曾　莉　乐音子　李文林　颜　帅　卞尧尧　宗　阳

(南京中医药大学，江苏　南京　210023)



脂多糖对原代大鼠腹膜间皮细胞IL-1β和IL-6表达的影响

曾莉乐音子1李文林颜帅1卞尧尧宗阳

(南京中医药大学，江苏南京210023)

〔摘要〕目的研究原代腹膜间皮细胞(PMCs)对不同浓度脂多糖(LPS)刺激的反应效果，探讨术后腹腔粘连体外细胞最佳造模方法。方法运用不同浓度LPS于不同时间点刺激PMCs，ELISA法检测各组细胞上清液中白介素(IL)-1β、IL-6蛋白含量，qRT-PCR检测IL-1β、IL-6 mRNA水平，扫描电镜观察LPS刺激前后PMCs的活性变化情况。结果ELISA测得各组大鼠PMCs培养上清液IL-1β和IL-6浓度随着培养时间推移和LPS浓度增加而表现出明显差异(P<0.01)，尤其以24 h、10 μg/ml为LPS最佳刺激时间和最佳刺激浓度；qRT-PCR实验中 LPS最佳刺激时间为24 h，但是最佳刺激浓度为5 μg/ml；正常PMCs扫描电镜下表面被丰富的微绒毛覆盖；LPS刺激后PMCs剥脱、肿胀明显，具有细胞间隙，偶见基底膜。结论LPS能够刺激大鼠PMCs诱发炎症损伤，进一步放大炎症反应，模拟术后腹腔粘连微环境，作为术后腹腔粘连体外细胞模型。

〔关键词〕腹腔粘连；腹膜间皮细胞；IL-1β；IL-6；脂多糖

腹膜间皮细胞(PMCs)具有调节、合成纤溶成分，分泌多种细胞因子以维持腹腔内局部微环境的作用。PMCs的完整性及功能正常与否是腹腔粘连形成的关键因素〔1〕。术后氧化应激和炎症因子等因素的影响下，PMCs增殖和修复的数目与术后腹腔粘连程度呈正相关。本实验拟以脂多糖(LPS)刺激PMCs，观察并探讨大鼠PMCs对LPS的刺激效果，寻找腹腔粘连体外模型最佳造模方法以及LPS的最佳刺激时间和剂量。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1动物雄性清洁级别SD 大鼠(原代细胞用)，体质量 160~180 g，由上海杰思捷实验动物有限公司提供，许可证号：SCXK(沪)2012-0006。

1.1.2试剂DMEM/F12培养基(LOT：8113397，Gibco)，胎牛血清(LOT：1133067，Gibco)，青霉素、链霉素(Gibco)，LPs(Escherichia coli 0111：B4，L4391-1MG，Sigma，USA)，D-Hank液体(LOT：8113400，Gibco),0.25% 胰蛋白酶-EDTA(南京凯基生物科技发展有限公司)，大鼠白介素(IL)-1β、IL-6 ELISA试剂盒(上海巧伊生物科技有限公司)，多聚甲醛(天津市科密欧化学试剂有限公司)，多聚赖……