唐艳萍 谢雨萱 蔡政民 苏程琳 谭晓玉 张力图 利基林

(广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部，南宁市 530021，E-mail：tangyanping1986@126.com)

论著·临床研究

肝癌患者术前血清胸苷激酶1表达水平及其临床意义▲

唐艳萍 谢雨萱 蔡政民 苏程琳 谭晓玉 张力图 利基林

(广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部，南宁市 530021，E-mail：tangyanping1986@126.com)

目的 探讨肝细胞肝癌患者术前血清胸苷激酶1(TK1)表达水平及其临床意义。方法 采用免疫印迹增强化学发光法检测125例肝细胞肝癌患者(肝癌组)、30例肝脏良性病变患者(肝脏良性病变组)和40例健康体检者(健康对照组)血清TK1水平。分析肝癌组患者TK1水平与临床病理特征的关系。结果 肝癌组血清TK1水平和阳性表达率均明显高于肝脏良性病变组和健康对照组(P<0.05)，而肝脏良性病变组与健康对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。巴塞罗那临床肝癌分期为(B+C)期肝癌患者血清TK1水平高于(0+A)期肝癌患者(P<0.05)。结论 检测血清TK1对肝癌的诊断具有一定的临床参考价值。

肝细胞肝癌；血清胸苷激酶1

肝细胞肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一。大部分患者就诊时病情已属中晚期，失去了最佳治疗时机，早期明确诊断及正确治疗是影响预后的关键，因此，寻找对肝癌早期诊断有辅助作用的血清肿瘤标志物具有重要的意义。胸苷激酶1(thymidine kinase 1，TK1)是一种与细胞DNA合成和增殖密切相关的激酶，其表达水平与DNA合成呈正相关。检测血清中TK1含量的变化反映患者体内肿瘤细胞的增殖速度，可作为肿瘤细胞增殖水平的监控指标，也有助于临床评估肿瘤的增殖度恶性程度[1]。本研究应用免疫印迹增强化学发光法检测125例初治原发性肝癌患者术前的血清TK1水平，并与肝脏良性疾病患者和健康体检者的血清TK1水平进行比较，以探讨血清TK1在诊断肝癌中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2012年1月至2015年5月于广西医科大学附属肿瘤医院住院治疗的肝细胞肝癌患者125例(肝癌组)，其中男性107例、女性18例，年龄23～79岁，中位年龄50岁。全部病例均经肝穿刺活检或术后病理确诊，能够进行病理分级且无异议，且临床病史资料完整。另选取肝脏良性疾病患者30例(肝脏良性病变组)，其中男性18例、女性12例，年龄27～85岁，中位年龄56岁，肝血管瘤11例，肝囊肿12例、肝腺瘤3例和肝硬化4例，均经胸腹部CT、磁共振等辅助检查排除肿瘤。选取健康体检者40例作为健康对照组，其中男性27例、女性13例，年龄24～70岁，中位年龄48岁，均无心、胃、肺的不良疾病，同时受试者均无肝部疾病史，且排除贫血、女性月经期等处于细胞增殖状态。3组性别构成、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 主要试剂及仪器 TK1检测试剂盒(生产批号：NT3160105A)和CIS系列化学发光数字成像分析仪均由深圳市华瑞同康生物技术有限公司提供。

1.3 检测方法 采用免疫印迹增强化学发光法检测血清TK1值。所有受试者均于清晨空腹采集静脉血2 ml，血标本置于真空采血管中，室温下静置1 h；4 000 r/min常温离心10 min，分离血清，贮存于-20℃备用。检测模板加标准品、待测样品，室温晾干20～30 min；稀释液振摇洗膜2次，5 min/次；加入一抗，室温振摇反应2 h；漂洗后加二抗室温反应40 min；洗涤，加入链酶亲核素一酶复合物，室温反应1 h；洗涤，加入 电化学发光发光剂过膜浸湿1 min，上机检测。TK1>2 pmol/L即为TK1阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料呈非正态分布，采用中位数表示，比较采用Kruskal-Wallis检验；计数资料比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 肝癌组、肝脏良性病变组与健康对照组血清TK1表达水平的比较 肝癌组TK1水平和阳性表达率均高于肝脏良性病变组与健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏良性病变组与健康对照组TK1水平和阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组血清TK1表达水平的比较

注：与肝癌组比较，*P<0.05。

2.2 血清TK1水平与肝癌临床病理特征之间的关系 根据性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤数目、HBsAg、 甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)、有无包膜、有无癌栓、有无肝硬化、组织分化程度及巴塞罗那临床肝癌(Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC)分期等分组比较，结果显示，BCLC分期(B+C)期肝癌患者血清TK1水平高于(0+A)期肝癌患者(P<0.05)，但不同性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数目、AFP水平、HBsAg水平以及有无癌栓、肝硬化及组织分化者的TK1浓度比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同肝癌临床病理特征 患者的血清TK1水平比较[中位数(最小值，最大值)]

3 讨 论

TK1与细胞增殖密切相关，其存在于细胞质中，是DNA合成过程中嘧啶补救途径的限速酶，它在三磷酸腺苷和镁离子参与的条件下，催化脱氧胸苷为脱氧胸苷一磷酸进而形成DNA合成所必需的脱氧胸苷三磷酸[1]。正常细胞中TK1受细胞周期的调控，在G1晚期时开始升高，在DNA 合成期开始急剧升高直至S和S2交界处，从G2晚期开始细胞中的TK1急剧降解，直至降低到G1前期最低水平[2]。对于肿瘤患者而言，处于S期、G2期的细胞比例高，原来依赖于后期促进复合物介导的泛素-蛋白酶体降解途径等在内的一系列细胞周期调控机制被打乱，使得TK1在肿瘤细胞的G1/S期交界处开始升高并持续至G2或M期。因此，健康人静止细胞及血清中的TK1浓度极低，一旦细胞发生癌变，恶性肿瘤患者TK1的含量随着细胞的急剧增殖而升高，超过正常水平的数倍[3]。血清中TK1的含量在一定程度上能反应体内肿瘤细胞的增殖情况。

作为一种与肿瘤分裂增殖相关的重要新指标，TK1已应用于多种肿瘤的诊断，包括非小细胞肺癌[4]、胃癌[5]、乳腺癌[6]、膀胱癌[7]等。在本研究中，肝癌组患者TK1水平和阳性表达率均显著高于肝良性疾病组和健康对照组(P<0.05)，这与肝癌患者肿瘤负荷较高、细胞增殖旺盛有关。此外，健康对照组、肝脏良性疾病组及肝癌组的TKl水平依次升高，推测可能与细胞增殖活性的逐步增强有关，但肝脏良性疾病组与健康对照组之间，TK1水平差异无统计学意义(P>0.05)，这提示血清TK1的检测对肝癌的诊断具有潜在的应用价值。

对于健康人和肿瘤患者血清中TK1水平不同的具体机制有几种假说，其中最重要的一种假说是与细胞死亡相关：非恶性细胞在细胞周期中的G1/G0期死亡，此时细胞内的 TK1浓度很低；而肿瘤细胞则在S/G2期死亡，此时细胞内TK1浓度较高，在血清中也会产生更多的TK1，所以肿瘤患者STK1明显高于健康人[8]。另一种推测是血清中可能存在另一个因素能够影响 TK1的稳定性，此因素在健康人和肿瘤患者中作用不同[9]。

值得注意的是，血清TK1水平升高并不完全意味着恶性肿瘤的潜在，TK1在健康人血清中同样会有一定程度的升高，如献血者和月经期女性，由于骨髓应激产生了新的血细胞也可导致TK1暂时性升高[10]。炎症和感染也可使TK1水平一定程度地升高，这是由于炎症激活了免疫系统，导致免疫功能细胞增殖强化，生长因子结合于细胞膜上特定的载体，启动一系列事件并最终引起细胞增殖[11-12]。因此检测血清TK1前应排除炎症、感染、近期出血、女性月经期以及乳腺增生、前列腺增生等增殖性疾病情况下细胞生理或病理性增殖所导致血清TK1升高的情况。

目前国内关于TK1与肝癌临床病理特征相关性的研究报告不多。本研究结果显示，与BCLC分期0～A期肝癌患者相比，B～C期肝癌患者TK1水平明显升高(P<0.05)，提示BCLC分期较晚的肝癌患者，血清TK1水平较高，血清TK1水平可能与肝癌患者临床分期有关。国内有研究表明，血清TK1水平与非小细胞肺癌临床分期相关[13]，与本研究结果类似。这可能是因为分期越晚的患者其体内肿瘤负荷较高，增殖细胞较多，随着肿瘤细胞不断增生、坏死，释放入血的TK1水平也随之升高，这提示TK1水平在一定程度上能反映肿瘤发展过程。BCLC分期是唯一综合考虑肿瘤情况、肝功能和患者体力的分期系统[14]，有利于判断病情、选择治疗方案和评估预后。对初治肝癌患者检测TK1，能反映肿瘤的分期信息，帮助临床医师掌握肿瘤的增殖程度，以及患者获得更好的治疗方法及评估肝癌患者的预后。另外，本研究结果显示不同性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数目、AFP水平、HBsAg水平以及有无癌栓、肝硬化及组织分化者的TK1浓度比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，提示血清TK1水平与性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤数目、AFP、HBsAg、癌栓、包膜、肝硬化及组织分化程度可能无关，说明TK1在一定程度上具有广泛适用的特点。

与既往王强等[15]、秦继宝等[16]报告的原发性肝癌患者血清TK1阳性表达率(分别为86.0%和82.1%)相比，本研究所得的阳性表达率(61.6%)较低，这可能与选择的样本标准、收集的临床数据、地域性或者种族性等多因素有关，具体原因有待进一步研究探讨。

AFP 是目前公认诊断原发性肝癌的首选血清肿瘤标志物，但单项肿瘤标志物检测的敏感性及特异性往往难以满足临床对肝癌诊断、鉴别诊断要求。TK1作为一种新的与肿瘤生长相关的血清学标志物，在肝癌患者血清中高表达，对肝癌的诊断和分期评估具有一定的临床应用价值，故在实际工作中可将血清TK1检测作为辅助诊断以提高肝癌的诊治水平。

[1] 郭丽香,刘树业.胸苷激酶1-新型的细胞增殖动力学标志[J].哈尔滨医药,2014,34(5):316-317.

[2] 孙启强,兰 斌.胸苷激酶1及其在胃癌中表达的研究进展[J].医学综述,2012,18(6):858-860.

[3] Chen ZH,Guan H,Yuan H,et al.Serum thymidine kinase 1 is a reliable maker for the assessment of the risk of developing malignancy:A case report[J].Oncol Lett,2015,10(3):1 669-1 673.

[4] Xu Y,Liu B,Shi QL,et al.Thymidine kinase 1 is a better prognostic marker than Ki-67 for pT1 adenocarcinoma of the lung[J].Int J Clin Exp Med,2014,7(8):2 120-2 128.

[5] 何燕霞,王 凯,巩姣梅,等.血清PG,CA72-4和TK1对胃癌筛查及诊断价值的研究[J].中国卫生检验杂志,2016,26(2):240-243.

[6] Jagarlamudi KK,Hansson LO,Eriksson S.Breast and prostate cancer patients differ significantly in their serum thymidine kinase 1(TK1) specific activities compared with those hematological malignancies and blood donors:implications of using serum TK1 as a biomarker[J].BMC Cancer,2015,15:66.

[7] 杨 森,陆浩源,白先忠,等.TK1和Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表达及其相关性[J].广西医学,2015,37(1):18-20.

[8] Munch-Petersen B.Enzymatic regulation of cytosolic thymidine kinase 1 and mitochondrial thymidine kinase 2:a mini review[J].Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids,2010,29(4/6):363-369.

[9] He Q,Zhang P,Zou L,et al.Concentration of thymidine kinase 1 in serum(S-TK1) is a more sensitive proliferation marker in human solid tumors than its activity[J].Oncol Rep,2005,14(4):1 013-1 019.

[10]Topolcan O,Holubec L Jr.The role of thymidine kinase in cancer diseases[J].Expert Opin Med Diagn,2008,2(2):129-141.

[11]Chen ZH,Zhou H,Li SL,et al.Serological thymidine kinase 1(STK1) indicates an elevated risk for the development of malignant tumours[J].Anticancer Res,2008,28(6B):3 897-3 907.

[12]Li ZS,Wang YH,Ma J,et al.Transient increase in serum thymidine kinase 1 within one week after surgery of patients with carcinoma[J].Anticancer Res,2010,30(4):1 295-1 299.

[13]唐 兴,何靖康,徐澄澄.非小细胞肺癌患者血清胸苷激酶1浓度与临床分期及病理类型的相关性[J].江苏医药,2014,40(21):2 555-2 557.

[14]中华人民共和国卫生部.原发性肝癌诊疗规范(2011年版)[J].临床肝胆病杂志,2011,27(11):1 141-1 159.

[15]王 强,谢跃文,夏 洁.血清TK1、AFP、CEA 联合检测在原发性肝癌诊断中的临床价值[J].国际检验医学杂志,2013,34(9):1 101-1 102.

[16]秦继宝,薄维波.血清AFP、TK1、DKK1联合检测对原发性肝癌的诊断价值[J].临床检验杂志,2014,32(7):545-547.

Preoperative expression level of serum thymidine kinase 1 in hepatocellular carcinoma patients and its clinical significance

TANGYan-ping,XIEYu-xuan,CAIZheng-min,SUCheng-lin,TANXiao-yu,ZHANGLi-tu,LIJi-lin

(DepartmentofLaboratoryResearch,AffiliatedCancerHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To investigate the preoperative expression level of serum thymidine kinase 1(TK1) in patients with hepatocellular carcinoma(HCC) and its clinical significance.Methods The serum levels of TK1 of 125 patients with HCC(HCC group),30 patients with liver benign lesions(liver benign lesion group) and 40 normal individuals(health control group) were detected by enhanced Western blot-chemiluminescence assay.The relationship of TK1 level with clinicopathological features was analyzed in HCC group.Results The serum level and positive expression rate of TK1 in the HCC group were significantly higher than those in the liver benign lesion group and health control group(P<0.05),but no significant different was found between liver benign lesion group and health control group(P>0.05).The serum level of TK1 in HCC patients with Barcelona Clinic Liver Cancer stage(B+C) was higher than that in the patients with stage(0+A)(P<0.05).Conclusion The detection of serum TK1 has a certain clinical reference value in the diagnosis of HCC.

Hepatocellular carcinoma,Serum thymidine kinase 1

广西科学研究与技术开发计划(桂科攻1298003-2-8)

唐艳萍(1986～)，女，硕士，助理研究员，研究方向：肿瘤分子生物学研究。

利基林(1965～)，男，硕士，副主任技师，研究方向：肿瘤分子诊断学研究，E-mail：455620024@qq.com。

R 735.7

A

0253-4304(2016)09-1219-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.09.08

2016-04-28

2016-06-26)