刘蒲临 程德勇 缪礼鸿

（武汉轻工大学生物与制药工程学院，武汉 430023）

产几丁质酶侧孢短芽孢杆菌的筛选及其酶学性质研究

刘蒲临 程德勇 缪礼鸿

（武汉轻工大学生物与制药工程学院，武汉 430023）

筛选并鉴定高产几丁质酶的芽孢杆菌菌株，旨在研究其酶学特性为高效利用几丁质酶资源奠定基础。分离纯化产几丁质酶芽孢杆菌，将目的菌株的几丁质酶基因异源表达并纯化后研究其酶学参数。考虑到菌株的生物安全性，选择侧孢短芽孢杆菌CDY64为进一步研究对象，将其几丁质酶基因表达于大肠杆菌BL21中。酶学研究表明，纯化后的几丁质酶最适反应温度为60℃，在pH6.0-8.0范围内均表现出良好的活性；使用胶体几丁质作为底物时Km与kcat值分别为5.85 μmol/L和29.27 S-1。结果表明，侧孢短芽孢杆菌CDY64所产几丁质酶在高温下具有良好的催化能力，在体外对多种植物病原真菌表现出了良好的拮抗作用。

几丁质酶；侧孢短芽孢杆菌；酶学性质

几丁质酶可以催化几丁质的水解，广泛存在于高等动植物、微生物以及某些病毒体内［1］。自Skujins等［2］首次发现来源于链霉菌（Streptomyces）的几丁质酶可以分解黑曲霉（Aspergillus niger）和腐皮镰刀菌（Fusarium solani）的细胞壁以来，利用几丁质酶来防治植物真菌病害已经成为最主要的应用研究领域。几丁质酶和产生几丁质酶的菌株除了可以单独用于植物病虫害防治以外，也可以通过和其他抗生素与杀虫剂共同使用来减少其他化学试剂的用量，进而减少对环境和人类健康的危害。已有研究表明将内切几丁质酶和苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白同时使用可以将δ-毒素的杀虫效力提高近10倍［3，4］。……