罗华荣，柯莽，周涛，徐铖，包卫光

（温州医科大学附属台州医院，浙江 台州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.组织库）



CD147和Survivin在肾细胞癌中的表达及临床病理分析

罗华荣1，柯莽2，周涛1，徐铖1，包卫光3

（温州医科大学附属台州医院，浙江 台州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.组织库）

[摘 要]目的：检测CD147和Survivin在人肾细胞癌组织中的表达，以探讨二者在肾细胞癌中表达的相关性及其与预后的关系。方法：利用组织芯片技术构建85例肾细胞癌与35例癌旁正常肾组织芯片，应用免疫组织化学Envision法检测CD147和Survivin在肾癌组织中的表达。结果：肾细胞癌组中CD147和Survivin的表达率分别为65.7%（23/35）和71.4%（25/35），显著高于癌旁对照组（P＜0.01）。CD147在肾细胞癌中的表达随着肿瘤大小与病理分级的升高而升高（P＜0.05）；Survivin在肾细胞癌中的表达随着病理分级与临床分期的升高而升高（P＜0.05）。CD147和Survivin在肾细胞癌中的表达具有弱一致性（Kappa=0.388，P ＜0.05）。Logistic回归分析显示Survivin的表达是肾细胞癌的独立危险因素（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05）。结论：CD147和Survivin在肾细胞癌中均有过量表达，可能参与了肾癌的发生发展过程，两者联合检测可用于评估肾细胞癌的恶性程度和预后。

[关键词]肾细胞癌；组织芯片；免疫组织化学；CD147；Survivin

CD147又称为细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），是一种新的细胞表面黏附分子，介导细胞间及细胞与间质间的黏附作用，可通过多种途径刺激肿瘤细胞及周围间质成纤维细胞合成并释放基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs），降解细胞外基质，促进肿瘤的浸润与转移。生存素（Survivin）是一种独特的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAPs），选择性地表达于大多数肿瘤细胞中，在肿瘤的发生发展中起重要作用。我们采用免疫组织化学方法检测CD147和Survivin在肾细胞癌组织中的表达，旨在探讨二者与肾细胞癌的发生发展及预后的关系。

1　材料和方法

1.1材料来源 收集本院病理科2005年1月至2008 年12月间手术切除肾细胞癌石蜡包埋标本85例，其中男57例，女28例，男女比例为2.04:1，年龄最小17岁，最大80岁，平均56.3岁。标本按2004年WHO肾细胞癌的病理学分类分为：透明细胞癌63例，乳头状肾细胞癌12例，嫌色细胞癌6例，Bellini集合管癌2例，黏液样小管状和梭形细胞癌1例，多囊性肾细胞癌1例。第1种类型归为经典型肾细胞癌组，共63例；后5种类型归为非经典型肾细胞癌组，共22例。核分级按Fuhrman分级标准：I级核33例，II级核30例，III级核15例，IV级核7例。肿瘤大小：肿瘤小于5 cm 32例，5～7 cm 28例，大于7 cm 25例。按Robson法临床分期分为：I期45例，II期30例，III期9例，IV期1例。因标本限制等客观原因，随机选取了35例肾癌旁（距肾癌组织边缘＞5 cm）正常肾组织作癌旁对照组。有完整随访资料的患者共72例，所有标本的患者术前均未接受化疗及放疗。

1.2实验试剂 所用一抗CD147试剂为鼠抗人单克隆抗体，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。Survivin试剂为兔抗人多克隆抗体，购自福州迈新生物技术开发有限公司。EnVision检测试剂盒和DAB显色试剂盒均购自Dako公司。以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3实验方法 所有标本均经10%中性福尔马林溶液固定、石蜡包埋，使用组织芯片打孔仪穿取合格组织芯转移到受体蜡块，构建和制备肾癌及癌旁正常对照标本组织芯片。将制成的组织芯片行4 μm连续切片，进行HE及免疫组织化学染色。免疫组织化学采用EnVision两步法，高温高压抗原修复，DAB显色。

1.4结果判定 CD147以细胞膜或细胞质出现棕黄色颗粒为阳性，Survivin主要以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性，偶见于细胞核。观察5个以上高倍视野，计数不少于1 000个细胞中的阳性细胞数。阳性细胞数＜10%为阴性，阳性细胞数≥10%为阳性。

1.5统计学处理方法 所有数据均采用SPSS13.0软件进行统计。计数资料单因素比较采用x2检验，采用Kappa检验评判两种抗体表达的一致性，危险因素分析采用logistic回归分析，通过向后剔除法拟合肾细胞癌的logistic回归模型，获得比值比（odds ratio，OR）和95%可信区间（confidence interval，CI）。以α=0.05为显著性检验水准。

2　 结果

2.1组织芯片 共制备了3个组织芯片，每个芯片包含42个位点，比较原HE切片，剔除切片不全及图象不良者，实际包含85例肾细胞癌组织及35例癌旁肾组织。

2.2免疫组织化学染色结果 CD147在肾细胞癌中的总阳性率为71.8%（61/85），主要在细胞膜或细胞质表达，染色较强（见图1-2）。CD147在35例有癌旁对照的肾细胞癌组中的阳性率为65.7%（23/35），癌旁对照组仅10例呈阳性表达，阳性率为28.6%（10/ 35），主要表现为肾小管上皮细胞膜或细胞质的阳性表达，肾细胞癌组CD147阳性率显著高于癌旁对照组（P＜0.01）。Survivin在肾细胞癌组织中的总阳性表达率为76.5%（65/85），主要在肾细胞癌的细胞质表达（见图3），部分病例也可见到细胞质和细胞核同时着色，且染色较强（见图4）。Survivin在35例有癌旁对照的肾细胞癌组中的阳性率为71.4%（25/ 35），癌旁对照组无一例表达，肾细胞癌组Survivin阳性率显著高于癌旁对照组（P＜0.01）。CD147在肾细胞癌中的阳性率随着肿瘤大小和病理分级的升高而升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同组织学分型和临床分期间CD147的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。Survivin在肾细胞癌中的阳性表达率随着病理分级和临床分期的升高而升高，差异均有统计学意义（P＜0.05），Survivin在不同肿瘤大小和组织学分型间的表达均无显著性差异（P ＞0.05）。见表1。

图1　CD147在肾细胞癌中呈细胞膜和细胞质强阳性表达（EnVision，×100）

图2　CD147在肾细胞癌中呈细胞膜阳性表达（EnVision，×200）

图3　Survivin在肾细胞癌中呈细胞质阳性表达（EnVision，×200）

图4　Survivin在肾细胞癌中呈细胞质和细胞核强阳性表达（EnVision，×200）

表1　CD147和Survivin表达与肾细胞癌临床病理因素的关系[n（%）]

2.3CD147和Survivin在肾细胞癌中表达的一致性CD147和Survivin在肾细胞癌组织中表达的共同阳性率为62.4%（53/85），共同阴性率为14.1%（12/ 85）。Kappa检验统计分析显示CD147和Survivin的表达具有一致性（Kappa=0.388，P＜0.05），但在Kappa系数区段中一致性程度属于弱。见表2。

表2　CD147和Survivin在肾细胞癌中表达的一致性

2.4CD147、Survivin表达与肾细胞癌患者的预后分析 85例肾细胞癌患者中共获得72例随访资料，随访时间2～98个月。其中存活5年以上的有55例，因肿瘤复发或转移5年内死亡的共17例，总的5年生存率为76.4%。生存组中CD147阳性表达率为61.8%（34/55），Survivin阳性表达率为65.5%（36/ 55）；死亡组中CD147阳性表达率88.2%（15/17），Survivin阳性表达率为94.1%（16/17）。取肿瘤大小、组织学分型、病理分级、临床分期、CD147表达及Survivin表达为自变量，以随访5年是否死亡为应变量，通过向后剔除法作logistic回归分析，依次剔除CD147表达和组织学分型两个自变量，结果显示肿瘤大小、病理分级、临床分期和Survivin表达是肾细胞癌的独立危险因素。见表3。

表3　肾细胞癌危险因素logistic回归分析

3　讨论

肾细胞癌的浸润和转移是一个多因素、多步骤的级联反应过程。细胞外基质（包括基底膜）的降解是肿瘤浸润和转移的关键步骤之一[1]。MMPs能够降解细胞外基质，是迄今为止发现的与肿瘤浸润、转移关系最为密切的蛋白水解酶[2-3]。CD147是一种单链跨膜糖蛋白，在恶性肿瘤细胞膜上有较强表达，能刺激肿瘤周围微环境细胞分泌MMPs，在癌细胞表面形成复合物，将MMPs浓聚于癌细胞周围，破坏天然组织屏障，导致基底膜和间质成分降解，促进肿瘤的浸润和转移[4-5]。本实验结果显示CD147在肾细胞癌中的阳性表达率显著高于癌旁正常肾组织，差异具有统计学意义（P＜0.01）。CD147在肾细胞癌组中的表达随着病理分级的升高而增加（P＜0.05），组织分化程度越低，CD147的表达强度越强。另外CD147的表达率与肿瘤的大小也有密切关系，肿瘤越大，CD147的表达率越高。提示CD147可能参与肾癌的发生发展过程，影响肿瘤的恶性程度和发展趋势。

Survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子，特异表达于人和鼠的胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞，而在成人正常分化的组织中除了少数组织外极少表达[6]。Survivin通过直接或间接地干预凋亡蛋白酶Caspases的功能而发挥其抗凋亡作用，在调控细胞周期和抑制细胞凋亡过程中起重要作用[7-8]。本实验结果显示85例肾细胞癌Survivin阳性表达率为76.5%（65/85），35例癌旁正常肾组织无一例表达，表明Survivin在肾细胞癌组织中有高度选择性表达的特征，可能参与了肾癌的发生。另外Survivin表达随着病理分级和临床分期的升高而增加（P＜0.05），组织分化程度越低，临床分期越高，Survivin的表达阳性率越高。这说明Survivin的表达与肾癌的恶性生物学行为有关，Survivin的高表达可能参与恶性肿瘤的临床进展。

最新研究[9]表明，在子宫内膜异位症的发展过程中，CD147的过表达能够抑制子宫内膜细胞的凋亡，并能促进细胞的迁移。Tang等[10]的研究表明，CD147能够通过增加细胞内质网应激相关基因免疫球蛋白结合蛋白（BIP），诱导内质网未折叠蛋白反应（UPR），从而抑制肝癌细胞的凋亡。这些均表明CD147参与了细胞的凋亡抑制过程，并且可能在肿瘤细胞的浸润、迁移过程中起着重要的作用。本实验结果显示肾细胞癌中CD147和Survivin均高表达，癌旁正常组织中CD147和Survivin低表达或不表达；Kappa检验显示CD147和Survivin在肾细胞癌中的表达有弱一致性。可以推测CD147与凋亡抑制因子Survivin之间可能存在相同的信号通路，两者在肾细胞癌的发生发展、浸润转移过程中可能存在相互诱导、相互协同的作用。

本组多因素logistic回归分析显示Survivin的表达是肾细胞癌的独立危险因素，且比值比较大（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05），这与文献[11]报道一致。Rabien等[12]的研究表明，CD147在肾细胞癌中存在过表达，并且与肾透明细胞癌患者的不良预后有关。本研究显示CD147虽不是肾细胞癌的独立危险因素，但死亡组中CD147阳性表达率高于生存组，表明CD147的阳性表达在一定程度上可以提示肿瘤的不良预后。

CD147和Survivin在肾细胞癌中高表达，而在正常肾组织中不表达或弱表达的特点，为肾癌的分子靶向治疗提供了新的靶点，使得促进肿瘤细胞调亡而不影响周围正常组织细胞的抗肿瘤疗法成为可能[5，13]。因此，联合检测肾细胞癌组织中CD147和Survivin的表达，对于临床治疗可能具有重要的指导意义。

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（本文编辑：丁敏娇）

·临 床 经 验·

Expression of CD147 and Survivin in renal cell carcinoma and their correlation with clinicopathologic pa-rameters

LUO Huarong1,KE Mang2,ZHOU Tao1,XU Cheng1,BAO Weiguang3.1.Department of Pathology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 2.Department of Urology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 3.Human Tissue Bank,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000

Abstract:Objective:To investigate the expression of CD147 and Survivin in human renal cell carcinoma (RCC) and their correlation with clinicopathologic parameters.Methods:The RCC tissue microarrays containing 85 renal cell carcinoma specimens and 35 normal kidney tissue specimens were used to detect CD147 and Survivin expression by immunohistochemistry.Results:The expression rates of CD147 and Survivin were 65.7% (23/35) and 71.4% (25/35) in RCC group,respectively,signifi cantly higher than that in control group (P＜0.01).The expression of CD147 in RCC increased with the size of tumor and pathological grade (P＜0.05).And the expression of Survivin in RCC increased with the pathological grade and clinical stage (P＜0.05).The expression of CD147 and Survivin in RCC specimens showed weak consistency (Kappa=0.388,P＜0.05).Multivariate logistic regression analysis showed that the positive expression of Survivin was an independent risk factor of RCC (OR=16.256,95%CI:1.132～ 233.515,P＜0.05).Conclusion:CD147 and Survivin are over-expressed in RCC specimens.CD147 and Survivin may play a crucial stage in development of human RCC.Detection of the expression of CD147 and Survivin can be used in the evaluation of malignant degree and prognosis of RCC.

Key words:renal cell carcinoma; tissue microarray; immunohistochemistry; CD147; Survivin

作者简介：罗华荣（1980-），男，浙江台州人，主治医师。

收稿日期：2014-09-04

[中图分类号]R737.11

[文献标志码]B

DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2016.01.013