殷 毅平 萍1.上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科，上海市男科学研究所（上海 200001）2.上海交通大学医学院附属仁济医院嘉定分院泌尿外科



减数分裂重组关键蛋白MMLLHH11结合蛋白的酵母双杂交筛选和鉴定

殷 毅1,2平 萍1*
1.上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科，上海市男科学研究所（上海 200001）
2.上海交通大学医学院附属仁济医院嘉定分院泌尿外科

摘要目的 探寻减数分裂关键重组蛋白MLH1在精子发生中的结合蛋白。方法 以MLH1为诱饵，通过酵母双杂交系统，在小鼠睾丸组织的cDNA文库中进行筛选，寻找MLH1的相互作用蛋白并通过GST pull-down和免疫共沉淀的方法进行验证。 结果 通过酵母双杂交的筛选，在小鼠睾丸中经四缺板筛出蛋白29个，包括已知的MLH3和PSM2等。通过GST Pull-down和免疫共沉淀验证了其中一个新的蛋白RHNO1与MLH1的结合。通过Real-time PCR检测发现RHNO1在睾丸中高表达，提示RHNO1在精子发生中具有重要功能。结论 酵母双杂交系统是寻找结合蛋白的有力手段，发现了新的MLH1结合蛋白RHNO1,可能参与了减数分裂同源重组。

关键词精子发生;减数分裂;重组蛋白质类

*通讯作者,E-mail:deer16@126.com

Key woorrddss spermatogenesis;meiosis;Recombinant Proteins

男性不育是影响人类健康的重大疾病，减数分裂中同源重组异常是睾丸生精功能障碍的重要原因[1]。同源重组标记物MLH1在精子发生中的减数分裂过程中具有重要作用，但作用机制仍不清楚。为了探索MLH1在减数分裂重组交换中的作用机制，我们通过酵母双杂交技术筛选小鼠睾丸cDNA文库，寻找MLH1在同源重组中的结合蛋白并进行筛选研究，为分析MLH1在减数分裂中同源重组的作用机制提供基础。……