◆纪朋艳

PCR反应体系的设计及优化

◆纪朋艳

PCR是分子生物学中常用的实验技术手段，在揭示生命现象规律方面发挥了至关重要的作用。目前在进行PCR实验操作时，因为PCR反应体系设计不合理而导致实验失败的事例较多。因此，从优化PCR反应体系的角度出发，对提高PCR反应效率进行探讨。

PCR；反应体系；实验

1 标准PCR反应体系

标准的PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）反应体系由缓冲液、脱氧核苷三磷酸、DNA聚合酶、引物、DNA模板等构成[1]，每个部分在PCR反应中都有重要的作用，并且在合适的浓度范围内才能促进PCR反应的正常进行。

2 PCR反应体系设计

模板核酸DNA模板是PCR反应复制的原始基础，模板质量的优劣，直接决定了整个PCR反应的成败。目前DNA提取方法主要有酚氯仿、高盐法及各试剂公司的试剂盒。酚氯仿作为传统经典的方法，一直受到科研工作者的青睐，其DNA提取质量与纯度较高，但是缺点是程序繁琐、提取效率低。目前在一些样品比较大的实验中，主要采用高盐法提取DNA。试剂盒提取DNA效率与质量都较好，但是费用较高。在PCR反应体系中，一般加入模板的质量为50～100 ng，加入模板的量过多，或产生较多的杂质，出现很多非特异性产物；如果加入的模板较少，产生的特异性产物较少，在检测过程中不易检测。

DNA聚合酶DNA聚合酶是PCR反应中将游离的散乱的碱基按照模板中碱基的顺序，连接于DNA双链中的粘合剂。目前DNA聚合酶主要有两种类型：一种是从水生杆菌中提取的天然聚合酶；另一种是利用大肠杆菌人工合成的基因工程酶。……