程庆灵 王敬强

（复旦大学 遗传工程国家重点实验室，上海 200438）

同源异型框蛋白Msx1的两个新的磷酸化位点的鉴定

程庆灵 王敬强

（复旦大学 遗传工程国家重点实验室，上海 200438）

同源异型框蛋白Msx1的同系物Msx2中已鉴定出磷酸化修饰位点，并且发挥着重要的生物学功能。但是对Msx1的磷酸化修饰情况还不清楚，为了对Msx1的磷酸化修饰情况进行研究。利用生物信息学的方法对Msx1的磷酸化修饰位点进行预测，进一步利用免疫沉淀和质谱技术对其进行具体实验验证。C2C12细胞中的Msx1蛋白复合物经胰蛋白酶消化后，通过高效液相色谱和质谱技术进行分离和分析。结果发现两个新的磷酸化修饰位点，分别是152位的丝氨酸和160位的丝氨酸，而且两个磷酸化位点在人和小鼠中是高度保守的。进一步，制备针对这两个磷酸化位点的特异性磷酸化抗体。磷酸化位点的鉴定以及特异性抗体的获得为进一步研究Msx1的生物学功能提供了良好的条件。

同源异型框蛋白；Msx1；磷酸化修饰；质谱鉴定

蛋白质翻译后修饰（post translation modification，PTM）是目前蛋白研究中比较受欢迎的一个重要研究方向，其中磷酸化修饰在生物体中是一种最普遍最重要的调控方式，几乎调节着生命活动的整个过程，包括细胞的增殖、凋亡和分化、信号转导、基因表达、细胞周期以及其他生命活动过程［1-3］。据统计，哺乳动物细胞内有1/3以上的蛋白质被磷酸化修饰［4］。真核生物中磷酸化主要发生在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸等残基，其比例大概为1 800∶200∶1［5］。……