姜辉，刘健，孟楣，戴敏，董六一

(1.安徽中医药大学第一附属医院，合肥 230031；2.安徽中医药大学药学院；3.安徽医科大学基础医学院)



·基础研究·

新风胶囊连续灌胃对大鼠的毒性研究

姜辉1，刘健1，孟楣1，戴敏2，董六一3

(1.安徽中医药大学第一附属医院，合肥 230031；2.安徽中医药大学药学院；3.安徽医科大学基础医学院)

[摘要]目的观察新风胶囊连续灌胃6个月对大鼠的毒性反应。方法选用SD大鼠，雌雄各半，随机分为新风胶囊(3.0 g浸膏/kg，9.0 g浸膏/kg，27.0 g浸膏/kg)组和溶媒对照组，每组20只。灌胃给予相应浓度药物，每天1次，连续6个月。除观察一般状况外，于给药后3个月、6个月、恢复15 d后检测血液学、血液生化学相关指标，处死大鼠，摘取主要脏器，计算脏器系数，并进行脏器病理组织学检查。结果与溶媒对照组相比，新风胶囊各剂量组大鼠一般状况、体质量、摄食量均无明显变化；血液学、血液生化学个别指标虽有所改变，但属正常生理范围的波动；肺脏、脾脏系数变化虽有统计学意义，但组织病理学检查并未发现病理组织学改变。结论新风胶囊长期用药对大鼠无明显毒性。

[关键词]药物毒性;中草药；关节炎,类风湿；大鼠,Sprague-Dawley

新风胶囊是在长期理论与临床实践基础上，依据新安医学“脾虚致痹，从脾治痹”理论创制而成的特色医院制剂[1-2]，具有“益气健脾，化湿通络”之功效，主治类风湿关节炎，临床运用十余年，疗效确切[3-4]，但目前尚缺乏新风胶囊长期服用安全性评价研究。本实验拟按照《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》要求[5]，观察新风胶囊重复给药的长期毒性，以期为其临床应用及后期开发提供毒理学实验依据。

1材料与方法

1.1动物SD大鼠，SPF级，80只，雌雄各半，体质量90～120 g，由安徽省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(皖)2011-0002；SPF级实验鼠料，由南京安立默科技有限公司提供。

1.2受试药物新风胶囊浸膏粉，深褐色粉末，每克含7.143 g生药，批号：20140704，由安徽中医药大学第一附属医院制剂中心提供。

1.3仪器电子天平JT12001，上海精天电子仪器厂；全自动高速冷冻离心机GL20A，湖南仪器仪表总厂离心机厂；Alcyon-300 型全自动生化分析仪，美国雅培公司；电子显微镜XDS-1B，重庆光电仪器总公司。

1.4动物分组与给药大鼠适应性饲养1周后，按随机数字表分为对照组、新风胶囊(3 g浸膏/kg、9g浸膏/kg、27g浸膏/kg)组，分别相当于临床剂量的16.67倍、50倍、150倍，每组20只，雌雄各半。灌胃给予相应剂量药物，对照组给予等量溶媒，每天1次，每周6天，连续6个月，停药恢复15 d。

1.5观察指标[6-8]

1.5.1一般状况观察给药日每天上下午各观察1次，非给药日每天观察1次。观察并记录每只动物的临床症状、濒死或死亡情况；如出现毒性反应，应适当增加观察的频率，详细记录毒性征状起始时间、持续时间、严重程度等。

1.5.2体质量称重随机分组当日称重1次，以后每周称重1次，解剖前称重1次。

1.5.3摄食量测定首次给药后每周记录1次每笼大鼠24 h所消耗的食物量，计算每只大鼠每天平均摄取量。

1.5.4血液生化学检查给药3个月、给药6个月后每组分别处死8只大鼠、恢复15 d后每组处死4只大鼠，分别测定各组大鼠血液学和血液生化学指标。

1.5.5脏器指数及病理组织学检查取相应器官，称重，计算脏器指数，并进行病理组织学检查。

1.6统计学处理采用SPSS18.0软件进行统计，采用t检验进行组间比较，方差不齐时用t'检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1新风胶囊对大鼠一般状况的影响 与对照组相比，新风胶囊低、中、高剂量组在连续灌胃给药3个月、6个月、恢复15 d期间，大鼠一般活动、摄食、饮水正常，毛发光泽，眼、鼻、口无分泌物，未见异常情况。在给药22周时，高剂量组有1只雄性大鼠死亡，在给药24周和25周时，低剂量组分别有1只雄性大鼠死亡，死亡大鼠解剖均未发现脏器器质性病变，提示死亡原因与药物无关，可能窒息所致。

2.2新风胶囊对大鼠体质量的影响与对照组比较，新风胶囊高剂量组雄性SD大鼠在7～12周期间体质量显著性增加(P<0.05或0.01)，而高剂量组雌性SD大鼠体质量在21周有一过性显著降低。新风胶囊中、低剂量组大鼠体质量在实验研究期间，与对照组基本一致，未见统计学意义，结果如图1所示。

2.3新风胶囊对大鼠摄食量的影响 与对照组相比，新风胶囊低、中、高剂量组在灌胃给药3个月、6个月、恢复期，大鼠摄食量均差异无统计学意义，结果如图2所示。

2.4新风胶囊对大鼠血液学指标的影响与对照组相比，新风胶囊不同剂量灌胃给药3个月、恢复期大鼠血液学指标差异无统计学意义；给药6个月时，高、中、低剂量组雄性大鼠RBC和HGB水平显著降低(P<0.05)，同期雌性大鼠RBC和HGB值与对照组比较差异无统计学意义，且各给药组大鼠RBC和HGB值均在正常值范围内，因此给药6个月时雄性SD大鼠RBC和HGB值降低与药物无关，可能属于一过性的波动，结果见表1～3。

2.5新风胶囊对大鼠血液生化指标的影响与对照组比较，连续灌胃给予新风胶囊3个月后，雄性高、中、低剂量组、雌性中剂量组大鼠AST水平，雄性高剂量组大鼠ALT水平显著降低；雄性中剂量组大鼠ALB和CHOL水平，雌性高、中、低剂量组大鼠TP和ALB水平出现一过性升高；雌性高剂量组大鼠TG水平，雌性高、中剂量组大鼠GLU水平显著降低；但上述变化无剂量关系，且在正常范围之内，属不确定变化。其他血液生化学指标差异无统计学意义，见表4。

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注：RBC：红细胞计数，HGB：血红蛋白、PLT：血小板计数，WBC：白细胞计数，NE%：中性粒细胞百分比，NE#：中性粒细胞计数，LY%：淋巴细胞百分比，LY#：淋巴细胞计数

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注：RBC：红细胞计数，HGB：血红蛋白、PLT：血小板计数，WBC：白细胞计数，NE%：中性粒细胞百分比，NE#：中性粒细胞计数，LY%：淋巴细胞百分比，LY#：淋巴细胞计数;与同性别对照组比较，aP<0.05

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注：RBC：红细胞计数，HGB：血红蛋白、PLT：血小板计数，WBC：白细胞计数，NE%：中性粒细胞百分比，NE#：中性粒细胞计数，LY%：淋巴细胞百分比，LY#：淋巴细胞计数

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注：AST：天门冬氨酸转氨酶，ALT：丙氨酸转氨酶，ALP：碱性磷酸酶，TP：总蛋白，ALB：白蛋白，CHO：总胆固醇，TG：三酰甘油，TBIL：总胆红素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：钾离子，Na+：钠离子，Cl-：氯离子;与同性别对照组比较，aP<0.05,bP<0.01

与对照组比较，连续灌胃给予新风胶囊给药6个月后，雄性大鼠高、低剂量组BUN和CREA水平，雄性中剂量组大鼠GLU水平降低。其他血液生化学指标差异无统计学意义，见表5。

与对照组比较，恢复期各组大鼠血液生化学指标未见异常变化，结果见表6。

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注：AST：天门冬氨酸转氨酶，ALT：丙氨酸转氨酶，ALP：碱性磷酸酶，TP：总蛋白，ALB：白蛋白，CHO：总胆固醇，TG：三酰甘油，TBIL：总胆红素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：钾离子，Na+：钠离子，Cl-：氯离子;与同性别对照组比较，aP<0.01,bP<0.05

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注：AST：天门冬氨酸转氨酶，ALT：丙氨酸转氨酶，ALP：碱性磷酸酶，TP：总蛋白，ALB：白蛋白，CHO：总胆固醇，TG：三酰甘油，TBIL：总胆红素，GLU：血糖，BUN：尿素氮，CREA：血肌酐，K+：钾离子，Na+：钠离子，Cl-：氯离子

2.6新风胶囊对大鼠脏器系数的影响与对照组比较，连续灌胃新风胶囊3个月后，雄性高剂量组大鼠肺脏系数，雄性高剂量组和中剂量组、雌性高剂量大鼠脾脏系数显著性降低，需病理组织学检查以进一步评价；其他各脏器系数差异无统计学意义，结果见表7。

与对照组比较，连续灌胃新风胶囊6个月后，恢复期各组大鼠脏器系数差异无统计学意义，结果见表8，9。

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注：与同性别对照组比较，aP<0.05,bP<0.01

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注：与同性别对照组比较，aP<0.05

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2.7新风胶囊对大鼠脏器病理组学的影响大鼠解剖后，经肉眼观察，各组大鼠胸腔、腹腔浆膜光滑，无胸水、出血、粘连等改变；各脏器的形态、大小、色泽均未发现肉眼可见的变化。光镜下，连续灌胃新风胶囊3个月、6个月、恢复15 d后，各组大鼠脑、胸腺、肝脏、肾脏、肾上腺、脾脏、肺脏、心脏、附睾、睾丸、卵巢、子宫等脏器病理学检查均差异无统计学意义。

3讨论

新风胶囊由黄芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣等药物组成，方中黄芪益气养血固表、利水消肿、健脾化湿除痹，薏苡仁健脾利湿、舒筋除痹，共为君药；雷公藤祛风除湿，活血通络，消肿止痛，蜈蚣祛风止痉、通络止痛、攻毒散结，共为臣药。诸药合用，共奏“益气健脾，化湿通络”之功，切中RA“脾虚湿困、气血亏虚、痰瘀互结”的基本病机[9]。

本研究发现，新风胶囊连续灌胃3个月、6个月、恢复15 d后，各组大鼠一般状况、摄食量、体质量均无明显变化；实验过程中，有3只大鼠死亡，但大体解剖均未发现脏器器质性病变，提示其死亡原因与药物无关，可能是窒息所致。

血液学、血液生化学检测发现，新风胶囊连续灌胃3个月、6个月、恢复15 d后，其各项血液学、血液生化学指标基本正常；虽有个别指标存在统计学上的差异，但差异无规律性，且未随给药周期的延长、给药剂量增大而加剧。因此，考虑上述变化属正常生理范围的波动，并无毒理学意义[10]。

大鼠脏器系数检测发现，灌胃给予新风胶囊6个月、恢复期各组大鼠脏器系数未见显著变化；灌胃给药3个月时，肺脏、脾脏系数虽有统计学差异，但6个月时恢复正常，同时结合大鼠剖检和组织病理学检查，并未发现到，肺脏、脾脏有外观和相应的病理组织学改变。因此，考虑上述差异可能与解剖操作、放血不充分有关，而与新风胶囊本身无关。

综上，新风胶囊无明显的长期毒性，其临床用药量为安全剂量，为新风胶囊临床应用提供了可靠的实验数据。

(本文图1～4见插图1-2)

参考文献

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[4]刘健，万磊，黄传兵，等.类风湿关节炎患者肺功能变化及中药新风胶囊干预研究[J].中国临床保健杂志，2014，17(1)：102-106.

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[9]Liu J，Chen RL.The potential role of chinese medicine in ameliorating extra-articular manifestatinos of rheumatoid arthritis[J].Chin J Integr Med，2011，17(10)：735-737.

[10] 苏玉严，朱海明，杜文超，等.金克痤胶囊浸膏粉对大鼠的长期毒性试验[J].中国医院药学杂志，2014，34(16)：1350-1355.

Experimental study on long-term toxicity of Xingfeng capsules in ratsJiangHui*,LiuJian,MengMei,DaiMin,DongLiuyi(*TheFirstHospitalAffiliatedtoAnhuiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Hefei230031,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the long-term toxicity of Xinfeng capsules(XFC) by continuously oral administration on rats.MethodsSD rats were randomly divided into four groups: normal control group,XFC high-dose group,XFC medium -dose group and XFC low-dose groups.Different doses of XFC were administrated by gavage once a day for 6 months.The body weight and food intake were observed and calculated during the administration.The hematology,blood biochemistry were measured at the 3,6 months of the administration and 15 days after the end of administration,respectively.After that,all rats were executed and main organs were examined by pathological method.ResultsThe appearance and behavior,body weight and food intake of rats treated with XFC were no significant difference compared with the controls.Individual index of hematology,blood biochemistry such as RBC,HGB,AST had small change but were within the normal physiological range.In addition,XFC reduced the lung and spleen coefficients,but no significant change appeared in histopathologic morphology.ConclusionXFC has no obvious toxicity in rats for long-term administration.

[Key words]Drug toxicity;Drugs Chinese herbal;Arthritis,rhenmatoid;Rats,sprague-dawley

(收稿日期：2015-09-10)

Corresponding author:Liu Jian,Email: liujianahzy@126.com

中图分类号:R595

文献标识码:A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2016.01.024

作者简介：姜辉,博士在读,主管药师,Email:jhanbing@163.com通信作者：刘健，主任医师，博士生导师，Email: liujianahzy@126.com

基金项目：国家科技支撑计划新安医学传承与发展研究子课题新安医家名方验方筛选研究(2012BAI23B03)；国家中医药重点学科临床中药学建设项目(国中医药人教发[2012]32号)