刘瀚阳，薛宇洋，高 凯，印竹胜，牛林军，顾玉明

徐州医学院附属医院介入放射科，江苏 徐州 221003

shRNA干扰卷曲蛋白-7基因对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡的影响

刘瀚阳，薛宇洋，高 凯，印竹胜，牛林军，顾玉明

徐州医学院附属医院介入放射科，江苏 徐州 221003

目的 探讨抑制卷曲蛋白-7(FZD-7)受体基因对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 实验分3组：空白组(Blank)、阴性对照组(shNC)、FZD-7干扰组(shFZD-7)。用shNC、shFZD-7转染HepG2细胞，应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力，流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡率的变化，Western blotting检测 FZD-7、β-连环蛋白(β-catenin)、Pro-caspase-3、cleaved caspase-3、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、cIAP-1、cIAP-2、Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bad、β-肌动蛋白(β-actin)的表达。结果 转染后96 h，shFZD-7组HepG2细胞吸光度值 (0.97±0.10)较Blank组(1.49±0.06)和shNC组(1.42±0.05)明显下降(P<0.01)；流式细胞仪检测细胞凋亡率显示shFZD-7组(43.90±2.61)%较Blank组(14.12±1.39)%和shNC组(16.82±1.26)%明显升高(P<0.01)；灰度分析显示shFZD-7组cleaved caspase-3蛋白表达量较Blank组和shNC组明显升高(P<0.01)；shFZD-7组β-catenin、XIAP、cIAP-1、cIAP-2、Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达量较Blank组和shNC组明显降低(P<0.01)；shFZD-7组Bcl-2或Bcl-xL与Bax蛋白表达量比值(Bcl-2/Bax或Bcl-xL/Bax)与Blank组和shNC组比较明显降低(P<0.05)。结论 抑制 FZD-7受体基因，可抑制HepG2肝癌细胞株增殖活性并促进细胞凋亡。这一过程可能与下调凋亡抑制蛋白(IAPs)，导致caspase-3的活化增加有关；凋亡相关蛋白Bcl-2家族在此过程中也扮演了重要角色。

肝癌；凋亡；增殖；卷曲蛋白-7

原发性肝癌是成人最严重的恶性肿瘤之一，且近年来呈年轻化趋势。目前手术切除、肝动脉化疗栓塞(TACE)、射频消融治疗、肝移植被认为是有效的治疗方法。然而，这些治疗仅对极少数患者有效，且很难维持患者的生活质量[1]。因此，生物分子靶向治疗以其高效的抗肿瘤作用及其相对微弱的毒副作用，进入了人们视线。

Wnt/β-catenin信号通路是调控细胞生长、增殖和凋亡的关键通路，在胚胎发育和肿瘤发生中起着重要作用[2]。FZD-7是Wnt/β-catenin信号通路的重要受体[3]。90%的肝癌有Wnt受体FZD-7的高表达[4]。我们通过小片段发夹RNA表达载体干扰FZD-7基因，靶向抑制Wnt/β-catenin信号通路，观察HepG2肝癌细胞株增殖和凋亡的变化，并初步探讨其可能的发生机制，为FZD-7基因成为肝细胞癌有效的治疗靶点提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌HepG2细……