丙型肝炎患者血清HCV-RNA拷贝数与甲胎蛋白异质体百分比的相关性分析*
2016-06-02杨自力马永能彭秀娟刘慧玲
杨自力，马永能，彭秀娟，刘慧玲，张 洁
(绵阳市第三人民医院检验科，四川绵阳 621000)
·论著·
丙型肝炎患者血清HCV-RNA拷贝数与甲胎蛋白异质体百分比的相关性分析*
杨自力，马永能，彭秀娟，刘慧玲，张洁
(绵阳市第三人民医院检验科，四川绵阳 621000)
摘要:目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)患者HCV-RNA与甲胎蛋白异质体百分比(AFP-L3/AFP)的相关性，分析丙型肝炎引起的肝硬化向肝癌发展的进程中HCV-RNA与AFP-L3/AFP变化特点。方法收集临床已确诊的单纯HCV患者80例，其中44例为肝硬化患者，36例为丙型肝炎肝癌组，肝硬化组进行3、6个月的随访，随访结果分为转移肝癌组及治疗有效组，选取60例健康人群作为对照组,采用病例对照研究。不同组间HCV-RNA及AFP-L3/AFP比较采用t检验。结果肝硬化组平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP为7.15×103 copy/mL、44.3%，与对照组比较(400 copy/mL、1.1%),差异有统计学意义(P<0.05)。肝硬化组平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP为8.33×109 copy/mL、3.35%、与丙型肝炎肝癌组(5.71×107 copy/mL、94.33%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。肝硬化患者3个月随访有4例发展为肝癌，6个月后有8例发展为肝癌。结论对HCV引起的肝硬化患者应联合、动态检测HCV-RNA与AFP-L3/AFP，以便早期及时发现肝癌。
关键词:丙型肝炎病毒；甲胎蛋白异质体百分比；相关性
HCV-RNA是判断病毒复制，传染性及治疗效果的良好指标[1-2],甲胎蛋白(AFP)由于其特异度和敏感度低等问题[3]，2010版美国肝病研究学会(AASLD)指南已不将AFP作为筛查指标[4]。甲胎蛋白异质体(AFP-L3)2005年已被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于肝癌的临床诊断[5]。丙型肝炎病毒(HCV)感染与肝硬化及肝癌有着密切的关系[6],但HCV-RNA与甲胎蛋白异质体百分比(AFP-L3/AFP)比值在肝硬化或肝癌中有无相关性及由肝硬化发展为肝癌的过程中AFP-L3/AFP及HCV-RNA变化，目前还未见相关报道。本研究测定80例丙型肝炎患者的血清AFP-L3/AFP及HCV-RNA，同时对44例肝硬化患者随访3、6个月测定AFP-L3/AFP及HCV-RNA水平。现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料收集2011年1月至2014年12月期间在本院被临床确诊为HCV患者80例，其中男56例，女24例，年龄为15～80岁。按临床诊断将其分为单纯HCV感染者引起的肝硬化患者44例(肝硬化组)，单纯HCV感染引起的肝癌患者36例(丙型肝炎肝癌组)，将肝硬化组进行3、6个月的随访，随访结果分为转移肝癌组及治疗有效组。80例丙型肝炎病毒感染者的确诊，依据是丙型肝炎抗体及HCV-RNA同时阳性，且均排除乙型肝炎、慢性酒精性肝炎、药物性肝炎、自身免疫性肝炎、遗传性肝病等其他肝病引起的肝脏损伤；临床诊断肝癌的标准符合《原发性肝癌诊疗规范(2011年版)》。同时选择取60例健康体检者的血清作为对照组，年龄为18～80岁。所有的患者都被告知试验目的并签署知情同意书。
1.2方法
1.2.1采集样本及保存所有研究对象均空腹采集外周血，分离血清标本后于-80 ℃保存，统一检测。
1.2.2AFP-L3检测亲和微量离心柱系统及试剂由北京热景生物技术有限公司提供。总AFP与AFP-L3由美国雅培公司提供，仪器为美国雅培i2000全自动化学发光仪。AFP-L3/AFP正常参考值为小于10%。
1.2.3HCV-RNA检测采用FQ-PCR技术，试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供，仪器为美国PE公司生产的PE 5700核酸扩增仪，先提取HCV-RNA后，在Light Cycler荧光PCR扩增仪Roche公司上进行检测。试剂配制，样本处理和循环扩增条件严格按照试剂盒说明书进行。实验结束后由电脑自动分析计算出定量结果。HCV-RNA的最低检测下限为80 copy/mL。
1.3研究随访肝硬化组分别进行3、6个月的随访，且每隔1周检测HCV-RNA与AFP-L3/AFP，同时为随访者检查B超和肝功能试验，当怀疑发展为肝癌时，采取计算机断层扫描(CT)和磁共振成像(MRI)作进一步检查，如果通过医学成像技术无法确证时，采用细针穿刺技术确证。
1.4统计学处理采用SPSS 17．0软件进行数据分析。不同组间HCV-RNA及AFP-L3/AFP比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1丙型肝炎患者与对照组HCV-RNA、AFP-L3/AFP比较80例单纯HCV患者血清平均HCV-RNA及AFP-L3/AFP分别为7.15×103copy/mL、44.3%，与对照组比较(400 copy/mL、1.1%)，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2相关性比较80例单纯HCV患者的HCV-RNA与AFP-L3/AFP呈正相关。 HCV-RNA<103copy/mL的4例，AFP-L3/AFP平均比值为2.50%；103
2.3两组HCV-RNA、AFP-L3/AFP比较肝硬化组平均HCV-RNA、AFP-L3/AFP分别为8.33×109copy/mL、3.35%与丙型肝炎肝癌组(5.71×107copy/mL、94.33%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4随访情况44例肝硬化患者3个月随访有4例发展为肝癌，6个月后有8例发展为肝癌。动态监测HCV-RNA、AFP-L3/AFP发现，HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP升高是肝硬化发展为肝癌的警戒点，比影像学早发现6～12个月。HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP比值降低或不变是病情治疗有效的标志。见表1。
表1 对肝硬化组随访3、6个月HCV-RNA及AFP-L3/AFP变化分析
3讨论
丙型肝炎是隐匿的疾病，慢性丙型肝炎患者可能发展为肝硬化、肝癌。早发现、早诊断、早治疗是提高丙型肝炎肝癌患者的最佳途径。本研究丙型肝炎患者患肝癌的风险比健康人群高。HCV患者的HCV-RNA与AFP-L3/AFP呈正相关。这表明肝细胞癌变与丙型肝炎病毒血症有关。即在一定程度内HCV-RNA越高，HCV复制传染性越强，丙型肝炎患者患肝癌的风险越大。
本研究丙型肝炎肝癌组平均HCV-RNA水平(5.71×107copy/mL)低于肝硬化组HCV-RNA水平(8.33×109copy/mL),与董西华等[7]研究报道一致。这一现象的能原因如下：(1)丙型肝炎由肝硬化进展到肝癌，大量肝细胞发生癌变坏死，丙型肝炎病毒复制活跃性减弱甚者停止复制；(2)在疾病治疗过程中，患者接受抗病毒免疫，HCV病毒复制受限或患者血清中存在PCR抑制剂[7]；(3)在疾病进展过程中，由于药物治疗或HCV自身等因素，HCV发生机构基因的改变。
HCV引起肝硬化患者不能单一只看HCV-RNA变化。即HCV-RNA降低不一定提示治疗病情控制，HCV-RNA升高也不一定是病情的加重。AFP-L3是原发性肝癌高度特异性及恶性标志物，表达AFP-L3的肝癌细胞有早期血管侵袭和肝内转移的倾向[8]，对于肝硬化患者动态联合检测HCV-RNA、AFP-L3/AFP。肝硬化患者在一段时期内HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP比值降低或不变，提示病情治疗有效。相反，HCV-RNA降低，AFP-L3/AFP比值升高，则提示患者有向肝癌发展的可能，此时有可能比其他影像技术提早6～12个月发现肝癌。
通过对肝硬化患者随访发现，动态监测HCV-RNA及AFP-L3/AFP能比影像学早发现6～12个月的肝癌。与有研究表明AFP-L3可比超声、影像早3～12个月检出基本一致[9]。但与AFP-L3可比影像学提前3年半预警HCC发生不一致[10]。可能与调查人群的个体差异、精神压力、临床用药及随访检测的频率等因素有关。
总之，丙型肝炎患者患肝癌的风险高，临床医生应动态联合检测HCV-RNA、AFP-L3/AFP。可以比其他影像技术提早6～12个月发现肝癌。
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Hepatitis C patients serum HCV-RNA copy number and AFP-L3 percentage correlation analysis*
YangZili,MaYongneng,PengXiujuan,LiuHuiling,ZhangJie
(DepartmentofClinicalLaboratory,MianyangCitythethirdPeople′sHospitalofSichuanProvince,Mianyang,Sichuan621000,China)
Abstract:ObjectiveTo investigate the HCV patients with HCV-RNA and AFP different plastid percentage (AFP-L3/AFP) correlation,analysis of liver cirrhosis to liver cancer caused by hepatitis c in the process of the development of HCV-RNA and AFP-L3/AFP change characteristics.MethodsCollected clinical confirmed simple HCV patients 80 cases,including 44 patients with cirrhosis of the liver and 36 cases of HCV liver cancer group and liver cirrhosis group were followed up at 3,6 months,follow-up results are divided into transfer of liver cancer group and treatment group,in addition to choose 60 cases of healthy people as control group.Using case-control study.Between different groups of HCV-RNA and AFP-L3/AFP compared by t test.ResultsThe liver cirrhosis group average HCV-RNA,AFP-L3/AFP for 7.15×103 copy/mL,44.3%,compared with the control group 400 copy/mL,1.1%,the difference was statistically significant(P<0.05).Liver cirrhosis group average HCV-RNA,AFP-L3/AFP for 8.33×109 copy/mL,3.35%,and HCV liver cancer group (5.71×107 copy/mL,94.33%),the difference was statistically significant(P<0.05).3 months follow-up of patients with liver cirrhosis have 4 cases for the development of liver cancer,8 cases after 6 months for the development of liver cancer.ConclusionThe patients with cirrhosis caused by hepatitis c virus (HCV) should be combined,dynamic detection of HCV RNA and AFP -L3/AFP,in order to early discover the liver cancer.
Key words:hepatitis C virus；alpha fetal protein plastid percentage；correlation
(收稿日期：2015-12-25)
DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.009
文献标识码：A
文章编号：1673-4130(2016)09-1180-02
*基金项目：绵阳市级基金资助项目(201232)；绵阳市科技局基金资助项目(14S-ZC-06)。
作者简介：杨自力，女，主管检验技师，主要从事自身免疫、分子生物学研究。
