制在20℃以上，同时，还要配合显微镜观察。上面实验研究中显示，100例ABO血型不符的患者中，因为自身免疫溶血性贫血而引起8例，所以各种疾病因素对ABO血型鉴定正反不相符的影响不容小视。

其次是亚型因素的影响。通过分析了解临床上的一些疾病能够导致ABO抗原的减弱或者缺乏，例如白血病等。但是，在正常献血者中也会出现抗原减弱的情况，如ABO亚型。ABO亚型又叫做ABO变异型，也会造成抗原的减弱从而血型鉴定造成了困难。ABO血型亚型主要通过血型血清学试验鉴别，是以抗原性减弱为主要特征的多种表型，同人类正常血型抗原一样，它是一个人的终生遗传标志[11,12]。ABO亚型因为红细胞所携带的A或B抗原数量较少，和抗A或抗B反应非常弱，以至于不会发生凝集，所以经常会使弱A、或者弱B错误判定成为O型，导致了血型鉴定不正确。A或B亚型，如果将弱A、或者弱B的红细胞输送给O型的受血者时，就会出现溶血性的输血反应发生。ABO血型正反定型不符，对于正常献血员应首先考虑亚型，但对于患者则应综合临床情况考察，不能轻易做出亚型的结论。上面实验研究中显示，100例ABO血型不符的患者中，16例是因为亚型因素导致的ABO血型鉴定正反不相符，实验中发现的亚型，正定型时类似于O型，而反定型时又类似于A型，医疗人员经过细致的血清检测，最后确定其为Am亚型。所以无论是因为疾病因素影响，还是因为亚型因素影响而导致的正反不相符，都需要密切结合临床及血清学的特点，进行正反定型的联合应用，才可以准确判断出原因。在实际工作中可利用相比常规方法更敏感的微柱凝胶法，结合血清学技术对其筛选鉴别并正确鉴定血型，从而提高其血型定型准确性[13,14]。

为有效减少或预防临床输血反应的发生，提高ABO血型定型的准确性，保证临床输血安全，我们认为应针对原因采取以下措施：(1)对于人为因素导致的ABO血型鉴定错误，操作人员应具备高度的责任心，不断提高自身专业技能，在实际工作中应耐心细致，正确使用仪器，并定期维护保养仪器，从而保证仪器性能的稳定性；(2)尽量保证环境温度和湿度稳定，使用高效价的抗A、抗B标准血清，适当保存试剂，每次操作前仔细检测试剂批号、质量及是否在效期内，避免试剂污染、失效；(3)制订一套严格质量控制程序，本站实验室目前采用留样再测方法进行血型质量控制，操作人员应严格规范操作流程，尽量避免ABO血型鉴定错误。

参考文献

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2袁小玲，熊春梅.ABO 血型鉴定不符的因素分析及预防措施.中国输血杂志，2011，24：350-351.

3陶翠华，张真路，王文武.高效价自身冷抗体致血型鉴定和交叉配血困难的处理方法.临床血液学杂志，2011，24：201-203.

4庞桂芝，张趁利，娄白敏.ABO及RH血型鉴定困难与直接抗球蛋白试验阳性的关系探讨.中国输血杂志，2010，23：388-389.

5毛桂平.流动采血车74例ABO血型鉴定错误的原因分析.检验医学与临床，2010，7：980.

6黄守民，刘宜仲，杨玉发.献血者ABO血型初筛错误和正反定型检测不符的原因分析.检验医学与临床，2012，9：2211-2213.

7钟传村，沈奇荣.479例无偿献血者初检血型错误原因分析.当代医学，2009，15：41-42.

8曹奎杰，何鸣镝，刘峰，等.再障引起A型抗原减弱1例.临床血液学杂志，2007，4：187.

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10吴敏慧，刘毅，刘洪莉,等.ABO血型正反定型不符确认试验结果分析.临床输血与检验，2005，7：198-199.

11王献芳，冯双利，王秀凤.急性白血病致A抗原减弱伴IgG抗-E1例.中国输血杂志，2004，17：53-54.

12刘燕玉，江传慧.提高认识肿瘤患者血型变异的问题.中华现代临床医学杂志，2003，1：1033.

13熊立凡，刘成玉主编.临床检验基础.第4版.北京：人民卫生出版社，2011.77-78.

14向东.ABO亚型的检测.中国输血杂志，2010，23：577-579.

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.11.025

【中图分类号】R 457.1

【文献标识码】A

【文章编号】1002-7386(2016)11-1682-03

(收稿日期：2015-12-12)