胡月，刘萌萌，侯志广，赵晓峰，张浩（吉林农业大学资源与环境学院，吉林长春130118）



平菇和榆黄蘑中吡唑醚菌酯残留动态研究

胡月，刘萌萌，侯志广，赵晓峰，张浩*
（吉林农业大学资源与环境学院，吉林长春130118）

摘要：利用液相色谱仪建立吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑中残留分析方法，测定吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑及培养料中的消解动态规律。结果表明：吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑及培养料中的消解半衰期分别为2.8、2.9 d和14.1 d。培养料灭菌会减少吡唑醚菌酯的残留量。平菇和榆黄蘑及在含有吡唑醚菌酯的培养料中栽培90 d后，培养料中供试农药残留量0.68 mg/kg，在收获期同步采集的平菇和榆黄蘑子实体中均未检测到吡唑醚菌酯的残留量。因此，培养料中吡唑醚菌酯残留不会向平菇和榆黄蘑子实体转移，对食用菌产品质量安全的影响较小。

关键词：平菇；榆黄蘑；培养料；吡唑醚菌酯；消解动态

随着人们对食用菌安全的关注度越来越高，食用菌作为纯天然食品具有独特的食用和药用及保健功效，已受到世界各国的广大消费者普遍青睐[1-2]。但是食用菌在生产过程中，容易受到农药污染，给人类的健康带来危害[3-4]。因此，研究农药在食用菌上的残留量，评价农药在食用菌上的安全性具有重要意义。吡唑醚菌酯均属于高效广谱杀菌剂，可应用于农业生产中的多种病害防治[5-6]。目前有关吡唑醚菌酯在作物、蔬菜上的残留降解均有报道[7-8]，但在食用菌上的消解动态的报道甚少。本试验建立了吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑上残留的分析方法，研究了吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑及培养料中的消解动态规律，为指导吡唑醚菌酯在平菇、榆黄蘑上的合理安全使用提供了科学参考。

1材料与方法

1.1材料与试剂

平菇、榆黄蘑：吉林农业大学食用菌基地提供。

平菇、榆黄蘑培养料：50 %玉米芯、35 %高粱壳、14 %木屑、1 %石灰，按上述配方混匀发酵15 d，在0.10 kPa，121℃高温灭菌180 min。

丙酮、正己院、氯化钠、无水硫酸钠、乙腈（均为分析纯）：北京化工厂；弗罗里硅土（60目~100目）：德国Riedel-De Haen公司。

供试农药：吡唑醚菌酯标准品（纯度99.5 %）、25 %吡唑醚菌酯乳油：均由巴斯夫（中国）有限公司提供。

1.2仪器与设备

HP 1100高效液相色谱系统（配有可变波长紫外检测器和Rev.A.06.03色谱工作站）：美国惠普公司；RE-52A型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；SHB-111型循环水式多用真空泵：郑州长城仪器有限公司；THZ-82B气浴恒温振荡器：江苏金坛市医疗仪器厂；JJ-2型组织捣碎匀浆机：江苏省金坛市环宇科学仪器厂。

1.3方法

1.3.1标准溶液的配制

准确秤取吡唑醚菌酯标准品，配制成质量浓度为1 000 mg/L标准溶液。然后再用此标准溶液逐级分别稀释成0.05、0.1、0.5、1.0、5.0 mg/L系列标准工作溶液。以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。吡唑醚菌酯的线性方程为y = 24.08x-0.687 1，相关系数r =0.999 7。标准曲线绘制采用外标法定量。按照上述色谱条件下进行测定，进样量10 μL。

1.3.2吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑中消解动态试验

试验在吉林农业大学食用菌栽培基地进行。当平菇和榆黄蘑子实体直径长至2 cm左右时，用25 %吡唑醚菌酯乳油兑水稀释500倍均匀喷雾，至子实体表面有水珠滴下。每个处理3次重复，每个重复10袋料（每袋料约1 kg）。分别于施药后2 h及1、3、5、7、9 d随机采集平菇和榆黄蘑样品。随机多点取样，采用四分法最终收集样品500 g。在空白试验中采集空白样品，置于－20℃冰箱中保存，供残留检测。

1.3.3吡唑醚菌酯在培养料中消解动态试验

试验在吉林农业大学食用菌栽培基地进行，试验设两个处理，每个处理3次重复。处理1：将25 %吡唑醚菌酯乳油5 g灭菌前喷雾于1 000 g培养料中，并混合均匀。处理2：空白对照喷施清水。培养料在0.1 MPa、120℃条件下灭菌2 h，冷却后接种。培养料灭菌后分别在施药后0、1、3、5、7、9、14、21、30、45、60、90 d随机采样供残留检测。

1.3.4最终残留试验

子实体从第一潮菇开始，每潮菇收获时都要采子实体样品，即在施药后33、47、67、87 d即分别为第1茬、第2茬、第3茬和第4茬出菇期间，每次采集的子实体样品缩分后存放于-20℃冰箱进行冷冻，然后真空冷冻干燥，放于干燥器中待用；同步采集培养料样品进行测定。

1.3.5样品分析

子实体提取：准确秤取5.0 g子实体样品置于组织捣碎机中，加入5 mL蒸馏水，40 mL乙腈，匀浆2 min。匀浆之后将全部样品转移至布氏漏斗中进行抽滤，将滤液全部转移至盛放10.0 g氯化钠的100 mL具塞量筒中，进行上下匀速震荡2 min，静止分层。吸取20 mL上层提取液体于250 mL圆底烧瓶中，旋转浓缩近干，氮气吹干备用净化。

净化：依次向玻璃层析柱内装入2.0 g无水硫酸钠、2.0 g弗罗里娃土、5.0 g无水硫酸钠，轻敲填装均匀，10 mL正己烷预淋洗后，上样；用正己烷/丙酮（85∶15，体积比）淋洗液50 mL淋洗，收集洗脱液于圆底烧瓶中，40℃条件下旋转浓缩近干，氮气吹干，甲醇定容至2 mL，过0.022 μm有机膜，待测定。

培养料提取净化方法：秤取培养料5.0 g，置于250 mL具塞三角瓶内，加5 mL蒸馏水，40 mL乙腈，震荡1 h，然后全部转移至布氏漏斗进行减压抽滤。以下处理方法同子实体。

测定：紫外检测器、C18反相色谱柱（10cm×4.6mm），波长275 nm，甲醇∶水=7∶3（体积比），柱温30℃，流速0.8 mL/min；进样量：10 μL。

1.3.6数据处理

试验数据分析用DPS统计[9]。吡唑醚菌酯降解可以用一级动力学方程表示[10]：

式中：C为吡唑醚菌酯残留量，（mg/kg）；C0为吡唑醚菌酯初始残留量，（mg/kg）；k为消解速率常数；t为时间。

2结果与分析

2.1平菇和榆黄蘑及培养料中添加回收率的测定

在空白平菇、榆黄蘑、培养料样品中，分别添加吡唑醚菊酯0.01、0.1、1 mg/kg 3个水平。按照1.3.4方法进行测定，试验结果见表1。

吡唑醚菌酯在平菇、榆黄蘑和培养料中的平均回收率88.74 %~95.28 %、84.46 %~93.54 %、90.36 %~ 93.26 %，变异系数2.5 %~6.3 %、4.1 %~5.3 %、2.7 %~ 6.8 %。吡唑醚菌酯在平菇、榆黄蘑、培养料中的最低检测限为0.01 mg/kg。该残留分析方法的准确度、精确度和灵敏度均满足农药残留分析的要求[11]。

表1吡唑醚菊酯在平菇、榆黄蘑、培养料中的添加回收结果Table 1 Recoveries of pyraclostrpbin in Pleurotus ostreatus Pleurotus citrinipileatus sing and substrates

2.2吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑中消解动态

在平菇和榆黄蘑子实体直径长至2 cm左右时，施药一次后不同时间多次采样，测定样品残留量，试验结果见表2。

表2吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑中的消解动力学参数Table 2 Dissipation kinetic parameters of pyraclostrpbin in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinipileatus sing

从表2可以看出吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑中降解速率较快，半衰期在2.8 d~2.9 d。在平菇和榆黄蘑中的消解动态曲线方程为；。

2.3吡唑醚菌酯在培养料中消解动态

用吡唑醚菌酯喷施一次，灭菌后不同时间采样，测定吡唑醚菌酯在培养料中的残留量，结果见表3。

表3吡唑醚菌酯在培养料中的降解动力学参数Table 3 Dissipation kinetic parameters of pyraclostrpbin in the substrates

续表3吡唑醚菌酯在培养料中的降解动力学参数Contiune table 3 Dissipation kinetic parameters of pyraclostrpbin in the substrates

由表3可知，培养料中吡唑醚菌酯残留量随着时间的延长而逐渐降低，其消解动态符合一级动力学方程。消解动态方程C=7.945 5e-0.0291t，r=0.984 6，吡唑醚菌酯在培养料中的消解速率较慢，半衰14.1 d，灭菌前吡唑醚菌酯在培养料中残留量23.81 mg/kg，灭菌后吡唑醚菌酯降解率达50 %以上，培养料的灭菌会显著影响吡唑醚菌酯在培养料中的消解。

2.4培养料中吡唑醚菌酯向平菇子和榆黄蘑子实体中转移规律

在培养料施用吡唑醚菌酯后，正常栽培平菇和榆黄蘑，分别于药后33 d（第一茬菇采收期）、47 d（第二茬菇采收期）、67 d（第三茬菇采收期）87 d（第四茬菇采收期）同步采集平菇和榆黄蘑及其培养料样品，进行样品吡唑醚菌酯残留量测定，试验测定结果见表4。

表4培养料中吡唑醚菌酯向子实体转移Table 4 Pyraclostrpbin residues in the substrates and Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinipileatus sing

由表4可知，培养料中供试农药在药后33、47、67、87 d后的残留量仍较高，达到0.78 mg/kg~3.07 mg/kg。然而，在同步采集的平菇和榆黄蘑子实体中均没有检测到供试农药的残留。可见，平菇和榆黄蘑子实体在生长期间，培养料中吡唑醚菌酯残留不会向平菇和榆黄蘑子实体转移，对食用菌产品质量安全的影响较小。

3结论与讨论

本文研究了吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑及培养料中残留检测方法，该方法该操作简单，具有较好的准确度、精密度和灵敏度，完全满足农药残留分析的要求。测定了吡唑醚菌酯平菇和榆黄蘑及培养料中的消解动态，均符合一级动力学方程。吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑中子实体降解较快，半衰期为2.8 d~2.9 d；培养料中的供试农药的残留量较高，半衰期为14.1 d。供试农药在培养料中的降解，采用高温灭菌前后进行对比，灭菌后吡唑醚菌酯的平均降解率50 %以上。是由于供试农药在培养料中热稳定较差，易分解造成的。

在供试农药转移试验中，培养料中吡唑醚菌酯在施药后33、47、67、87d后的残留量仍较高，达0.78 mg/kg～3.07 mg/kg。然而，在同步取样的平菇和榆黄蘑子实体中均未检测到供试农药的残留量。因此，平菇和榆黄蘑子实体在生长期间，培养料中吡唑醚菌酯残留不会向子实体转移，对食用菌产品质量安全的影响较小。美国规定吡唑醚菌酯在蔬菜上MRL值也为5 mg/kg[8]。参考其标准说明吡唑醚菌酯在平菇和榆黄蘑上使用是安全的。

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Degradation Kinetics of the Pyraclostrpbin Residue in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinipileatus

HU Yue，LIU Meng-meng，HOU Zhi-guang，ZHAO Xiao-feng，ZHANG Hao*
（College of Resource and Environment，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，Jilin，China）

Abstract：A high performance liquid chromatography（HPLC）method was developed for the determination of pyraclostrobin residues in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinopileatus. The degradation kinetics of the pyraclostrobin in Pleurotus ostreatus，Pleurotus citrinopileatus and substrates was thus studied. The results indicated that the half -life period of pyraclostrobin in Pleurotus ostreatus，Pleurotus citrinopileatus and substrates were 2.8，2.9 d and 14.1 d respectively. Sterilization remarkably reduced pyraclostrobin residues in the substrates. After Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinopileatus were cultivated for 90 days in the substrates with pyraclostrobin，with the tested pesticide residues in the substrates being 0.68 mg/kg，no residual volume was detected in the substance of Pleurotus ostreatus or Pleurotus citrinopileatus that were harvested at the same time. Therefore，pyraclostrobin residues in substrates didn't transfer to the fruiting bodies of Pleurotus ostreatus or Pleurotus citrinopileatus and thus had little impact on the quality safety of the edible fungus.

Key words：Pleurotus ostreatus；Pleurotus citrinopileatus；substrates；pyraclostrobin；degradation kinetics

收稿日期：2014-07-14

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.008

作者简介：胡月（1989—），女（汉），在读硕士，研究方向：农药学专业。*通信作者：张浩（1964—），女（汉），教授，博士，主要从事农药环境毒理研究。

基金项目：吉林省世行贷款农产品质量安全项目（2011-Z28）