田培燕　罗国忠邓祖国　张玉娟　杨小军　(黔南民族医学高等专科学校生理教研室，贵州　都匀　558000)



白花刺对糖尿病肾病大鼠的降血糖及肾脏保护作用

田培燕罗国忠1邓祖国张玉娟杨小军(黔南民族医学高等专科学校生理教研室，贵州都匀558000)

〔摘要〕目的研究白花刺对糖尿病肾病( DN)大鼠降血糖及肾脏保护作用。方法2014年9月选择重庆市中药研究院实验动物研究所供应的健康清洁级雄性SD大鼠60只，从中选择40只大鼠制作DN大鼠模型，根据随机数字法分成DN组20只及白花刺治疗组20只，另20只正常大鼠为正常对照组。对比各组的肾重/体重及血浆、肾组织的超氧化物歧化酶( SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶( GSH－Px)活性水平，及治疗前后的血糖和体重，以及尿蛋白、尿素氮( BNU)、尿肌酐( Cr)指标水平，分析治疗后DN大鼠的肾脏形态学变化。结果白花刺治疗组与DN组的肾重/体重显著大于正常对照组，血浆、肾组织的SOD和GSH－Px活性水平显著低于正常对照组(均P＜0．05)。同时，白花刺治疗组的肾重/体重显著小于DN组，血浆、肾组织的SOD和GSH－Px活性水平显著高于DN组(均P＜0．05)。白花刺治疗组与DN组在治疗前后的血糖、尿蛋白、BNU及Cr水平均分别显著高于正常对照组，两组治疗后的体重显著低于正常对照组(均P＜0．05)。白花刺治疗组在治疗后的血糖、尿蛋白、BNU及Cr水平均分别显著低于DN组，体重显著高于DN组(均P＜0．05)。利用白花刺治疗后DN大鼠后，经光镜和电镜显示其肾脏形态学变化较正常对照组不明显。结论白花刺对于DN大鼠具有一定的降血糖功能，还可发挥肾脏保护作用，效果明显，值得深入研究。

〔关键词〕白花刺;糖尿病大鼠;降血糖;肾脏保护作用

1黔南州中医院病理科

第一作者:田培燕( 1970－)，女，副教授，主要从事内分泌代谢基础与临床、体质人类学方面的研究。

糖尿病肾病( DN)发病机制比较复杂，可能是由于多因素的共同作用而导致，而自由基的作用相对更为明显〔1〕。Kandasamy等〔2，3〕亦指出，未发生肾脏形态学变化的糖尿病早期时，肾脏超氧化物歧化酶( SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶( GSHPx)活性即已明显下降，此时，自由基代谢趋于紊乱，机体内脂质过氧化进程加速，最终损伤基底膜，致使肾功能障碍。白花刺作为一种中药材，其对抗氧自由基作用越来越受到学者重视，本文通过分析其对于糖尿病大鼠产生的降血糖以及肾脏保护作用，旨在寻找防治DN的潜在药物。

1材料和方法

1. 1一般资料2014年9月选择重庆市中药研究院实验动物研究所供应的健康清洁级雄性SD大鼠60只〔批号: SCXK(渝)〕，体重150～200 g，平均( 183．6±11．4) g。从中选择40只大鼠制作DN大鼠模型，将大鼠适应性喂养5 d后，用0．01%柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液( pH4．5)将STZ配成5%的溶液，按55 mg/kg的剂量尾静脉注射，正常对照组注射柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液，每只注射0．25 ml，48 h后尾静脉采血测空腹血糖，血糖值≥16．7 mmol/L为造模成功。另20只正常大鼠则注射等量的生理盐水。1 w后，自大鼠尾静脉采血并检测血糖水平，40 只DN大鼠模型的空腹血糖水平均＞16．7 mmol/L。将40只DN大鼠模型根据数字法分成DN组20只及白花刺治疗组20只，另20只正常大鼠为正常对照组。各组均常规喂食，不应用胰岛素，在体重及日常喂养方面，均无统计学差异( P＞0．05)，有可比性。

1. 2研究方法将白花刺干燥后，打碎，适量水量煎煮，过滤，药渣加水煎煮，过滤，合并两次提取液进行浓缩至浓度为0．35 mmol/L，保存备用。白花刺治疗组给予120 mg·kg－1·d－1灌胃治疗8 w。DN组及正常对照组予以等量生理盐水灌胃处理8 w，期间各组均常规饲养。治疗第8周后，通过代谢笼采集24 h尿液样本，称重之后股动脉穿刺取血将所有大鼠断头处死，将其一侧肾脏取出，并除去包膜称重，采集3～5块1 mm× 1 mm的肾皮质，经生理盐水冲洗、磷酸盐缓冲液进行冲洗，再利用4%甲醛固定1．25%的戊二醛液进行固定，行光电镜检查。其中血糖检测通过德国保灵曼公司生产的快速血糖仪操作，尿蛋白检测使用MA－4210尿液分析仪测定，尿素氮( BNU)使用酶耦联速率法测定，尿肌酐( Cr)通过苦味酸法检测，而血浆及肾组织匀浆SOD活性通过邻苯三酚氧化法检测，GSH－Px通过硫代巴比妥酸比色法检测。

1. 3观察指标对比各组糖尿病大鼠在治疗前后的肾重/体重及血浆、肾组织的SOD和GSH－Px活性水平，治疗前后的血糖和体重以及尿蛋白、BNU、Cr指标水平，分析治疗后糖尿病大鼠的肾脏形态学变化。

1. 4统计学方法采用SPSS13．0软件进行χ2检验、t检验。

2结果

2. 1各组治疗后的肾重/体重及血浆、肾组织的SOD和GSHPx活性水平对比白花刺治疗组与DN组的肾重/体重显著大于正常对照组，血浆、肾组织的SOD和GSH－Px活性水平显著低于正常对照组(均P＜0．05)。同时，白花刺治疗组的肾重/体重显著小于DN组，血浆、肾组织的SOD和GSH－Px活性水平显著高于DN组(均P＜0．05)，见表1。

2. 2各组治疗前后的血糖、体重及尿蛋白、BNU、Cr指标水平对比白花刺治疗组与DN组在治疗前后的血糖、尿蛋白、BNU 及Cr水平均分别显著高于正常对照组，两组治疗后的体重显著低于正常对照组(均P＜0．05)。白花刺治疗组与DN组在治疗前的血糖、体重及尿蛋白、BNU、Cr等指标水平相比，无统计学差异( P＞0．05)。白花刺治疗组在治疗后的血糖、尿蛋白、BNU及Cr水平均分别显著低于DN组，体重显著高于DN组(均P＜0．05)，见表2，表3。

2. 3治疗后糖尿病大鼠的肾脏形态学变化分析治疗后经光镜检查结果显示，DN组大鼠的肾小球体积较正常对照组普遍更大，而白花刺治疗组则介于DN组及正常对照组之间。DN组大鼠的系膜细胞及基质细胞增多，但白花刺治疗组则与正常对照组相比差异不大。电镜检查结果显示，DN组肾小球基底膜发生弥漫性增厚，且系膜区扩大，白花刺治疗组发生轻度的系膜增生，且基底膜增厚并不明显，较正常对照组差异不明显。

表1各组肾重/体重以及血浆、肾组织的SOD和GSH-Px活性水平对比(±s，n=20)

表1各组肾重/体重以及血浆、肾组织的SOD和GSH-Px活性水平对比(±s，n=20)

与正常对照组比较: 1) P＜0．05;与DN组比较: 2) P＜0．05;下表同

组别　　肾重/体重(×10－3)血浆( IU/ml)肾组织( IU/100 mg) SOD　GSH－Px SOD　GSH－Px正常对照组　6．1±1．4　30．9±5．4　49．6±2．4　28．7±3．5　43．7±3．7 DN组　10．9±1．81)　15．3±4．81)　29．8±4．11)　11．9±3．41)　24．8±2．61)白花刺治疗组　8．4±0．61) 2)　25．1±3．61) 2)　40．4±5．31) 2)　21．6±4．31) 2)　37．8±1．81) 2)

表2各组治疗前后的BUN、Cr等指标水平对比(±s，n=20)

表2各组治疗前后的BUN、Cr等指标水平对比(±s，n=20)

组别　　尿蛋白( mg/24 h)BUN( mmol/L)Cr( mmol/L)治疗前　　治疗后　治疗前　　治疗后　治疗前　　治疗后正常对照组　3．1±1．4　3．1±1．4　6．3±0．5　6．3±0．5　84．6±12．3　84．6±12．3 DN组　22．3±11．71)　19．7±13．21)　25．8±2．41)　23．3±5．11)　168．2±15．41)　156．4±20．21)白花刺治疗组　21．9±10．51)　9．5±2．61) 2)　25．6±3．11)　19．7±3．31) 2)　169．1±12．31)　132．3±12．61) 2)

表3各组治疗前后血糖、体重比较(±s，n=20)

表3各组治疗前后血糖、体重比较(±s，n=20)

组别　　血糖( mmol/L)体重( g)治疗前　　治疗后　治疗前　　治疗后正常对照组　7．5±2．5　 7．5±2．5　 300．6±23．7 300．6±23．7 DN组　28．3±2．71)　26．2±4．61)298．9±15．6 204．9±32．51)白花刺治疗组28．5±3．21)23．7±2．71) 2)302．4±21．2277．6±27．41) 2)

3讨论

临床上，DN通常是糖尿病的一种常见微血管并发症，具有高达45%的发病率〔4〕。而若糖尿病患者发生肾小球基底膜的增厚及系膜区等处细胞外基质增厚等相关病理改变，往往预示着病情已难以逆转，甚至是导致患者死亡的重要诱因〔5〕。加之DN发病机制至今尚未完全明晰，且无理想治疗措施，缺乏药效针对性强的药物，因此，寻找对DN疾病更为有效的药物已成为临床重点关注的课题之一。近年来，随着国内学者对祖国医学的深入了解，传统中药材的降血糖作用已越来越广泛地应用于临床治疗过程中〔6〕。本研究结果提示DN大鼠的肾功能已发生一定程度的损害，虽经过白花刺等药物治疗，较正常大鼠的肾功能仍有差距。同时，经过白花刺治疗后的DN大鼠其肾脏功能有所恢复，亦提示了白花刺对于DN大鼠的肾脏具有较大的保护作用，其提升了大鼠的血浆和肾脏的抗氧化活性，缓解了大鼠自由基代谢的紊乱状态，并抑制脂质的过氧化进程，最终抑制了基底膜增厚和系膜增生，有效避免病情进一步发展而造成的肾脏损害〔7，8〕。此外，本研究结果还表明对DN大鼠实施白花刺治疗，具有效果一定的降血糖作用，同时还可改善DN大鼠的肾功能指标水平。究其原因，笔者认为这主要是白花刺中富含维生素C、B2、B3、B6、D3以及β－胡萝卜素等物质，均为有效的抗氧化剂，能够较好地对抗氧自由基，抑制机体内脂质的过氧化，强化免疫系统功能，提升抵抗力，还可转化为维生素A，有效保持器官内腔黏膜的正常功能，增强泌尿系统的相关功能〔9，10〕。本研究结果提示应用白花刺治疗DN时可联用其他如胰岛素等降糖药物，从而获得最佳疗效。此外，白花刺可以较好地延缓DN大鼠的DN进展〔11〕。Zhou等〔12〕报道，利用白花刺提取物对糖尿病实验大鼠进行处理，能获得较好的防治DN的作用，与本文的报道基本一致。

4参考文献

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3王艳，李柯桢，宋起，等．厄贝沙坦对血管生成素样蛋白2在糖尿病大鼠肾脏表达的影响〔J〕．中华肾脏病杂志，2014; 30( 8) : 609－13．

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8王自润，张慧宇，郭敏芳，等．糖克煎剂对糖尿病大鼠肾保护作用及TGF－β1/smad4表达的影响〔J〕．中国中西医结合杂志，2014; 34( 7) : 826－32．

9匡蕾，叶山东，邢燕，等．吡格列酮对糖尿病大鼠足细胞的保护作用〔J〕．中华全科医学，2013; 11( 7) : 999－1000．

10 Peng T，Wang J，Zhen J，et al．Effect of benazepril on the transdifferentiation of renal tubular epithelial cells from diabetic rats〔J〕．Biomed Rep，2014; 2( 4) : 490－4．

11 Hartner A，Cordasic N，Klanke B，et al．Renal protection by low dose irbesartan in diabetic nephropathy is paralleled by a reduction of inflammation，not of endoplasmic reticulum stress〔J〕．Biochim Biophys Acta，2014; 1842( 4) : 558－65．

12 Zhou Y，Wang F，Hao L，et al．Effects of magnoline on P－selectin's expression in diabetic rats and its reno－protection〔J〕．Kidney Blood Press Res，2013; 37( 2－3) : 211－20．

〔2015－03－26修回〕

(编辑李相军)

基金项目:黔南民族医学高等专科学校科研基金( No．QNYZ2O13－14)

〔中图分类号〕R587. 1

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202( 2016) 02-0301-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 022