硫酸软骨素酶ABC联合超短波治疗对脊髓损伤大鼠的功能恢复及胶质瘢痕形成的影响
2016-03-13王笑男张志强张立新
王笑男,张志强,张立新
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种严重威胁人类健康及生存质量的疾病,并且主要发病人群为青壮年,目前尚无有效治疗方法。SCI后形成的胶质瘢痕对中枢神经有一定的保护作用,使其免受进一步损害,但是胶质瘢痕形成阻碍了神经再生,影响功能恢复。因此,在治疗SCI过程中,抑制胶质瘢痕形成是非常重要的。Zhang等[1]通过骨髓间充质干细胞移植联合硫酸软骨素酶ABC(Chondritinase ABC, ChABC)注射治疗,证实二者联合作用对大鼠SCI后神经修复有效。临床上,小剂量超短波治疗具有改善血液循环、组织营养及消炎等作用,应用广泛。 胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillaty acidic protein, GFAP)是活化星形胶质细胞标记物。活化的星形胶质细胞分泌大量的神经抑制因子——硫酸软骨素蛋白聚糖(chondroitin sulphate proteoglycans, CSPGs),CSPGs是参与胶质瘢痕形成的重要分子[2]。因此本实验通过术后观察大鼠运动功能及检测GFAP、CSPGs表达水平,来观察ChABC联合超短波治疗能否进一步抑制胶质瘢痕形成,从而进一步促进大鼠运动功能恢复。
1 材料与方法
1.1 实验器材与试剂 ①器材:脑损伤打击器,PE10微导管,微量注射器。②试剂: 硫酸软骨素酶ABC(Sigma公司,10U)。GFAP第一抗体,内源性过氧化物酶,抗原修复液I,GFAP第二抗体,SABC,DAB显色剂A、DAB显色剂B、DAB显色剂C。CSPGs第一抗体、抗原修复液。内源性过氧化物酶,CSPGs第二抗体,动物非免疫血清,链霉素抗生物素-过氧化氢酶(SP)溶液,DAB缓冲液,DAB底物,DAB色原。
1.2 方法 ①动物分组:8周龄SD大鼠,雌雄不限,共42只。随机分成3组,每组14只。分别为对照组(其中8只为单纯损伤组,另外6只为加PBS溶液治疗的安慰剂组)、ChABC组、联合组(ChABC联合超短波治疗)。……
