梁果义甘一迪刘晓航蔡祥胜

（1. 北京双鹭药业股份有限公司，北京 100043；2. 南方医科大学生物治疗研究所，广州 510515）

重组胰岛素原在毕赤酵母中高效分泌表达的研究

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（1. 北京双鹭药业股份有限公司，北京 100043；2. 南方医科大学生物治疗研究所，广州 510515）

为了提高胰岛素在酵母的分泌表达效率，首先合成了胰岛素原基因，并在其序列的N端引入了一段引导肽，构建成pPICZα-A-Pro-INS重组分泌型表达载体。将表达载体线性化处理后电击转化毕赤酵母GSll5感受态细胞，筛选获得分泌型高表达工程菌株，重组蛋白的表达水平为300 mg/L，占分泌总蛋白的40%左右。该结果表达明引导肽的存在对于在毕赤酵母中高效表达胰岛素的基因至关重要。

胰岛素；毕赤酵母；高效表达；引导肽

糖尿病是一种全身性慢性疾病，病因复杂，并发症多，治愈率低，成为国际医学的一大难题，被世界卫生组织称为不死的癌症。胰岛素是治疗糖尿病最基础、最有效的药物，也是FDA批准的第一个用于人类的基因重组药物。目前，胰岛素作为重组蛋白产品，主要有两条途径获得。一条途径是在大肠杆菌中表达胰岛素前体的包涵体，通过溶解和复性等过程获得胰岛素；另外一条途径是通过酵母表达系统，分泌表达可溶性的胰岛素前体进入培养液［1］。

毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统许多优点，例如，可对表达的蛋白进行翻译后加工与修饰、具有强的可控的醇氧化酶基因强启动子、表达载体是整合在染色体上、糖基化程度低使其所分泌的糖蛋白的免疫原性较低利于临床应用等。……