吴　波

(湖北省武汉市妇女儿童医疗保健中心 妇产科, 湖北 武汉, 430071)



子宫颈腺癌高危型人乳头状瘤病毒p16INK4A蛋白表达情况

吴波

(湖北省武汉市妇女儿童医疗保健中心 妇产科, 湖北 武汉, 430071)

摘要:目的探讨子宫颈腺癌高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)感染检测及p16INK4A蛋白表达的临床意义。方法选取25例宫颈上皮内瘤变CINⅠ、30例CINⅡ、35例CINⅢ、24例浸润性腺癌，同时选取35例正常宫颈组织(慢性炎症)患者。采用免疫组织化学方法检测组织中p16INK4A蛋白表达情况，并应用第二代杂交捕获法(HC-2)对13种HR-HPV DNA进行检测。结果宫颈上皮内瘤变CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织、浸润性腺癌HR-HPV感染阳性率和p16INK4A蛋白表达阳性率均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05)；宫颈组织中HR-HPV感染阳性率与p16INK4A蛋白表达为显著正相关性(P<0.05)。结论高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)导致的宫颈恶化转化与p16INK4A蛋白表达密切相关，采用p16INK4A与HR-HPV联合诊断有利于提高子宫颈癌及CIN阳性预测值。

关键词:子宫颈腺癌; 宫颈上皮内瘤变; 高危型人乳头状瘤病毒; p16INK4A蛋白

子宫颈癌包括鳞癌与腺癌[1]，子宫颈腺癌包括宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈微浸润腺癌、宫颈浸润性腺癌。宫颈腺上皮良性病变与原位腺癌、浸润性腺癌鉴别存在一定的困难，尤其是活检病例，难度更大。p16INK4A蛋白是一种重要的抑癌基因，与高危型人乳头状瘤病毒有关，大部分子宫颈腺癌及上皮内瘤变的发生、发展与HPV感染、p16INK4A蛋白表达密切相关，可将p16INK4A作为诊断子宫颈癌变的重要指标[2]。本研究对本院收治的25例宫颈上皮内瘤变CINⅠ、30例CINⅡ、35例CINⅢ、24例浸润性腺癌及35例正常宫颈组织者的临床资料进行分析，探讨子宫颈腺癌组织中HR-HPV感染及p16INK4A蛋白表达的情况，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月—2014年1月本院门诊活检及住院手术切除宫颈石蜡包埋组织149例，年龄20～67岁，平均年龄(34. 21±10.36)岁；病程1个月～14年，平均病程(3.54±0.52)年；宫颈上皮内瘤变CINⅠ25例，CINⅡ30例，CINⅢ35例，浸润性腺癌24例，正常宫颈组织(慢性炎症)35例。标本采集前，患者未接受相关化疗、放疗。5组患者一般资料比较无显著差异(P>0.05)，具可比性。

1.2方法

1.2.1HR-HPV DNA检测：采用第2代杂交捕获法(HC-2)进行检查，仪器由美国Digene公司提供，采样刷在宫颈管中旋转3周，保留10 s后取出，样品采集需要在宫颈活检和手术切除前进行。将采样刷置于样本转移培养基保存液中，保存温度为4 ℃, 严格按照试剂说明书进行，共检测13种HR-HPV[3]。

1.2.2不同子宫组织中p16INK4A蛋白检测：由美国Santa Cruz公司提供鼠抗人p16INK4A单克隆抗体，由北京中山生物技术有限公司提供SP免疫染色试剂盒。将p16INK4A一抗稀释为1︰80, PBS液代替一抗作阴性对照，以阳性乳癌切片作为阳性对照。p16INK4A阳性染色呈黄色或棕黄色，胞浆、胞核着色，在400倍镜下观察切片，重点观察10个代表性视野，计数500个中阳性细胞数，取平均值[4]。弱阳性(+)：阳性细胞10%～30%, 染色强度稍弱，少量细胞着色；中度阳性(2+): 阳性细胞30%～60%, 胞核和胞浆着色；强阳性(3+): 阳性细胞≥60%，胞核与胞浆均着色，细胞染色较深。阴性：阳性细胞<10%，染色强度与背景颜色无明显差异。

1.3统计学方法

将本组研究数据收集整理后录入Excel, 建立数据库，在统计学软件SPSS 18.0数据包中对研究数据做处理和分析，应用百分率[n(%)]描述计数资料，组间差异经卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同组织中HR-HPV检查结果比较

CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ及浸润性腺癌HR-HPV检查阳性率无显著差异(P>0.05), 但均显著高于正常宫颈组织患者(P<0.05), 见表1。

表1　不同组织中HR-HPV检查结果比较

与正常宫颈组织比, *P<0.05。

2.2不同组织中p16INK4A蛋白表达情况比较

CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及浸润性腺癌p16INK4A蛋白表达阳性率显著高于正常宫颈组织，CINⅡ、CINⅢ及浸润性腺癌阳性率显著高于CINⅠ(P<0.05)，3组患者阳性率比较无显著差异(P>0.05)。CINⅠ与正常宫颈组织中p16INK4A以阴性表达为主，少量细胞胞核着色；其他3种组织以中、强阳性表达为主，为胞浆、胞核着色。见表2。

表2　不同组织中p16INK4A蛋白表达情况比较

与CINⅠ比, *P<0.05; 与正常宫颈组织比, #P<0.05。

2.3宫颈组织中p16INK4A蛋白表达与HR-HPV感染相关性分析

宫颈组织中HR-HPV感染阳性率与p16INK4A蛋白表达率呈正相关性(rs=0.565,P<0.05)，见表3。

表3　p16INK4A蛋白表达与HR-HPV感染相关性分析

3讨论

子宫颈癌是临床肿瘤科常见疾病，好发于30～55岁女性患者，临床表现为阴道流血、尿频、尿急、贫血、便秘、下肢肿胀、器官衰竭等，其发病原因和机制十分复杂，迄今尚未完全清楚，可能与病毒感染、性行为、分娩、营养不良、卫生条件差等因素有关[5]，直接影响患者正常生活与工作。人乳头状瘤病毒(HPV)是一种嗜上皮性病毒，在人和动物中广泛分布，具有较高的特异性，可引起人类良性肿瘤与疣。生殖道感染HPV常见型为6、11、16、18，其中16、18属于高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)[6]，也是感染率最高的HPV型。数据[7]显示，约99%宫颈癌组织中可以检测出HPV16、18。当子宫颈受HPV16、18持续性侵袭感染时，将DNA整合在宿主细胞基因组中，病毒DNA上含有完整的E6、E7癌基因，其表达E6、E7原癌蛋白可引起自身调节，并导致宿主基因表达失调，干扰正常细胞周围调控机制，使子宫颈上皮细胞出现恶变。HC-2阳性能反映出HR-HPV当前感染状态，仅以HR-HPV感染阳性率对CIN和SCC进行筛查，可能导致误诊[8]。

本研究中，采用HC-2对13种HR-HPV DNA进行检测，主要包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59及HPV68等，结果显示CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及浸润性腺癌组织感染阳性率显著高于正常宫颈组织(P<0.05), 提示当HR-HPV持续感染并整合入宿主细胞才可导致宫颈上皮恶化，一过性感染并不能引起CIN。在应用HC-2时，无法对HPV游离状态、整合于宿主细胞进行鉴别，可见仅对HR-HPV感染进行检测，CIN阳性预测值相对较低，对子宫颈癌筛查也存在一定的局限性。

p16INK4A是人体中重要的抑癌基因，在机体抗癌保护方面发挥着十分重要的作用。p16INK4A蛋白在宫颈上皮细胞恶性转化前已出现[9]，在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ、宫颈癌、宫颈炎组织中表达水平也不相同。随着宫颈癌前病变进展，p16INK4A表达水平上升。尽管p16INK4A蛋白是一种抑癌基因，但其在子宫颈癌中表达水平较高，正常细胞受到相关因素干扰转化为肿瘤细胞过程中，人体可通过大量分泌p16INK4A蛋白，抑制正常细胞癌变。另一方面，肿瘤细胞的“逃避机制”使p16INK4A蛋白起到“癌基因”的作用，进而出现肿瘤分级越高，p16INK4A表达水平就越高的现象。p16INK4A蛋白及产物在多数原发性癌细胞中缺失，但在HPV感染的子宫颈癌及癌前病变中表达水平较高[10]。本研究结果显示，p16INK4A蛋白在CIN和浸润性腺癌组织中阳性率高于正常宫颈组织，HR-HPV感染阳性率与p16INK4A蛋白表达率呈显著正相关(P<0.05), 可作为HPV基因表达和活动的标志物，并作为子宫颈早期诊断的辅助指标。在临床子宫颈癌诊断中，可以将HPV感染检测和p16INK4A蛋白表达进行联合筛查，大大提高子宫颈癌诊断准确性。

综上所述，HR-HPV导致宫颈上皮恶性转化与p16INK4A蛋白表达具有一定的联系，p16INK4A可准确地鉴别子宫颈恶性与良性疾病，提高CIN阳性预测值，将p16INK4A表达与HR-HPV感染阳性率联合检测子宫颈癌，有利于提高诊断准确性。

参考文献

[1]陈琼, 屈王蕾, 杨子英, 等．高危型人乳头瘤病毒感染后TopoⅡα和p16INK4A蛋白的表达及诊断价值[J]. 中国微生态学杂志, 2013, 25(1): 25.

[2]王华, 蔡红兵, 郭广林, 等. 高危型HPV负荷量和p16INK4A蛋白监测评估宫颈锥切术治疗CIN[J]. 肿瘤学杂志, 2012, 18(9): 700.

[3]程静新, 姚立丽, 沈谷群, 等. p16INK4A蛋白及HPV感染与宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌的关系研究[J]. 现代妇产科进展, 2011, 20(8): 624.

[4]傅小一, 张子雯. p16INK4A蛋白及HPV感染与宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌的相关性分析[J]. 中国老年学杂志, 2014, 23(15): 4138.

[5]王静芳, 郝敏, 赖炜玲, 等. p16INK4A在宫颈液基细胞学涂片中的表达及意义[J]. 中国药物与临床, 2015, 09(5): 618.

[6]刘艳君, 臧春逸. p16INK4A、Ki-67在宫颈上皮病变组织中的表达规律及其与HPV负荷量的相关性研究[J]. 北京医学, 2011, 33(11): 904.

[7]陈伟芳, 张江宇, 李荔, 等. 宫颈病变组织中p16蛋白表达及其与人乳头瘤病毒感染的关系[J]. 中华妇幼临床医学杂志: 电子版, 2009, 5(6): 572.

[8]杨君, 周德平, 王彬, 等. 宫颈上皮内瘤变组织中p16蛋白表达与HR-HPV病毒载量的相关性研究[J]. 实用妇产科杂志, 2014, 30(1): 43.

[9]祝莉. 宫颈上皮内瘤变组织中p16蛋白表达与HR-HPV病毒载量的相关性研究[J]. 医学临床研究, 2015, 23(4): 804.

[10]高宝莲, 钱萍, 马祯一, 等. 宫颈鳞状上皮病变中人乳头瘤病毒L1蛋白与p16、Ki-67的表达及意义[J]. 中国妇幼保健, 2015, 30(7): 1109.

Expression of p16INK4A protein in cervical adenocarcinoma patients with high-risk human papilloma virus

WU Bo

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,WuhanMaternalandChildrenMedicineCareCenter,Wuhan,Hubei, 430071)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore detection of high-risk human papilloma virus (HR-HPV) infection and expression of p16INK4A protein in patients with cervical adenocarcinoma. MethodsTwenty five cases of cervical intraepithelial neoplasia CIN Ⅰ, 30 cases of CIN Ⅱ, 35 cases of CIN Ⅲ, and 24 cases of infiltrating adenocarcinoma as well as 35 cases of normal cervical tissue (with chronic inflammation) were selected and detected by immunohistochemical method for expression of p16INK4A protein and the second generation of hybrid capture technique (HC-2) for DNA in 13 types of HR-HPV. ResultsThe positive infectious rates of HR-HPV and positive expression rates of p16INK4A protein in cervical intraepithelial neoplasia CIN Ⅰ, CIN Ⅱ, CIN Ⅲ tissues and infiltrating adenocarcinoma tissues were significantly higher than those in the normal cervical cells (P<0.05). Positive rate of HR-HPV infection was positively correlated with p16INK4A protein expression in cervical tissues (P<0.05). ConclusionCervical deterioration caused by HR-HPV is closely related with p16INK4A protein expression, and the combined diagnosis of p16INK4A protein and HR-HPV can improve the positive predictive values of cervical cancer and CIN.

KEYWORDS:cervical adenocarcinoma; cervical intraepithelial neoplasia; high-risk human papilloma virus; p16INK4A protein

中图分类号:R 737.33

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2016)05-100-03

DOI:10.7619/jcmp.201605030

收稿日期:2015-12-10