马青松， 王 丹， 庞玉新， 杨 全， 李小婷， 许罗凤

(1.广东药学院 中药学院， 广东 广州 510006； 2.中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所/农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室， 海南 儋州 571737； 3.海南省艾纳香工程研究中心， 海南 儋州 571737)

艾纳香油对小鼠耳肿胀的抗炎效果

马青松1,2,3， 王 丹2,3， 庞玉新2,3， 杨 全1*， 李小婷1,2,3， 许罗凤1,2,3

(1.广东药学院 中药学院， 广东 广州 510006； 2.中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所/农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室， 海南 儋州 571737； 3.海南省艾纳香工程研究中心， 海南 儋州 571737)

为了解艾纳香油的抗炎作用机理，为其开发应用提供参考，将60只昆明种小鼠(SPF级)随机分为艾纳香油高(40%)、中(20%)、低(10%)剂量组，氢化可的松组，模型对照组和溶剂对照组，用二甲苯致炎，采用紫外可见分光光度法测定致炎耳组织中前列腺素E2(PGE2)和血清中丙二醛(MDA)的含量，并采用超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒测定血清SOD活性。结果表明：与模型对照组相比，艾纳香油高、中、低剂量组对二甲苯所致的小鼠耳肿胀均有显著抑制作用(P<0.05)，降低PGE2含量，其中低剂量组可极显著降低致炎耳组织中PGE2含量(P<0.01)；艾纳香油高、低剂量组均显著提高血清SOD的活性(P<0.05)，艾纳香油可降低血清MDA含量(P>0.05)。艾纳香油具有一定的抗炎作用，可能与降低炎症区域PGE2含量和提高机体抗氧化损伤有关。

艾纳香油； 耳肿胀； 抗炎； 前列腺素E2； 氧自由基

艾纳香〔Blumeabalsamifera(L.) DC.〕为菊科艾纳香属植物艾纳香的全草，在我国民间用于治疗风寒感冒、产后风痛、跌打损伤、疮疖痛肿、湿疹皮炎等，是黎族、苗族等少数民族的常用药[1-2]。艾纳香油是艾纳香叶的粗升华物经压榨分离而得，含挥发油、油脂等成分，主要有l-龙脑、樟脑、β-石竹烯、α-古芸烯、γ-桉叶油醇、芳樟醇和愈创木醇等[2-3]。艾纳香油有独特的芳香气味，被广泛应用于香料和化妆品行业。目前，艾纳香油药理活性的报道集中在抗菌、抗氧化和抗酪氨酸激酶活性等[4-6]方面，对抗炎的研究鲜见报道。为此，笔者等在2015年4—6月采用小鼠急性耳肿胀模型，研究艾纳香油皮肤外用对小鼠耳肿胀的抗炎症作用，并测定炎症组织的前列腺素E2(PGE2)含量和血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量，以了解其抗炎作用途径，为其在抗炎方面的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 动物 昆明(KM)种小鼠60只，SPF级，均为雄性，体重18～22 g，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK9(湘)2014-0011；试验条件为白天∶夜晚=12 h∶12 h，室温(22±2)℃，相对湿度(55±5)%，饲料、饮水自由摄食。

1.1.2 药品与试剂 艾纳香油，由贵州艾源生态药业开发有限公司提供；丁酸氢化可的松乳膏(含量0.1%，批准文号：国药准字H10940095)，天津金耀集团有限公司生产；SOD试剂盒，南京建成生物工程研究所生产；有机试剂二甲苯、乙醇和甲醇均为分析纯，由西陇化工股份有限公司生产。

1.1.3 仪器与设备 分析天平(CPA225D，Sartorius公司)，紫外可见分光光度计(2012PCS，UNICO公司)，电热恒温水浴锅(HWS24，上海-恒科学仪器有限公司)，酶标仪(Elx800，美国Biotek公司)，化学实验室打孔器(宁波凯迪科教仪器有限公司)等。

1.2 对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制效果测定

取小鼠60只，随机分成6组：模型对照组，溶剂对照组，氢化可的松组，艾纳香油高(40%)、中(20%)、低(10%)剂量组。移液枪吸取二甲苯0.5 mL，于各组小鼠左耳正、反面均匀涂抹，右耳不造模，作为自身对照。30 min后在致炎处涂抹给药，溶剂对照组给予80%乙醇0.1 mL，氢化可的松组给予氢化可的松乳膏0.1 g，艾纳香油高、中、低剂量组给予艾纳香油0.1 mL，模型对照组不处理。给药1 h后颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径6～7 mm化学实验室打孔器分别在每只小鼠两耳的同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片质量之差表示肿胀程度，计算小鼠耳肿胀度和抑制率。

耳肿胀度=致炎侧耳片重-非致炎侧耳片重

抑制率=[(模型对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型对照组平均肿胀度]×100%

1.3 致炎耳组织PGE2含量的测定

取小鼠各组致炎耳组织放入小匀浆杯中，用眼科剪尽快剪碎组织，加入0.5 mL冰冷的生理盐水(0.9% NaCl)，用内切式匀浆机匀浆，每次匀浆时间约10 s，匀浆4～5次，所得组织匀浆液倒入离心管，以3 000 r/min离心15 min，轻轻吸取上清液0.2 mL于试管内，加入0.5 moL/L氢氧化钾甲醇液2.0 mL，50℃水浴20 min异构化，加甲醇1.0 mL稀释。在299 nm(批量测定前进行预试验，采用紫外可见分光光度计进行全波长扫描的最大吸收波长)处测定吸光度，蒸馏水空白调零，以吸光度值A代表各组PGE2的含量。

1.4 血清MDA和SOD的测定

血液于3 500 r/min离心15 min，吸取上清液即血清，-20℃下保存。MDA含量测定：取血清0.1 mL，加入20%三氯乙酸溶液至1.25 mL，摇匀后加入0.67%硫代巴比妥酸溶液1.0 mL，沸水浴加热40 min，流水冷却，3 500 r/min离心10 min，使沉淀完全，上清液于532 nm处测定吸光度。注意用移液器吸取上清液加入比色皿中，避免倾倒，以免沉淀进入比色皿影响吸光度，以10 nmol/mL四乙氧基丙烷溶液为标准品计算含量。SOD含量的测定按照SOD试剂盒说明书进行。

1.5 统计分析

采用SPSS 19.0统计软件进行数据处理，小鼠耳肿胀度、PGE2含量、MDA含量和SOD活性均用平均数±标准误表示，组间比较采用方差齐性检验和t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 抑制耳肿胀的效果

模型对照组小鼠造模后致炎耳出现明显的红肿现象，耳肿胀度最大，为14.42 mg(表1)，表示造模成功。与模型对照组相比，溶剂对照组对二甲苯所致的小鼠耳肿胀没有显著差异，表明溶剂对小鼠耳肿胀没有产生明显抑制作用；氢化可的松组具有极显著抑制作用；艾纳香油高、中、低剂量组均具有显著抑制作用，耳肿胀抑制率分别为29.89%、28.67%和23.33%，表明3种剂量的艾纳香油均可显著抑制二甲苯所致的耳肿胀，且存在一定的剂量依赖关系。

表1 各组小鼠耳肿胀的抑制效果

Table 1 Inhibition effect of BBO on mouse ear edema induced by xylene (n=10)

组别Groups耳肿胀度/mgEarswellingdegree耳肿胀抑制率/%Inhibitionrateofearswelling模型对照ModelCK14．42±3．47-溶剂对照SolventCK13．62±2．665．58氢化可的松Hydrocortisone7．88±4．89∗∗45．3340%艾纳香油40%BBO10．11±3．23∗29．8920%艾纳香油20%BBO10．29±3．20∗28．6710%艾纳香油10%BBO11．36±3．99∗23．33

注：*、**分别表示与模型对照组相比，在0.05和0.01水平上差异显著(下同)。

Note: * and ** indicates significance of difference at 0.05 and 0.01 level compared with model CK respectively.The same below.

表2 各组炎症小鼠PGE2、MDA的含量和SOD活性

2.2 耳组织中PGE2含量

从表2看出，与模型对照组相比，艾纳香油各剂量组的PGE2含量均不同程度降低，其中10%艾纳香油组的降低有统计学意义。表明，低剂量艾纳香油能使致炎耳组织中PGE2含量极显著降低。

2.3 血清MDA含量和SOD活性

从表2看出，与模型对照组相比，艾纳香油各剂量组均可降低小鼠血清MDA含量，高、中和低剂量组分别为5.55 nmol/mL、4.95 nmol/mL和4.93 nmol/mL，但无统计学意义；艾纳香各剂量组均可提高小鼠血清SOD活性，其中高剂量组和低剂量组能显著提高SOD的活性。

3 结论与讨论

急性炎症是炎症的早期阶段，通过激活免疫系统的细胞介导，不同类型细胞发生聚集并导致各种促炎和抗炎介质的产生，如促炎介质PGE2[7]。PGE2是由趋化至炎症灶的中性粒细胞释放，是花生四烯酸经环氧化酶而生成的一类重要炎症介质[8]。测定结果表明，艾纳香油低剂量组(10%)可极显著降低耳肿胀小鼠致炎组织中PGE2含量，表明艾纳香油的抗炎作用可能与降低炎症区域PGE2的含量有关。

MDA是氧自由基与体内脂质反应产生的过氧化产物，可以反映机体受损的情况；SOD通过清除过量的超氧自由基，保护细胞膜免受损伤，是一种具有抗氧化损伤功能的金属酶[9]。因此，测定MDA和SOD可反映炎症对细胞损伤的程度以及氧自由基的高低。测定结果表明，艾纳香油可在一定程度上提高小鼠血清SOD活性，降低MDA含量，表明艾纳香油具有保护细胞膜和机体免受损伤作用。

艾纳香油可以抑制二甲苯所致的耳肿胀，抑制炎症介质水平，恢复机体的抗氧化酶活性，具有一定的抗炎效果。另外，艾纳香油对皮肤刺激作用较弱，无毒副作用[10]，因此艾纳香油在皮肤抗炎方面具有一定的优势，可以开发为具有潜在抗炎活性的药用化妆品。

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[5] 夏 嬿，李 祥，陈建伟.不同提取方法对艾纳香挥发油化学组成的影响及其体外抗氧化活性[J].中成药，2014,36(10):2221-2224.

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(责任编辑： 冯 卫)

Anti-inflammatory Effect ofBlumeabalsamiferaOil Against Mouse Ear Edema

MA Qingsong1,2,3， WANG Dan2,3， PANG Yuxin2,3， YANG Quan1*， LI Xiaoting1,2,3， XU Luofeng1,2,3

(1.CollegeofTraditionalChineseMedicine，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou,Guangdong510006; 2.InstituteofTropicalcropsGermplasmResources,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/SouthernChinaKeyLaboratoryofCropGeneResources,Danzhou,Hainan571737; 3.HainanResearchCenterforBlumeaBalsamiferaEngineering，Danzhou,Hainan571737,China)

60 SPF Kunming mice were randomly divided into 40% BBO group, 20% BBO group, 10% BBO group, hydrocortisone group, mode control group and solvent control group. PGE2and serum MDA content of the inflamed ear tissues was determined by UV spectrophotometry and the serum SOD activity was detected by SOD activity assay kit to discuss the anti-inflammatory mechanism ofB.balsamiferaoil (BBO) and provide a reference for development and application ofB.balsamiferaoil (BBO). Results:B.balsamiferaoil (BBO) has the significant inhibition effect on mouse ear edema treated with xylene compared with the mode control group (P<0.05) and reduces its PGE2content. BBO in 10% BBO group reduces PGE2content in the inflamed ear tissues very significantly. BBO in 40% BBO group and 10% BBO group increases serum SOD activity (P<0.05) and reduces serum MDA content (P<0.05). BBO is of a certain anti-inflammatory action, which may be related to reducing PGE2content in inflammation area and improving the body’s anti-oxidative damage.

Blumeabalsamiferaoil (BBO); ear edema; anti-inflammatory; prostaglandin E2; oxygen radical

2015-11-08； 2016-01-28修回

贵州省重大科技专项计划项目[黔科合重大专项字(2013)6011]；海南省科技合作专项(6011，2013)；海南省科技合作专项“热带药用植物种质资源评价、保护和开发利用”(KJHZ2015-15)

马青松(1991-)，男，在读硕士，研究方向：中药质量控制。E-mail：maqing_song@126.com

*通讯作者：杨 全(1972-)，男，教授，博士，从事中药资源开发研究。E-mail: yangquan7208@vip.163.com

1001-3601(2016)04-0169-0100-03

S853.7

A