刘宇亭　沈祥国　苏长青　孙斌　李兆申　徐灿

200433　上海，第二军医大学长海医院消化内科(刘宇亭、沈祥国、李兆申、徐灿)；第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤研究室(苏长青、孙斌)；东部战区空军机关医院(刘宇亭)



·论著·

联合使用miR-34a及miR-let7对胰腺癌细胞生物学特性的影响

刘宇亭沈祥国苏长青孙斌李兆申徐灿

200433上海，第二军医大学长海医院消化内科(刘宇亭、沈祥国、李兆申、徐灿)；第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤研究室(苏长青、孙斌)；东部战区空军机关医院(刘宇亭)

【摘要】目的探讨联合使用两种具有抑癌作用的microRNA(miRNA)同时转染人胰腺癌细胞对其生物学特性的影响。方法采用脂质体法将miR-34a及miR-let7单独或同时转染胰腺癌PANC1、SW1990细胞及正常胰腺腺泡AR42J细胞，以转染阴性对照miRNA(miR-NC)组及未转染组作为对照。应用qRT-PCR法检测各组细胞miR-34a及miR-let7的表达，MTT法检测细胞增殖，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果MiR-34a转染组、miR-let7转染组、双转染组细胞的miR-34a、miR-let7表达水平均较miR-NC转染组及未转染组显著上调，差异有统计学意义(P值均<0.05)，表明miRNA成功转染了细胞。双转染组的PANC1、SW1990细胞增殖活性分别为(0.665±0.010)%、(0.638±0.030)%，较miR-NC转染组的(0.974±0.030)%、(0.971±0.050)%，miR-let7转染组的(0.888±0.050)%、(0.863±0.060)%显著被抑制，差异有统计学意义(P值均<0.05)，较miR-34a转染组的(0.795±0.060)%、(0.793±0.060)%下降，但差异无统计学意义。AR42J细胞的增殖活性无显著变化，差异无统计学意义。PANC1细胞miR-34a转染组、miR-let7转染组的穿膜细胞数分别为(103.70±3.28)、(100.70±1.76)个/200倍视野，较miR-NC转染组的(231.30±2.60)个/200倍视野及未转染组的(153.70±2.60)个/200倍视野显著减少，双转染组穿膜细胞数为(61.67±3.18)个/200倍视野，又较两个单转染组显著减少，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。细胞迁移实验与侵袭实验的结果一致。SW1990细胞侵袭及迁移能力的变化与PANC1一致。PANC1细胞的miR-34a转染组、miR-let7转染组、双转染组、miR-NC转染组、未转染组的细胞凋亡率分别为(16.66±1.27)%、(15.46±0.33)%、(23.35±1.80)%、(9.33±0.31)%、(8.83±0.36)%。两单转染组的细胞凋亡率较miR-NC转染组、未转染组显著增加；双转染组又较miR-let7组显著增加，差异有统计学意义(P值均<0.05)，而双转染组与miR-34a转染组的差异无统计学意义。结论双转染的胰腺癌细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭力均较单转染细胞显著下降，而细胞凋亡率较单转染细胞显著增加，双转染能够发挥更加显著的协同抗肿瘤作用。

【关键词】胰腺肿瘤；细胞系，肿瘤；miR-34a；miR-let7；转染；分子生物学

胰腺癌恶性程度高,手术切除率低，预后差,总体5年生存率不到5%[1]。肿瘤基因治疗及免疫治疗的出现为人们攻克胰腺癌提供了新的思路和视野。microRNA(miRNA)是一种高度保守的短链非编码RNA，能够在转录后水平调节基因的表达。到目前为止，已有超过1800余种miRNA被陆续报道[2-4]，且大量的研究已经证实miRNA的异常表达与肿瘤的发生相关[5]，从而为肿瘤的治疗提供了新的方向。……