吴天浪 毕明帅 俞旭君 王飞 任飞强 常德贵**

1. 成都中医药大学附属医院（成都 610072）；2. 成都中医药大学；3. 四川省第二中医院

前列灵胶囊对CP大鼠前列腺组织中凋亡因子BAX、BCL-2蛋白的影响*

吴天浪1毕明帅1俞旭君2王飞3任飞强2常德贵2**

1. 成都中医药大学附属医院（成都 610072）；2. 成都中医药大学；3. 四川省第二中医院

目的探讨前列灵胶囊对慢性前列腺炎（Chronic prostatitis，CP）大鼠前列腺BAX 蛋白、BCL-2 蛋白表达的影响。方法以60只SPF级SD大鼠为观察对象，消痔灵注射液进行前列腺内注射制作CP模型，以前列灵胶囊高、中、低剂量以及前列通瘀胶囊灌胃作为干预方法，观察大鼠前列腺组织中凋亡因子BAX、BCL-2蛋白表达变化。结果前列通瘀、前列灵胶囊高剂量能使CP大鼠前列腺组织中促进凋亡因子BAX蛋白表达减少（P＜0.05），抑制凋亡因子BCL-2蛋白表达增加（P＜0.05）。结论细胞凋亡因子BAX、BCL-2与CP密切相关，前列灵胶囊能通过调节细胞凋亡情况而改善前列腺炎症反应。

前列腺炎；前列灵胶囊；BCL-2相关X蛋白质；细胞凋亡

慢性前列腺炎（CP）是指前列腺的非特异性感染。在我国，CP约占男科、泌尿科门诊患者总数的1/3［1］，但发病机制尚未完全清楚。前列灵胶囊为我院使用多年的院内制剂，在前期临床研究中［2,3］，对CP的疗效确切，未见不良反应。本实验拟探讨前列灵胶囊对CP大鼠前列腺组织中BAX蛋白、BCL-2蛋白表达的影响，以进一步揭示其治疗CP的作用机制。

资料与方法

一、资料

（一）实验动物

动物 SPF级SD大鼠60只，15月龄，雄性，体重250-350g，由成都中医药大学实验动物中心提供（川实动管227号）。

（二）药物与试剂

对照药物：前列通瘀胶囊由珠海星光制药有限公司制造，规格0.4g/粒，国药准字Z19990060，产品编号：C1400000763。

消痔灵注射液：每支10mL，北京万辉药业集团第四制药厂生产，京卫药准字（1998）第104094号。

BAX抗体（BAX），兔抗，多克隆抗体，批号：bs-0127R，北京博奥森生物技术有限公司。BCL-2抗体（BCL-2），兔抗，多克隆抗体，批号：bs-0032R，北京博奥森生物技术有限公司。二抗：生物素化山羊抗兔IgG（H+L）, SP-9001批号：13152A11，北京中山金桥生物有限公司。

Image-Pro Plus 6.0 图像分析系统，美国Media Cybernetics公司。

二、造模与分组

大鼠经环境适应性饲养 1 周后，参照文献［4,5］将大鼠按体质量随机分为6组：空白组、模型对照组、前列通瘀组及前列灵胶囊高、中、低剂量组，各组均用25%乌拉坦1g/kg，经腹腔注射麻醉，无菌条件下取下腹正中切口，打开腹腔，提出膀胱及两侧精囊，暴露附睾及精囊两侧的前列腺背叶，其中空白组注入无菌注射用水0.1mL，其余各组分别注入25%消痔灵注射液0.1mL，缝合后恢复一周。

三、干预方法

实验动物给药用量根据实验动物与人体体质量等效剂量换算公式［5］换算，且每天测大鼠体质量一次，及时调整给药剂量。均采取每日晨09：00灌胃一次，连续30d。空白组和模型对照组：生理盐水10ml/kg；前列通瘀组：前列通瘀胶囊混悬液剂量10ml/kg，相当于60kg成人用量20倍（生药含量为：6.6mg/kg）；前列灵胶囊高、中、低剂量组：前列灵胶囊混悬液剂量10ml/kg，分别相当于60kg成人用量20倍、10倍、5倍（生药含量为：6.6mg/kg、3.3mg/kg、1.65mg/kg）。

首先，要想有效地实行“翻转课堂”，学校应该完善信息技术软硬件设备，学校机房应该在课余时间随时向学生开放，以方便学生观看视频录像自主学习。

四、观察指标

末次给药结束后2d，称大鼠体质量，断头处死，经下腹正中切口进腹，于膀胱下方切除前列腺腹侧叶，摘除前列腺组织，用4%甲醛固定液固定，二甲苯脱水，常规石蜡包埋、切片，免疫组织化学方法观察大鼠前列腺组织中前列腺凋亡因子BAX、BCL-2蛋白表达的变化。

五、统计方法

实验数据用SPSS13.0软件包进行处理：各项指标结果满足正态分布时，各组间比较用单因素方差分析，如不满足正态分布时选用非参数检验，各项指标结果用均数±标准差（±s）表示，以P＜0.05为有统计学意义。

结 果

一、一般情况

试验入组60例，符合方案分析58例，其中空白组10只，模型对照组9只，前列通瘀组9只，前列灵高组10只，前列灵中组10只，前列灵低组10只。其年龄分布、治疗前后BCL-2蛋白和BAX蛋白，根据卡方检验统计分析，得出各组之间相关指标分布差异无统计学意义（P＞0.005），具有可比性。

二、前列灵胶囊对大鼠前列腺组织中BAX、BCL-2的OD值影响

从表1可以看出，模型对照组与空白组相比：大鼠前列腺BCL-2蛋白表达降低、BAX表达升高（P＜0.05）。前列通瘀组、前列灵高剂量组能明显上调大鼠前列腺组织BCL-2蛋白表达，下调BAX蛋白表达，与模型对照组相比有统计学意义（P＜0.05）。提示前列灵胶囊可通过对凋亡因子的调节来改善前列腺炎症反应，表现为下调BAX、上调BCL-2蛋白的表达。

表1 各组大鼠前列腺组织 BCL-2 、BAX平均光密度表达情况（±s）

表1 各组大鼠前列腺组织 BCL-2 、BAX平均光密度表达情况（±s）

与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05

空白组模型对照组前列通瘀组前列灵高组中组低组OD（BCL-2）0.2482±0.01390.2344±0.0082*0.2501±0.0124▲0.2618±0.0058▲0.2390±0.01330.2349±0.0109 OD（BAX）0.2325±0.01380.2589±0.0189*0.2367±0.0099▲0.2285±0.0147▲0.2423±0.00580.2528±0.0131

讨 论

一、动物模型分析

CP的动物模型有慢性细菌性前列腺炎模型、慢性非细菌性前列腺炎模型、免疫因素导致前列腺炎模型及其他慢性前列腺炎模型［6］。消痔灵注射液（内含硫酸铝钾、五倍子鞣质等）可形成大鼠非细菌性前列腺炎模型，相关文献报道［7,8］消痔灵对前列腺组织的损害病理结果与人类一致，表现为前列腺间质纤维细胞增生及炎症细胞浸润。如果造模剂量和造模时间合适则可用药物逆转，模型具有可重复性。本次实验观察到消痔灵注射后前列腺间质大多有不同程度的炎症细胞浸润及纤维化，且BCL-2、BAX表达模型组与空白组相比有明显差异（P＜0.05），表明大鼠CP模型建立成功。

二、前列灵胶囊对前列腺组织中凋亡因子的影响

细胞的死亡主要方式为细胞凋亡和坏死，炎症因子在其中起到巨大的作用，自身免疫细胞反应及细胞因子介导的局部免疫反应是身体修复的一种基本途径，其中有大量的证据都说明细胞凋亡在炎症过程中存在重要作用，凋亡是由相关基因调控完成的细胞主动性死亡过程，受多种基因调节，目前已知有Bcl-2、Bax、p53、Fas等［9］，其中Bax和Bcl-2基因与凋亡的调控关系更为密切［10,11］，Bcl-2和Bax作为一对关系密切的凋亡相关基因，抗凋亡因子 BCL-2与促凋亡因子BAX的比例不同对前列腺炎症细胞凋亡的影响也不同，本次实验数据也证实其作用，BCL-2＞BAX细胞趋于存活，BAX＞BCL-2则细胞趋于凋亡，Bcl-2基因有促进细胞周期和细胞增殖的能力，其过度表达可特异性抑制细胞凋亡。Bax基因的过度表达能加速IL-3细胞株在细胞因子缺失时发生细胞凋亡，并对抗BCL-2对细胞凋亡的抑制作用，从而促进细胞凋亡［12］。CP病理表现为局灶性前列腺导管和腺体及其周围腺上皮增生或者破坏［1］，乃至纤维化。一般认为BCL-2 主要在凋亡上游事件中起保护作用［13］，同时本次实验也证实这个观点，因此，增强组织中BCL-2的表达，降低BAX的表达，对治疗CP的价值重大。本次实验显示：模型对照组大鼠较空白组BCL-2蛋白的表达降低，而 BAX的表达却相对增多，提示消痔灵具有促进前列腺组织正常细胞凋亡的作用；前列灵高剂量组与模型对照组相比，BCL-2蛋白的表达增多，而 BAX的表达却明显降低，表示前列灵胶囊有抑制CP正常前列腺细胞凋亡、改善前列腺功能的作用。与前列通瘀组相比，BCL-2 蛋白的表达增加及BAX的表达降低幅度具有一致性，本结果在一定程度上揭示了前列灵胶囊通过抑制前列腺正常组织细胞凋亡进而改善前列腺组织的修复功能、改善炎症状态的作用机制。

三、药物分析

前列灵胶囊由黄柏、水蛭、益母草为主组成，以黄柏为君，水蛭为臣。黄柏苦寒，入肾、膀胱二经，专治湿热在肾、膀胱二经者。水蛭咸、苦、平，入肝经，破血逐瘀，对下焦湿邪多与黄柏相伍为用。益母草辛，苦，微寒，归心、肝、膀胱经，活血调经，利水消肿，清热解毒。三药合用，常用于下焦湿热瘀阻之证。现代药理研究［14］认为，黄柏可使炎症局部血管收缩，减轻局部炎症反应，且含钾量高，有利尿之功，可使湿邪从小便而去。水蛭能够扩血管，改善微循环，促进炎性病变的吸收；降低大鼠全血黏度及红细胞凝聚指数，延长凝血时间以及扩血管减少血栓形成，促进毛细血管血流恢复。总之，应用祛湿活血化瘀药后，促进了血液循环，气血通畅，使会阴、少腹及腰的疼痛显著改善，体现了中医学的“通则不痛”原则。

本次实验结果表明，前列灵胶囊可能通过上调BAX蛋白，下调BCL-2，改善了前列腺导管及腺上皮增生、凋亡与组织纤维化之间的平衡，进而影响前列腺的炎症反应级别，是CP治疗的重要的机制之一。

1 张元芳, 孙颖浩, 王忠主编. 实用泌尿外科学和男科学.北京: 科学出版社, 2013: 366-367

2 尹静, 曲晓伟, 林浩成, 等. 前列灵胶囊对慢性非细菌性前列腺炎患者EPS中IL-8和TNF-α的影响. 辽宁中医杂志 2009；36（1）: 4-5

3 吴天浪, 琚杰昌, 张培海, 等. 前列灵胶囊治疗湿热瘀阻型慢性前列腺炎31例临床观察. 新中医 2009；41（4）: 55-56

4 徐淑云主编. 药理实验方法学（第三版）. 北京: 人民卫生出版社,2002: 262-263

5 黄继汉, 黄晓晖, 陈志扬. 药理试验中动物间和动物与人见的等效剂量换算. 中国临床药理学与治疗学 2004；9（9）: 1069-1070

6 李天赋, 李卫巍. 慢性前列腺炎动物模型研究进展. 中华男科学杂志 2013；19（12）: 1124-1128

7 张亚强. 中药前列腺汤对实验性前列腺炎病理模型的影响. 中西医结合杂志 1991；11（8）: 480-4818 夏立营, 刘维佳, 葛文津, 等. 苦豆肾茶方对消痔灵所致大鼠慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用. 中华中医药杂志 2012；22（7）:1898-1900

9 傅洪军, 董胜璋, 任铁玲, 等. 氯化铝对大鼠皮层神经元凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响. 卫生毒理学杂志2003；17（1）: 20-23

10 Yang B, Prayson RA. Expression of Bax, Bcl-2 and P53 in progressive multifocal leukoencephalopathy.Mod Pathol2000；13（10）: 1115-1120

11 Shibata M, Murray M, Tessler A,et al. Single injections of a DNA plasmid that contains the human Bcl-2 gene prevent loss and atrophy of distinct neuronal populations after spinal cord injury in adult rats.Neurorehabil Neural Repair2000；14（4）: 319-330

12 郑航, 郑新民, 李世文, 等. Bcl-2/Bax基因表达对隐睾生殖细胞凋亡的影响. 中国男科学杂志 2000；14（2）: 81-82

13 Lok J, Martin LJ. Rapid sub-cellular redistribution of Bax precedes Caspase- 3 and endonuclease activation during excitotoxic neuronal apoptosis in rat brain.J Neurotrauma2002；19（7）: 815-825

14 张廷模主编. 临床中药学. 北京: 中国中医药出版社, 2004: 233-235

（2015-12-18收稿）

Effects of QianLieling capsule on the expression of BAX and BCL-2 in prostate tissue of chronic prostatitis rats

Wu Tianlang1, Bi Mingshuai1,Yu Xujun2, Wang Fei3, Ren Feiqiang2, Chang Degui2*
1. Affiliated Hospital of Chengdu University of TCM, Chengdu 610072, China；
2. Chengdu University of TCM；3. The 2nd Traditional Chinese Medicine Hospital of Sichuan

Objective To study the effects ofQianLielingcapsule on the expression of BAX and BCL-2 in prostate tissue of chronic prostatitis rats.MethodsSixty SD rats of SPF grade were selected, and 50 were injected withXiaoZhiLinginjection into the prostate to prepare the CP model. Equal volume ofQianLieLinghigh, medium, low dose andQianLieTongYucapsule were given by gastrogavage as intervention. The expressions of BAX and BCL-2 in the prostate tissue were tested after intervention.ResultsThe expressions of BAX were decreased inQianLielinghigh dose andQianLieTongYugroups compared with that of model group（P＜0.05）, but BCL-2 expressions were increased（P＜0.05）.ConclusionThe cell apoptosis factors BAX and BCL-2 are closely related with CP.QianLielingcapsule can improve the prostate in flammation reaction by regulating cell apoptosis.

prostatitis；QianLieling capsule；BCL-2-Associated X Protein；apoptosis

10.3969/j.issn.1008-0848.2016.06.006

R697.33

资助：成都中医药大学附属医院院基金项目资助（项目编号：2008-D-YY-01）

**通讯作者，cdg998@sina.com

Communication author: Chang Degui, E-mail:cdg998@sina.com