周海英 茹倩影 朱世伦

(上海交通大学医学院附属同仁医院老年科，上海市 200050，E-mail：zhouhning@126.com)

微小RNA-133a在缺血性心衰患者中的表达及其临床意义

周海英 茹倩影 朱世伦

(上海交通大学医学院附属同仁医院老年科，上海市 200050，E-mail：zhouhning@126.com)

目的 探讨微小RNA(miRNA)-133a在缺血性心衰(IHF)患者血浆中的表达水平及其临床意义。方法 选择IHF患者60例为IHF组，20例健康自愿者为对照组。两组均行超声心动图检测舒张压、收缩压、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左房内径(LAD)、左心室射血分数(LVEF)等指标，并检测外周血miRNA-133a、末端B型脑钠肽原(NT-proBNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。比较两组上述指标差异，并分析IHF患者血浆miRNA-133a水平与其他指标的相关性。结果 IHF组患者血浆miRNA-133a水平及LVEF、LAD均明显低于对照组(P<0.05)，舒张压、收缩压和LVEDV、NT-proBNP、hs-CRP水平均高于对照组(P<0.05)；IHF患者的miRNA-133a与舒张压、收缩压、LVEDV、hs-CRP和NT-proBNP呈负相关，与LVEF和LAD呈正相关(P<0.05)。结论 IHF患者血浆miRNA-133a表达上调，miRNA-133a可能参与IHF患者的心室重构，miRNA-133a有望作为IHF诊断及风险评估的新的生物标志物。

缺血性心衰；微小RNA-133a；心室重构

心血管疾病是人类死亡的主要原因之一，近年来虽然急性心肌梗死导致的死亡率已经明显降低，但有研究发现缺血性心衰(ischemic heart failure，IHF)导致的死亡率逐年递增[1-2]。微小RNA(micro RMA，miRNA)是一大类内源性的、单股非编码的小分子RNA，大小约22个核苷酸，通过与靶mRNA的3′端非翻译区(3′UTR)完全或不完全互补结合来抑制或降解靶向mRNA，从而达到转录后调节的作用。在人类基因组上，超过3%的基因被用来编码miRNA，且人类基因组上有超过30%的基因受miRNA调节[3-5]。miRNA-133最初于心肌和骨骼肌中被发现，具有促进心肌细胞增殖、控制心肌电传导、抑制心肌肥大、调控心脏自动节律性等功能，故其表达与心肌肥大、心率失常及心衰等心血管疾病的发生发展密切相关[6-7]。在乳腺癌中，miR-133过表达对血管生成有抑制作用[8]。在IHF中，细胞存活是否受miR-133的调控需要进一步阐明，本研究旨在探讨miRNA-133在IHF患者血浆中的表达水平及在病理生理机制中的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年3月至2015年3月在我院心内科住院治疗的IHF患者60例作为IHF组，正常健康者20例作为对照组。IHF的诊断标准：有劳力性呼吸困难、咳嗽、端坐呼吸、夜间阵发性呼吸困难，心脏扩大、肺底可闻及湿啰音，颈静脉充盈，肝脏肿大，体位性水肿，心脏彩色多普勒超声射血分数<50%。两组均排除3个月内发生心肌梗死者，以及存在风湿性心脏病、扩张型心肌病、肥厚性心肌病、严重肝肾功能不全、高血压者，入院后检测发现血压异常升高者。IHF组行经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention，PCI)共18例(30%)。两组在性别、年龄、吸烟史、是否合并有糖尿病等方面，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 两组临床资料比较

1.2 主要实验材料和仪器 RNA提取试剂盒TRI Reagent BD和超敏C-反应蛋白(high-sensitivvity C-reactive protein，hs-CRP)酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(BD Biosciences公司)，RT反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒(日本Takara公司)；7500 Fast Real-time PCR仪(美国ABI公司)；罗氏C8000全自动生化分析仪(包括罗氏电化学发光试剂盒和比色试剂盒)。

1.3 超声心动图检查 使用Philips iE33彩色多普勒超声诊断仪对IHF组和对照组进行超声心动图检查，IHF组患者均为治疗前进行超声心动图检查。

记录左心室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume，LVEDV)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)、左房内径(left atrial diameter，LAD)、收缩压及舒张压等指标。

1.4 检测指标

1.4.1 样本收集：两组患者空腹8 h以上后，采取肘静脉血2 ml。IHF组患者均为治疗前进行指标的检测。

1.4.2 荧光Rt-PCR测定血浆miRNA-133a的表达：取全血样本，4℃下3 000 g离心10 min，取血浆于1.5 ml EP管中12 000 g离心10 min，取上清，用TRI Reagent BD试剂盒提取总RNA，再采用RT反转录试剂盒反转录成cDNA，操作均严格按试剂盒说明书进行。用荧光定量Real-Time PCR法检测血浆miRNA-133a的表达量，相对表达量用2-△△Ct法进行计算。

1.4.3 ELISA检测N末端脑钠肽原(N-terminal pro B-type natriuretic peptide，NT-proBNP)及hs-CRP： 取全血样本，4℃下3 000 g离心10 min，取血浆于1.5 ml EP管中12 000 g离心10 min，取上清用于检测，分别采用罗氏电化学发光试剂盒及hs-CRP ELISA试剂盒分别检测患者血浆NT-proBNP和hs-CRP水平检测，操作均严格按试剂盒说明书进行。

1.5 统计学分析 采用 SPSS 19.0软件进行统计学分析，计量资料以(x±s)表示，组间比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Pearson或Spearman分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者miRNA-133a水平比较 IHF组患者血浆miRNA-133a的相对表达量为1.33±1.42，明显低于对照组的3.88±2.12(t=2.934，P=0.016)。

2.2 两组超声心动图检测结果比较 IHF组舒张压、收缩压和LVEDV均高于对照组；LVEF和LAD低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组超声心动图检查结果比较(x±s)

注：1 mm Hg=0.133 kPa。

2.4 两组患者NT-proBNP和hs-CRP的比较 与对照组相比，IHF组患者血浆NT-proBNP和hs-CRP水平明显升高(P<0.05)，见表3。

2.5 IHF患者miRNA-133a表达水平与其他指标之间的相关性分析 IHF患者血浆中miRNA-133a水平与性别、年龄、吸烟史、是否患有糖尿病无关(P>0.05)；miR-133a的表达与是否行PCI、舒张压、收缩压、LVEDV、hs-CRP和NT-proBNP呈负相关，与LVEF和LAD水平呈正相关(P<0.05)。见表4。

表4 IHF患者miRNA-133a水平与各指标的相关性分析

注：*为采用Pearson分析。

3 讨 论

心力衰竭又称“心肌衰竭”，往往由各种疾病引起心肌收缩能力减弱，心脏不能搏出同静脉回流及身体组织代谢所需相称的血液供应，从而使心脏的血液输出量减少，不足以满足机体的需要，并由此产生一系列症状和体征。其中心肌凋亡和缺血是造成心衰的两个重要原因[9-10]。近年来miRNA在心血管疾病诊疗中的作用逐渐受到人们的重视。在异丙肾上腺素诱导的心肌肥大患者中，miRNA-133a表达明显减少，而miRNA-133a表达上调会有效抑制心肌肥大的发生[11]。miRNA-133a表达对心肌肥大、心肌重塑和心肌纤维化有明显的抑制作用[12]。

本研究结果显示，IHF组患者血浆miRNA-133a表达水平明显低于对照组(P<0.05)，提示IHF患者血浆中miR-133a表达水平下调；此外，IHF组舒张压、收缩压和LVEDV均高于对照组，而LVEF和LAD低于对照组，且NT-proBNP和hs-CRP表达较对照组明显升高(P<0.05)，提示IHF患者LVEF降低，NT-proBNP和hs-CRP表达升高。NT-proBNP和hs-CRP是人体内非常重要的内分泌激素和细胞因子，生理条件下可通过补体系统识别并清除病理物质，但过高的NT-proBNP和hs-CRP可通过影响内皮细胞的功能从而增加心血管疾病的发生。有研究表明，心衰患者NT-proBNP和hs-CRP明显升高，疾病的严重程度与NT-proBNP和hs-CRP呈正相关，并且依据NT-proBNP和hs-CRP对心衰患者心室重构进行初步评估[13]。研究表明LVEF越低，心室收缩压越高，心室收缩功能受损越严重，心室重构越明显[14]。相关性分析结果显示，IHF患者的miRNA-133a与舒张压、收缩压、LVEDV、hs-CRP和NT-proBNP呈负相关，与LVEF和LAD呈正相关(P<0.05)，因此，miR-133a可能参与心室重构[14]。结合国内外研究，我们推测miRNA-133a可能与IHF患者冠状动脉损伤及参与心肌缺血有关。

综上所述，IHF患者血浆miRNA-133a表达水平下调，miRNA-133a可能作为IHF诊断及进行风险评估的新的标记物。同时miRNA-133a可能参与心室重构，有望为临床上治疗心衰等心血管疾病提供新的治疗靶点和治疗思路。由于本研究样本量有限，仍需进一步研究以明确miRNA-133a是否参与了患者的心室重构。

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Expression and clinical significance of microRNA-133a in patients with ischemic heart failure

ZHOUHai-ying,RUQian-ying,ZHUShi-lun

(DepartmentofGeriatric,AffiliatedTongrenHospitalofShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200050,China)

Objective To explore the expression level and clinical significance of plasma microRNA(miRNA)-133a in patients with ischemic heart failure(IHF).Methods A total of 60 patients with IHF were enrolled as IHF group and 20 health volunteers as control group.The diastolic blood pressure,systolic blood pressure,left ventricular end-diastolic volume(LVEDV),left atrial diameter(LAD) and left ventricular ejection fraction(LVEF) were measured in both groups by echocardiogram.And the peripheral blood levels of miRNA-133a,N-terminal pro B-type natriuretic peptide(NT-proBNP) and high-sensitivity C-reactive protein(hs-CRP) were detected in both groups.The indices above were compared between two groups.And the correlation of miRNA-133a level with other indices was analyzed in the patients with IFH.Results The plasma miRNA-133a level,LVEF and LAD were significantly lower but diastolic blood pressure,systolic blood pressure,LVEDV,the levels of NT-proBNP and hs-CRP were higher in the IFH group compared to those in the control group(P<0.05).miRNA-133a negatively correlated with diastolic blood pressure,systolic blood pressure,LVEDV,hs-CRP and NT-proBNP,and positively correlated with LVEF and LAD among the patients with IHF(P<0.05).Conclusion The patients with IHF highly express miRNA-133a.miRNA-133a may participate in the left ventricular remodeling in the patients with IHF,and it is expected as a new biomarkers for the diagnosis and risk assessment of IHF. 【Key words】 Ischemic heart failure,MicroRNA-133a,Ventricular remodeling

周海英(1977～)，女，本科，主治医师，研究方向：老年心脑血管方向。

朱世伦(1965～)，女，本科，副主任医师，研究方向：老年医学，E-mail：liuqsysucc@163.com。

R 54

A

0253-4304(2016)02-0214-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.02.19

2015-10-13

2016-01-10)