刘京生，刘桂华，唐健滨，赵倩，赵学英，金讯波（华北石油管理局总医院，河北任丘0655；山东大学附属省立医院）



FISH和尿脱落细胞学检查诊断上尿路上皮细胞癌效果比较

刘京生1，刘桂华1，唐健滨1，赵倩1，赵学英1，金讯波2
（1华北石油管理局总医院，河北任丘062552；2山东大学附属省立医院）

摘要：目的 比较荧光原位杂交（FISH）技术和尿脱落细胞学检查诊断上尿路上皮细胞癌（UUT-UC）的效果。方法 收集59例疑似UUT-UC患者的尿液标本，用荧光标记的3、7、17号染色体着丝粒及9p21区带探针进行FISH检测，同时行尿脱落细胞学检查。以术后病理检查结果为金标准，计算FISH和尿脱落细胞学检查诊断UUTUC的敏感度和特异度。结果 59例行FISH检测的患者中，29例病理组织检查确诊为UUT-UC。FISH和细胞学的总体敏感度分别为68．9%、34．5%，P＜0．05。其中FISH和细胞学对于非肌层浸润性肿瘤的敏感度分别为45．5%、18．2%，P＞0．05；肌层浸润性肿瘤分别为83．3%、44．4%，P＜0．05。对低级别肿瘤分别为46．2%、23．1%，P＜0．05；高级别分别为87．5%、43．8%，P＜0．05。FISH和细胞学诊断UUT-UC的特异度分别是85．7%和90．5%，P＞0．05。结论 FISH诊断UUT-UC的敏感度高于尿脱落细胞学检查，两者特异度无明显差异。

关键词：上尿路上皮细胞癌；尿脱落细胞学；荧光原位杂交

上尿路上皮细胞癌（UUT-UC）是较为少见的恶性肿瘤，复发率高［1］，预后差。目前诊断上尿路肿瘤主要依靠影像学检查，并辅以尿液脱落细胞学检查和输尿管镜检查。影像学检查对小肿瘤（直径＜5 mm）准确性很低；肾盂输尿管镜检查虽然比较可靠，但有创检查可造成并发症或肿瘤转移；细胞学检查敏感度偏低。荧光原位杂交（FISH）技术可以检测与尿路上皮细胞癌（UC）有关的4种染色体的改变，包括9p21基因位点的缺失和3、7、17号染色体的非整倍性，对复发性膀胱癌的诊断准确性较高［2，3］。UUT-UC患者的异常染色体组型与膀胱癌患者相似［4］。2009年9月～2014年8月，我们对59例疑似UUT-UC患者行FISH、尿脱落细胞学检查，以术后病理检查结果为金标准，比较两种检测方法的灵敏度和特异度。

1　资料与方法

1．1临床资料 选择31例影像学检查疑似UUTUC患者，男31例、女28例，年龄25～82岁均接受手术治疗，其中根治性肾输尿管切除术18例，输尿管部分切除术11例。术后病理结果证实1例为输尿管炎性息肉，1例为输尿管鳞状细胞癌，余29例均为UUT-UC。临床分期；pTis～pT1期（未浸润肌层）11例，pT2～pT4期（浸润肌层）18例；病理分级G1、G2级（低组别）13例，G3级（高级别）16例。

1．2FISH检测方法 留取患者清晨初次尿液50 mL，离心去上清，加入胶原酶B于37℃中消化。用甲醇与冰醋酸（3∶1）的固定液固定。将细胞滴于玻片上，56℃老化玻片。将玻片用37℃胃蛋白酶溶液消化，2×SSC（pH 7．0）溶液漂洗，－20℃预冷的乙醇中脱水，自然干燥。玻片置（73±1）℃环境中变性，预冷乙醇脱水，用45～50℃烤片机上预热。将探针混合物于（73±1）℃环境中变性后滴于玻片杂交区域，封片42℃过夜杂交。移去盖玻片，用50%甲酰胺／2×SSC溶液洗涤，70%乙醇中脱水，暗处干燥玻片。用DAPI复染剂复染后，在荧光显微镜下观察玻片。FISH DNA探针由北京金菩嘉公司提供，包括两种组合：GLP P16／CSP17探针与CSP3／CSP7探针，荧光显微镜下均可见红色与绿色两种信号。GLP P16／CSP17探针常见异常类型为p16缺失或17号染色体非整倍性，CSP3／CSP7探针常见异常类型为3号及7号染色体非整倍性。正常细胞应为2红／2绿，任意两个以上位点（含两个）出现异常，或一个位点有两种以上（含两种）异常，即可判断为阳性。

1．3尿脱落细胞检查方法 尿液细胞学检查由2位病理学专家采用盲法完成。尿液标本与用于FISH检测的标本同一天采集。

1．4统计学方法 采用SPSS13．0统计软件。数据比较采用χ2检验。P＜0．05为差异有统计学意义。

2　结果

FISH、尿脱落细胞学检查诊断UUT-UC的敏感度分别为68．9%（20／29）、34．5%（10／29），P＜0．05。二者诊断未浸润肌层UUT-UC的敏感度分别为45．5%（5／11）、18．2%（2／11），P＞0．05；诊断浸润肌层的UUT-UC的敏感度分别为83．3%（15／18）、44．4%（8／18），P＜0．05。二者诊断病理分级低级别UUT-UC的敏感度分别为46．2%（6／13）、23．1%（3／13），P＞0．05；诊断病理分级高级别UUT-UC的敏感度分别为87．5%（14／16）、43．8% （7／16），P＜0．05。二者诊断UUT-UC的特异度分别为85．7%（18／21）、90．5%（19／21），P＞0．05。

3　讨论

影像学检查联合尿脱落细胞学检查或输尿管镜检查是常用的诊断UUT-UC的方法。但是，这些辅助检查均有其自身的局限性。尿脱落细胞学检查敏感度仅为35%～50%［5，6］。输尿管插管冲洗可以提高尿脱落细胞学检查的敏感度，但假阴性率仍高达39%［5］，而且有一定创伤性［7］。在输尿管镜辅助下行组织活检诊断UUT-UC正确率可达90%，但有创检查可引起严重的并发症（输尿管穿孔、断裂、狭窄或肿瘤细胞外漏、种植），检测原位癌时敏感度也很低。文献报道，FISH诊断膀胱UC的灵敏度高于尿脱落细胞学检查，但特异度无明显差别［8，9］。本研究结果显示，FISH诊断UUT-UC敏感度高于尿脱落细胞学检查，但特异度相似，同国外研究结果基本一致［10～12］。尽管FISH检测未浸润肌层和低级别UUT-UC的敏感度似乎好于尿脱落细胞学，但差异无统计学意义。可能与此组病例的数量较少有关。

综上所述，在诊断UUT-UC时，当影像学检查阳性或可疑而细胞学检查结果阴性或无法确定时，可用FISH作为补充检查，也许可以避免应用侵袭性的检查技术。对于影像学检查为阳性但细胞学和FISH检查为阴性的病例，内镜检查仍是必须的。由于国人与西方人膀胱癌的3、16、18号染色体杂合子缺失频率存在统计学上差异［14，15］，因此3、7、17号染色体和9p21探针是否是检测国人UUT-UC的最佳组合，仍需进一步研究。

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收稿日期：（2015-04-28）

通信作者：金讯波（E-mail：16365451＠qq．com）

中图分类号：R737．5

文献标志码：B

文章编号：1002-266X（2016）02-0066-02

doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2016．02．028