苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠血脂及抗氧化能力的影响

2016-06-03李小花程赣中周凤华

中国老年学杂志 2016年8期

关键词：肝损伤苦参碱抗氧化

李小花　程赣中　周凤华

(赣南医学院显微实验室，江西　赣州　341000)

苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠血脂及抗氧化能力的影响

李小花程赣中1周凤华2

(赣南医学院显微实验室，江西赣州341000)

〔摘要〕目的探讨苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠血脂调节和抗氧化能力的影响。方法建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型，观察各组大鼠的肝脏结构，检测血清中肝损伤标志酶和血脂含量以及肝组织抗氧化酶和脂质过氧化物水平。结果低剂量组大鼠给药后的精神状态、皮毛光泽度以及食欲等一般状态均较其他组好，可有效改善肝损伤以及肝细胞脂肪变、肿胀以及坏死等状况，且能抑制慢性酒精性肝损伤大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)升高；而不同剂量的苦参碱均能明显降低慢性酒精性肝损伤大鼠血清谷草转氨酶(AST)含量，同时还可降低血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量，升高大鼠肝脏组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力，并减少丙二醛(MDA)的含量。结论低剂量苦参碱可通过调节血脂和提高机体抗氧化能力对大鼠慢性酒精性肝损伤进行保护。

〔关键词〕苦参碱；肝损伤；抗氧化；血脂调节

酒精性肝病(ALD)是引起肝硬化的重要原因，戒酒为ALD的主要治疗方式，目前尚未发现特效药，支持疗法的效果也不佳〔1〕。苦参碱是一种生物碱，在抗感染、抗病毒、抗肝癌等方面具有非常重要的药理作用〔2，3〕,但苦参碱是否对慢性酒精性肝损伤有保护作用的相关报道非常少。本研究旨在分析苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠血脂调节和抗氧化能力的影响。

1资料与方法

1.1实验动物清洁级健康大鼠Sprague-Dawley(SD)72 只，雌、雄各半，体重(120±20)g，来自宁夏医科大学实验动物中心，合格证号:SYXK(宁) 2011-0002。

1.2试剂苦参碱(纯度为99.8%，宁夏紫荆花药业股份有限公司，批号90110406)；老银川白酒(43% vol，宁夏昊王酒业有限公司)；过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒(南京建成生物工程有限公司，批号分别为20110506，20110802，20110311，20110904)。

1.3仪器Olympus CHC-212光学显微镜(日本);细胞超声波破碎机(南京贝帝实验仪器有限公司);Olympus AU2700全自动生化分析仪(日本);752紫外分光光度仪(北京中西远大科技有限公司)。

1.4方法所有准备的实验大鼠均预饲养1 w，喂以普通饲料，均自由进食与饮水，随后将其随机分为空白对照组、酒精模型组、苦参碱低、中、高剂量组(25、50、100 mg·kg-1·d-1)、苦参碱高剂量对照组(100 mg·kg-1·d-1)，每组12 只，雌雄各半。大鼠灌胃2次/d，间隔2 h，空白对照组和酒精模型组均给予0.5 ml/100 g生理盐水，而其他组分别给予相应浓度的苦参碱；2 h后，空白对照组和苦参碱高剂量对照组给予1 ml/100 g的43%葡萄糖，其他组给予43%的老银川白酒，周期为30 d。

1.5采集样本与检测指标各组大鼠在第30 天开始禁食但不禁饮，12 h后处死，于股动脉取血在室温下静置1 h，4℃，4 000 r/min离心10 min，采用全自动生化分析仪检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量。同时剖腹取肝脏全叶，称重，并取其中一叶放入10%甲醛中固定,48 h 后常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、苏木素-伊红(HE)染色、脱水、透明、封片,光学显微镜下观察各组肝脏形态学的变化。另外，再取适量冻存的肝脏，加入液氮研磨后用生理盐水作为介质制成10%的肝组织匀浆，超声破碎细胞后，4℃，2 500 r/min离心10 min 后取上清液，操作按试剂盒说明书进行，对肝脏组织匀浆上清液中CAT、SOD、GSH-PX的活力及MDA的含量进行检测。

1.6统计学方法采用SPSS17.0 统计软件进行t检验。

2结果

2.1实验大鼠一般情况空白对照组大鼠皮毛光泽度好，行动灵活，进食量及大便正常，体重增长较快；酒精模型组大鼠用酒精灌胃后反应较慢，出现步态不稳、困倦且部分呈现嗜睡的状态，大概2～3 h后才能恢复正常，而2 w后该组大鼠皮毛逐渐变粗糙，进食量也变少，体重增长较慢；苦参碱各剂量组大鼠用酒精灌胃后也出现上述酒醉症状，2 w后中，高剂量组以及高剂量对照组大鼠的精神状态差，皮毛也逐渐变粗糙且光泽度差，进食量少，体重增长慢，但低剂量组的大鼠精神状态则较好，皮毛光泽度好、食欲也较好。

2.2苦参碱对大鼠肝脏病理组织学变化的影响空白对照组的肝小叶结构清楚，肝索呈放射状排列，肝细胞排列整齐分界清，核圆居中，胞质丰富呈嗜碱性;而酒精模型组、苦参碱中、高剂量组以及苦参碱高剂量对照组的肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱坏死，并有炎细胞浸润，肝细胞肿胀可见脂肪空泡，部分肝细胞嗜酸性变，而苦参碱低剂量组大鼠肝索排列整齐，肝细胞肿胀明显减轻，有少量炎细胞浸润，只有部分肝细胞有小脂滴。

2.3苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠血清肝损伤标志酶的影响酒精模型组大鼠的AST与ALT水平均明显高于空白对照组(均P<0.05)，而苦参碱低、中、高剂量组以及高剂量对照组大鼠血清中AST的含量均明显低于酒精模型组(均P<0.05)；苦参碱低剂量组大鼠血清中ALT含量明显低于酒精模型组(P<0.05)，另外苦参碱高剂量对照组大鼠血清中ALT含量明显高于空白对照组(P<0.05)。见表1。

2.4苦参碱对慢性酒精性损伤大鼠血脂水平的影响酒精模型组大鼠血清中TC与TG水平均明显高于空白对照组(均P<0.05)。苦参碱低、中、高剂量组以及高剂量对照组大鼠血清TC和TG的含量均明显低于酒精模型组(均P<0.05)。另外，苦参碱中、高剂量组以及高剂量对照组大鼠血清中HDL含量均明显高于空白对照组与酒精模型组(P<0.05)。见表1。

2.5苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠抗氧化能力的影响酒精模型组大鼠肝脏组织中SOD、CAT和GSH-PX含量均明显低于空白对照组，而MOD含量明显高于空白对照组(均P<0.05)；苦参碱低、中、高剂量组以及高剂量对照组大鼠肝脏组织中SOD、CAT和GSH-PX含量均明显高于酒精模型组，而MOD含量低于酒精模型组(均P<0.05)；而苦参碱高剂量对照组大鼠肝脏组织中SOD和GSH-PX含量均明显低于空白对照组，且MOD含量高于空白对照组(均P<0.05)。见表2。

表1各组血清AST、ALT以及血脂含量比较(x±s,n=12)

组别AST(U/L)ALT(U/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)LDL(mmol/L)HDL(mmol/L)空白对照组148.02±25.3367.04±16.211.85±0.320.48±0.110.48±0.050.73±0.09酒精模型组217.21±49.322)106.34±23.882)2.94±0.302)0.64±0.152)0.55±0.040.68±0.10苦参碱低剂量组179.41±43.121)2)85.42±15.431)2)2.49±0.281)2)0.51±0.121)0.46±0.080.70±0.13苦参碱中剂量组168.34±33.821)89.11±20.012)2.43±0.351)2)0.49±0.091)0.49±0.090.84±0.141)2)苦参碱高剂量组152.04±39.561)90.87±20.22)2.22±0.431)2)0.49±0.101)0.48±0.070.92±0.151)2)苦参碱高剂量对照组150.43±30.341)89.06±17.222)1.82±0.371)0.44±0.131)0.47±0.061.08±0.171)2)

与酒精模型组比较:1)P<0.05；与空白对照组比较:2)P<0.05；下表同

表2各组大鼠肝脏组织SOD、CAT、GSH-PX和MOD含量比较(x±s,n=12)

组别SOD(kU/L)CAT(kU/L)GSH-PX(kU/L)MOD(μmol/L)空白对照组526.90±45.4356.02±5.34557.13±56.322.05±0.65酒精模型组258.97±29.862)34.17±5.382)365.43±51.242)5.53±0.742)苦参碱低剂量组382.43±51.901)2)43.86±4.371)2)491.58±62.321)2)4.32±0.541)2)苦参碱中剂量组490.42±42.211)2)45.43±5.321)2)468.65±40.881)2)4.23±0.631)2)苦参碱高剂量组493.45±43.091)2)49.78±4.371)2)456.08±69.541)2)4.01±0.751)2)苦参碱高剂量对照组494.08±30.081)51.98±4.511)488.08±23.341)2)3.79±0.0541)2)

3讨论

苦参碱是一种提取于宁夏特色回药材苦豆子的生物碱，具有较多的药理学作用。有研究显示苦参碱对缺血/再灌注以及内毒素造成的肝损伤具有保护作用〔4〕。本研究结果也说明低剂量苦参碱对慢性酒精性肝损伤大鼠的肝脏具有保护作用。

过多氧自由基与抗氧化酶系统(SOD和GSH-PX等)的失衡是造成氧化应激主要原因〔5〕。酒精代谢、降解的场所主要在肝脏，其可参加肝细胞的氧化应激反应，酒精进入肝脏后，一般先转化成乙醛，再转化为乙酸，最后以二氧化碳以及水的形式排出体外〔6〕。有研究显示乙醛能使肝细胞发生脂质过氧化反应破坏肝细胞结构，还能诱导自身免疫反应，造成肝细胞变性坏死以及炎症细胞的浸润〔7〕，大量饮酒使大量的酒精进入肝脏后形成大量的中间产物乙醛导致肝组织发生损伤。本研究结果说明苦参碱能提高慢性酒精性肝损伤大鼠抗氧化能力，同时具有抑制脂质过氧化的作用。另外，长期大量饮酒可导致机体血脂代谢异常，从而形成酒精性脂肪肝〔8〕。苦参碱可以降低动物体内的血脂水平〔9〕。本研究结果说明苦参碱能够对慢性酒精性肝损伤大鼠血脂代谢进行调节。

4参考文献

1王燕.酒精性肝损伤保护作用的研究进展〔J〕.科技展望,2014;(20):221.

2吴洋,王洋,马学琴,等.苦参碱对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用研究〔J〕.亚太传统医药,2014;10(19):6-9.

3张军芳,韩飞.苦参碱制剂的临床应用研究进展〔J〕.西部中医药,2012;25(5):107-10.

4马启珍,王小萍,张茜,等.苦参碱对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠机体抗氧化酶的影响〔J〕.宁夏医学杂志,2014;36(12):1089-90.

5唐美岸,何振华,张秀峰,等.苦参碱对肺纤维化大鼠肺线粒体氧化应激的影响〔J〕.广东医学,2012;33(2):182-5.

6周晓娟,王超.槲皮素对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用〔J〕.长江大学学报(自科版)医学下旬刊,2013;10(11):8-10.

7韵海霞,穆志龙,俞科贤,等.帕珠丸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝组织SOD、CAT活性及MDA含量的影响〔J〕.青海医学院学报,2014;35(1):57-9.

8唐彬,艾正琳,姚树坤,等.苦参碱对高脂-脂肪肝模型大鼠肝脏COX-2、iNOS表达的影响〔J〕.中华临床医师杂志(电子版),2013;(5):2011-5.

9张贺芳.苦参碱治疗高果糖饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝病的分子机制研究〔D〕.石家庄：河北医科大学硕士论文,2013.

〔2015-06-11修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)