曾林川，邓慧敏，陈 君，窦茗瀚，徐 冶.吉林医药学院公共卫生学院，吉林 吉林 303；.吉林医药学院医学科研实验室，吉林 吉林 303



Ca2+在顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞自噬反应中的作用

曾林川1，邓慧敏2，陈 君2，窦茗瀚2，徐 冶2
1.吉林医药学院公共卫生学院，吉林 吉林 132013；2.吉林医药学院医学科研实验室，吉林 吉林 132013

［摘要］背景与目的：Ca2+在维持细胞生物活性方面扮演着很重要的角色，其在细胞内的储存、释放和摄取主要受内质网调节，细胞内Ca2+浓度的稳态是维持细胞生物能量代谢、蛋白质折叠和分泌的基础条件。本研究探讨Ca2+在顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激-自噬反应中的作用机制。方法：取人卵巢癌SKOV3细胞系为研究对象，按以下步骤分组：① 探讨顺铂诱导内质网应激与自噬反应，用6 μg/mL的顺铂处理SKOV3细胞0、6、12和24 h；② 了解顺铂和毒胡萝卜内酯（thapsigargin，TG）诱导内质网应激释放的Ca2+与自噬的关系，分别用TG和顺铂处理SKOV3细胞0、9和12 h；③ 探究Ca2+对自噬的作用机制，分成对照组、顺铂组、TG组、BAPTA-AM组、顺铂联合BAPTA-AM组和TG联合BAPTA-AM组。用蛋白［质］印迹法（Western blot）检测内质网应激相关蛋白GRP78和自噬标志性蛋白LC3蛋白的表达水平；用Fluo-4钙离子荧光探针检测细胞质中的Ca2+浓度变化；间接免疫荧光染色后，用共聚焦显微镜检测LC3蛋白的表达情况。结果：SKOV3细胞经6 μg/mL顺铂作用6 h时GRP78灰度值（1.393±0.004）与其对照组（0.679±0.011）相比显著提高（t=113.2，P=0.000），在12 h时LC3灰度值（0.072±0.002）与其对照组（0.038±0.000）相比显著提高（t=25.5，P=0.000）。间接免疫荧光结果显示，顺铂（6 μg/mL）组和TG（3 μmol/L）组随作用时间的延长，细胞内LC3荧光斑点会逐渐增多，并伴随着细胞质Ca2+浓度上升。后经钙离子络合剂BAPTA-AM干预后，细胞内LC3荧光强度进一步增强。……