严一杰，　黎承杨△，　邓耀良，　曾国华，　陶芝伟，　刘云龙，　孙　春，　王　扬

(1广西医科大学第一附属医院泌尿外科，广西 南宁 530021； 2广州医科大学第一附属医院泌尿外科，广东 广州 510120)



体外诱导人肾间质成纤维细胞成骨分化*

严一杰1，黎承杨1△，邓耀良1，曾国华2，陶芝伟1，刘云龙1，孙春1，王扬1

(1广西医科大学第一附属医院泌尿外科，广西 南宁 530021；2广州医科大学第一附属医院泌尿外科，广东 广州 510120)

[摘要]目的： 观察在体外培养条件下，使用成骨诱导培养液或不同浓度钙离子诱导人肾间质成纤维细胞发生成骨分化的效果，初步探讨肾脏Randall斑形成可能的细胞机制。方法: 体外培养人肾间质成纤维细胞，实验分为5组：成骨诱导组(加成骨诱导液)、CaⅠ组(加0.5 mmol/L Ca2+液)、CaⅡ组(加1.5 mmol/L Ca2+液)、Ca Ⅲ 组(加2.5 mmol/L Ca2+液)和对照组(加PBS)。各组细胞分别培养至第1、3、6、9天时，采用MTT法检测细胞活力；诱导至第9天时，用细胞钙茜素红染色液和钙钴法磷酸酶染色液对各组细胞进行染色，观察钙结节形成和碱性磷酸酶的表达情况。另外，分别采用real-time PCR和Western blot检测各组细胞不同时间点Runt相关转录因子2(Runx2)的 mRNA和蛋白表达水平。 结果: 在1.5 mmol/L 和2.5 mmol/L Ca2+浓度条件下细胞的活力明显受抑制。细胞染色结果证实成骨诱导液组和钙离子组均可以见到典型的红色钙结节和黑色块状的硫化钴沉淀物。成骨诱导组细胞Runx2的mRNA和蛋白相对表达量(0～9 d)逐渐升高(P<0.05)；诱导至第9天时，3个钙离子组细胞Runx2的mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性升高(P<0.05)。结论: 在体外培养环境下，人肾成纤维细胞可以在成骨诱导培养液的刺激作用下发生成骨分化；另外，在高钙离子环境，人肾成纤维细胞也发生了类似的成骨分化。肾乳头组织中的成纤维细胞在高钙离子等因素的作用下发生成骨分化，这可能是肾脏Randall斑形成的细胞学基础。

[关键词]人肾成纤维细胞； 成骨分化； 肾乳头钙化斑； 高钙尿症； 肾结石

肾结石的起源问题是当前结石研究的重要问题。根据临床病例观察和肾脏标本病理分析的研究结果，肾乳头钙化斑块Randall斑的形成被认为是结石形成最可能的起点，在诱导结石晶体异质成核并最终形成结石的过程中起重要的作用[1-3]。……