赵书杰, 蒋羽清, 丁　寅, 张　强, 周　栋

(南京医科大学附属常州第二人民医院 骨科, 江苏 常州, 213003)



沉默Sema6A基因对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和转移的影响

赵书杰, 蒋羽清, 丁寅, 张强, 周栋

(南京医科大学附属常州第二人民医院 骨科, 江苏 常州, 213003)

摘要:目的检测信号素6A(Sema6A)基因在骨肉瘤细胞系中的表达情况，探讨RNA干扰Sema6A基因对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤细胞株U-2OS、Saos-2及MG-63中Sema6A的mRNA表达水平。设计并合成针对Sema6A的小干扰RNA(siRNA)3条及阴性对照siRNA, 在Lipofectamine RNAiMAX介导下转染U-2OS细胞，通过qRT-PCR检测Sema6A mRNA水平表达及蛋白质印迹法检测Sema6A 蛋白水平，进而筛选出转染效率高的siRNA，CCK-8检测各组细胞活力，Transwell细胞侵袭和迁移实验检测各组细胞的侵袭及迁移能力。结果骨肉瘤细胞株中，Sema6A mRNA在U-2OS中表达最高。瞬时转染Sema6A siRNA的U-2OS细胞中Sema6A的mRNA及蛋白水平较阴性对照组均下降，与阴性对照组相比，实验组细胞的增殖、侵袭及迁移能力均增强，差异有统计学意义(P<0.05)。结论RNA干扰沉默Sema6A基因可以增强U-2OS细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

关键词:Sema6A基因; RNA干扰; U-2OS细胞; 增殖; 转移

骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤，起源于成骨间叶细胞，好发于青少年，恶性程度极高，约20%的患者在首诊时即存在转移灶，其中最常见的转移部位为肺，预后较差[1]。根据国外文献[2]的报道，骨肉瘤的发病年龄特点呈双峰分布，11～20岁为骨肉瘤发病率的第1个高峰期，而第2个高峰期发生在65岁以后。骨肉瘤治疗策略类似，包括新辅助化疗、手术切除肿瘤并重建肢体功能以及术后化疗的系统疗法。发生转移的骨肉瘤患者5年生存率仅仅为11%～29%[3]。……