陆毅奇　黄剑岗　王祥林

1)扬州大学第五临床医学院常熟市二院老年医学科　常熟　215500　2)江苏常熟市中医院心血管内科　常熟　215500



老年急性脑梗死患者血浆热休克蛋白70和血清白介素10及18水平测定的价值

陆毅奇1)黄剑岗1)王祥林2)△

1)扬州大学第五临床医学院常熟市二院老年医学科常熟2155002)江苏常熟市中医院心血管内科常熟215500

【摘要】目的探讨外周血指标水平的变化与病情进展及动脉粥样硬化程度的关系，评价其测定的临床价值。方法血浆HSP70水平检测方法采用酶联免疫法，血清IL-10和IL-18水平测定采用放射免疫分析法。血清糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平测定均采用7600-020型全自动生化仪检测。颈总动脉内中膜厚度(IMT)采用彩色多普勒超声仪测定。结果患者组高血压家族史、急性脑梗死(ACI)家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8项因素与对照组比较，差异均有统计学意义(P均<0.01)。3组不同病情患者外周血指标水平显示，轻型脑梗死组IL-10水平显著低于对照组(P<0.05)，而IL-18水平则显著高于对照组(P<0.05)；中型组和重型组3项外周血指标与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)；相邻组比较差异有统计学意义(P<0.05)。将IMT与HSP7O、HbAlc、IL-10和IL-18水平分别行相关性分析，分别为r=0.176，P<0.05，r=0.231，P<0.01，r=-0.144，P<0.05和r=0.345，P<0.01。结论外周血标志物参与了ACI的病理过程，其测定对于了解、评估脑梗死病情和抗感染免疫功能及动脉粥样硬化程度有较大帮助。

【关键词】急性脑梗死；热休克蛋白70；动脉内中膜厚度；白介素10；白介素18

热休克蛋白(HSPs)是机体在遭受各种应激性损害时所产生的一组具有高度保守性的蛋白质，又称应激蛋白。其在人体生理和病理状态下具有重要的细胞保护作用。国内研究[1]认为，HSP70对神经损伤具有保护作用，其含量的变化与脑损伤程度密切相关，已成为近年来神经损伤研究领域中少数几个热点血液生化标志物之一。有研究[2]还阐明，急性脑梗死(acute cerebral infarction，ACI)患者血浆热休克蛋白70(heat-shock proteins 70，HSP70)发生了显著变化，且与病情的进展程度关系一致。为进一步探讨外周血中相关标志物水平的变化与病情进展的关系，评价其测定的临床价值，本研究测定了32例ACI患者的血浆HSP70、血清IL-10和IL-18等指标水平，并与其他血清生化指标进行了相关性分析。现报道如下。

1资料与方法

1.1研究对象选择2012-01-2013-12入住我院和中医院的老年脑梗死患者32例，男25例，女7例，年龄61～88岁，平均(71.7±5.9)岁。(1)ACI诊断及分组符合《脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分标准》[3]。所有病例均经头颅CT或MRI证实。(2)病程选择发病第1天，并均首次发病。按该标准[3]将不同病情患者分为轻型(n=12)、中型(n=8)和重型(n=12)3组进行测定。另选择同期来我院健康体检中心的健康老年人35例为对照组，男25例，女10例，年龄60～79(67.3±6.5)岁。临床三大常规、血清学、肝肾功能、生化、免疫学指标水平均属正常范围。排除心理疾病及其他急、慢性感染和患者组所列疾病。亦未接受过各种免疫功能制剂的治疗。排除标准：合并房颤、感染性心内膜炎、全身感染、肿瘤、糖尿病患者以及心、肝、肾衰竭者、疑似脑卒中的疾病，如低血糖、偏头痛、脑出血及短暂性脑缺血发作。既往也未接受过各种免疫功能制剂的治疗。

1.2测定方法

1.2.1标本采集：分别抽取ACI患者入院后清晨空腹肘静脉血6 mL，将3 mL血注入含有40 μL 10% EDTA-Na2和60 μL抑肽酶的抗凝试管中混匀，余3 mL注入干燥洁净的玻璃试管中，均于2 500 r/min，2～6 ℃低温离心10 min分离血浆和血清，将其注入各自试管中，加盖塞紧，置于-70 ℃低温冰箱中保存待测。正常对照组标本采集条件相同。

1.2.2测定方法：血浆HSP70水平检测采用酶联免疫法，试剂盒由爱尔兰Biotrin International公司提供。检测仪器为美国生产的FAMIER-150型全自动酶标分析系统。血清IL-10和IL-18水平测定采用放射免疫分析法，试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供。测量仪器为由安徽中科中佳科技有限公司生产的GC-911型全自动γ-计数器。血清糖化血红蛋白(glycohemoglobin A1c，HbA1c)、TC、TG、LDL-c、HDL-c水平测定均采用日立公司生产的7600-020型全自动生化仪检测。操作严格按试剂盒说明书进行。

1.2.2脑梗死程度判定：将32例脑梗死患者于入院时分别按[3]进行评分，用于实施不同病情的分组研究。最高评分为45分(重型脑损伤)，最低为0分(正常脑功能)。本文3组评分情况：轻型脑梗死组(12例，评分0～15分)、中型脑梗死组(8例，评分16～30分)和重型脑梗死组(12例，评分31～45分)。

1.2.3IMT测定：于入院第1天采用美国通用电器公司(GE)的VIVID-7彩色多普勒超声仪检测双侧颈总动脉内中膜厚度(intima-media thickness，IMT)，取双侧IMT均值。按斑块积分法[2]：不计算各斑块长度，只分别将同侧各孤立的动脉粥样硬化斑块的最大厚度(mm)进行相加，得到该颈动脉斑块积分，两侧颈动脉斑块积分之和为斑块总积分，斑块积分1.1～5.0为轻度颈动脉粥样硬化；5.1～10.0为中度颈动脉粥样硬化；>10.0为重度颈动脉粥样硬化。

1.3统计学处理采用SPSS 11.5统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验，计数资料以百分率(%)表示，采用χ2检验，相关性检验采用直线回归相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.12组临床资料和常规检查指标水平比较患者组性别、年龄、吸烟百分率，饮酒百分率和TC 5项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)，但高血压家族史、ACI家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8项因素与对照组比较差异均统计学意义(P均<0.01)。见表1。

表12组临床资料和常规检查指标

指 标患者组(n=32)对照组(n=35)t/χ2值P值年龄/岁71.7±5.969.3±6.50.6420.601性别(男)/%65.2370.120.0120.965吸烟百分率/%52.1748.860.1450.699饮酒百分率/%21.7817.860.1360.708高血压家族史/%10.8952.217.7820.000ACI家族史/%6.1218.236.5620.000血糖(mmol/L)6.87±0.974.98±0.790.6980.001TC(mmol/L)4.09±0.464.01±0.390.4090.498TG(mmol/L)1.89±0.431.03±0.249.5620.000LDLc(mmol/L)4.15±0.692.35±0.377.9740.000HDLc(mmol/L)1.21±0.151.95±0.180.7520.000HbA1c/%6.26±0.754.72±0.5314.8710.000IMT(mm)1.12±0.290.71±0.2113.8930.000

2.2不同病情ACI患者与对照组外周血指标水平比较3组不同病情患者外周血指标水平显示，轻型脑梗死组IL-10水平显著低于对照组(P<0.05)，而IL-18水平则显著高于对照组(P<0.05)；中型组和重型组3项外周血指标与对照组差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)；相邻组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2不同病情ACI患者与对照组外周血指标水平

组别nHSP70(ng/L)IL10(pg/mL)IL18(pg/mL)对照组3514.09±4.0249.41±9.12201.77±71.98轻型组1217.12±6.0130.10±7.61a308.09±81.75a中型组829.31±10.02a25.96±5.79b387.09±89.76b重型组1248.31±16.28bc15.27±8.87bc472.07±98.39bc

注：与对照组比较，aP<0.05，bP<0.01；与相邻组比较，cP<0.05

2.3IMT与外周血四项指标水平的相关性分析见表3。

表3　IMT与外周血四项指标水平的相关性分析

3讨论

HSPs是生物细胞在受热和其他应激因素(如缺血、缺氧)刺激后，产生的一组特殊的蛋白质，它能保护机体细胞在随后的致死性应激中不受或少受伤害，即应激耐受性。而HSP70是HSPs家族中最为重要的一族，具有分子伴侣功能，参与免疫反应、抗细胞凋亡、抗氧化、提高细胞的应激耐受性、促进细胞增殖、参与细胞骨架的形成和修复等。研究[5]发现，具有γδT细胞受体并诱导细胞毒性的胸腺依赖性淋巴细胞表达HSP70的炎性巨噬细胞，从而使宿主器官免受因巨噬细胞所致的局部组织损伤，是一种人体重要的多功能保护性蛋白伴侣，许多疾病的发生和发展都伴随着该指标水平的变化。

表1结果显示，患者组高血压家族史、ACI家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8项指标与对照组比较均存在显著性差异(P均<0.01)。表明患者体内的8项指标处于高水平状态。由于以往文献[2，6]对临床记录资料与ACI发病的关系观点和结果不一，故笔者仅选择了HbA1c和IMT二项检测指标与HSP70进行了相关性分析。

表2结果示，中型和重型脑梗死组患者血浆HSP70水平均显著高于对照组(P<0.05或0.01)；相邻组比较也均存在显著差异(P<0.05)。与IMT的相关分析结果显示，前者呈显著正相关(r=0.023，P<0.05)，且发现IMT与HbA1c的表达水平呈显著正相关(P<0.01，r=-0.144)。结果表明，中型和重型ACI组患者HSP70水平均显著升高。再次证实了ACI患者血浆HSP70的表达水平与脑梗死程度呈平行关系；即梗死组织破坏越重表达水平越高。有关其在ACI患者血浆中升高的原因较为复杂。究其原因，笔者认为还是与患者ACI导致脑组织缺血缺氧、坏死，炎症渗出，引起炎性细胞因子大量合成分泌有关。因此时患者的防御机制为保障体内细胞大量应激合成蛋白质的正常结构，用于应激性防御需要。同时机体的体温调节中枢即应激下调，体温升高；相关细胞和体液的信号通路将诱导伴侣性功能蛋白-HSP70的伴随合成并向细胞外释放，导致循环血液中水平升高。本文中中型和重型ACI组患者IL-18水平的升高，也证实ACI患者血浆HSP70的表达水平与炎症发生、发展存在密切的因果关系。故有研究将其誉为细胞受损敏感而可靠的指标之一。在临床内外科和其他各专业系统疾病的研究中，各种应激刺激均可诱导热休克基因的表达。值得一提的是，本文还发现重型ACI组患者的HSP70表达水平与IMT值存在显著的正相关；IMT与HbA1c的表达水平也呈显著正相关。提示HSP70和HbA1c水平的升高与动脉粥样硬化发生与发展关系密切，2种指标的测定对于了解患者由动脉粥样硬化向ACI的病理进展机制和评估病情有不可忽视的应用价值。到目前为止，本指标的测定虽尚缺乏可靠的诊断特异性，但可为进一步深入研究人体的应激、保护性防御机制的运作，提供了又一个新的生物学指标。

再从血清IL-10和IL-18水平的变化特点看，其水平于轻度ACI组前者显著低于对照组，而后者则显著高于对照组(P均<0.05)，中型和重型组患者水平均呈显著低下及显著高水平态势(P<0.01)。二者与IMT值分别存在显著的负相关和正相关性(r=-0.144，r=0.345，P<0.05或<0.01)。国外学者[7]的研究也提示，血清HSP70和炎性细胞因子的含量呈正相关，并认为HSP70升高是机体细胞启动免疫保护反应的上游事件。Yoshikai等[8]也证实，HSP70可活化CD4+T细胞，产生IL-10，从而可抑制Th1细胞介导的过度炎症反应。但如果HSP 70产生过量，也能抑制IL-10的产生，而不能抑制IL-6的生成[9]。由于IL-18与IL-6同为致炎性细胞因子，故可以确认本文结果与上述文献基本吻合。又因二者在炎症感染和抗感染的病理过程中是一对功能相互拮抗的平衡体系。二者的变化随病情的加重其水平呈负向形梯度式减增，显示患者体内存在明显的感染-抗感染功能的失调，同时又可说明患者存在细胞免疫功能的降低。其测定对于临床了解患者的抗感染免疫功能状态有不可忽视的作用。而用于评估动脉粥样硬化程度笔者认为价值似不大。理由是因二者在ACI的病程进展中与其他病理应激机制存在诸多交叉，如炎症应激的启动、细胞免疫应答上调，甚至还涉及到组织的精细解剖的改变和修复过程的参与等人体整套防御机制的运作，故认为要明确其实际应用价值尚待大样本量的基础及临床研究。

参考文献

[1]Hachinski V，Ladecola C，Pctersen RC，et al.National institute of neurological disorders and stroke-canadian stroke network vascular cognitive impairment harmonization standards[J].Stroke，2006，37(9)：2 220-2 241.

[2]薛建中.ACI患者血清HSP7O、Copeptin和S100B水平与认知功能障碍的相关性分析[J].放射免疫学杂志，2013，26(4)：51-54.

[3]缪鸿石，朱镛连.脑卒中的康复评定和治疗[M].北京：华夏出版社，1996：141-144.

[4]陈瑞英，郑清存，安雅臣，等.脂蛋白相关性磷脂酶A2、超敏C 反应蛋白与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块的关系[J].中国实验诊断学，2011，15(7)：1 122-1 124.

[5]Hirsh MI，Junger WG.Roles of heat shock proteins and gamma delta T cells in inflammation [J].Am Respir Cell MolBiol，2008，39(5)： 509-513.

[6]黄桂萍.2型糖尿病并脑梗死患者超敏C反应蛋白和同型半胱氨酸与颈动脉粥样硬化斑块类型的关系[J].中国实用神经疾病杂志，2013，16(19)：60-61.

[7]Njemini R，Lambert M，Demanet C，et al.Elevated serum heat-shock protein 70 levels in patients with acute infection：use of an optimized enzyme-linked immunosorbent assay[J].Scand Immunol，2003，58(6)：664-669.

[8]Yoshikai Y.The roles of heat shock proteins in host defense against bacterial infection[J].Rinsho Byori，1998，46(6)：564-573.

[9]ding XZ，Fernandez-Prada CM，Bhattacharjee AK，et al.Over-expression of hsp-70 inhibits bacterial lipopolysaccharide-induced production of cytokines in human monocyte-derived macrophages[J].Cytokine，2001，16(6)：210-219.

【中图分类号】R743.33

【文献标识码】A

【文章编号】1673-5110(2016)02-0032-03

通讯作者：△王祥林，E-mail：csxqyy@sina.com