化学发光微粒法检测抗TP抗体复检流程探讨

梅毒螺旋体(treponema pallidum,TP)属于密螺旋体属苍白螺旋体的苍白亚种，是引起人类梅毒的病原体，主要经性接触和输血传播，人是梅毒的唯一传染源。我国TP感染率较高，国内学者报道，我国西安地区159 902名自愿献血者的检测结果显示，TP阳性率从2006年的0.24%上升到2010年的0.51%[1]。TP在感染人体时具有自然的潜在周期[2]，其诊断依据主要是血清学试验。血清学检测方法包括快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagin circle card test，RPR)、TP颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA)、化学发光微粒法(chemiluminescence microparticle immunoassay，CMIA)等，其中CMIA检测抗TP抗体采用原始管上机，敏感性高，特异性好，适合大批量样本检测，目前被国内大多数实验室所使用。但在实际工作中，对于CMIA检测的信号/临界值(signal-to-cut off， S/CO)比值≥1.0的样本都要求进行复检和确证试验，造成人力和和试剂的极大浪费。鉴于此，我们统计2012年1月至2014年5月抗TP抗体复检结果，以阳性预测值≥95%为目标，确定初筛试验的复检范围和抗TP抗体临床检测操作流程，以期能为临床合理选择检验项目、正确诊断和治疗提供可靠的依据，同时可减少须进行确证试验的样本量。

材料和方法

一、样本来源

2012年1月至2014年5月三峡大学仁和医院住院及门诊患者21 894例，年龄11~78岁，其中男10 804例，女11 090例。CMIA初检S/CO比值≥1.0者630例，其中男352例，女278例。

二、 方法

1.样本采集用促凝管采集患者空腹静脉血5 mL，室温静置30 min，1 400×g离心10 min后原管上机，在2 h内完成检测，若非当日检测，样本可在室温储存24 h或在2～8 ℃储存7 d。

2.检测方法、仪器和试剂 (1) 抗TP抗体筛查试验：采用CMIA进行筛查，检测结果S/CO比值≥1.0为抗TP抗体阳性反应，<1.0为阴性反应，i2000SR全自动CMIA分析仪及其配套试剂(美国Abbott公司产品)。(2)抗TP抗体确证试验：采用免疫印迹法(western blotting，WB)进行CMIA初检和复检呈阳性反应样本的结果验证，欧蒙医学实验诊断股份公司(德国)生产的抗TP抗体检测试剂盒，按试剂说明书操作。

结果

一、初检S/CO比值≥1.0的样本CMIA复检和WB复核结果

初检S/CO比值≥1.0的630例样本与CMIA复检结果的总符合率为93.0%(586/630)，与WB结果的总符合率为75.9%(478/630)。CMIA复检阳性样本与WB结果的总符合率为81.6%(478/586)，凡WB确认阳性的样本CMIA复检结果均呈阳性反应。见表1。

表1　初筛呈阳性反应的样本CMIA复检和WB确证试验结果(符合率)　[例(%)]

二、初检S/CO比值≥1.0的样本在各初检S/CO比值区间内CMIA复检和WB复核结果

初检S/CO比值在1.0~6.0范围的样本与CMIA复检结果的符合率为80.1%(177/221)，CMIA初检和复检与WB结果的符合率分别为45.2(100/221)和56.5%(100/177)。初检S/CO比值在6.1~8.0范围的样本与CMIA复检结果的符合率为100.0%(94/94)，CMIA初检和复检与WB结果的符合率均为81.9%(77/94)。初检S/CO比值1.0~8.0范围的样本与CMIA复检结果的符合率为86.0%(271/315)，CMIA初检和复检与WB结果的符合率分别为56.2%(177/315)和65.3%(177/271)。初检S/CO比值≥6.1的样本与CMIA复检结果的符合率为100.0%(409/409)，CMIA初检和复检与WB结果的符合率均为92.4%(378/409)。初检S/CO比值≥8.1的样本与CMIA复检结果的符合率为100.0%(315/315)，CMIA初检和复检与WB结果的符合率均为95.6 %(301/315)。初检S/CO比值≥9.1的样本与CMIA复检结果的符合率均为100.0%(230/230)，CMIA初检和复检与WB结果的符合率均为98.3 %(226/230)。见表1。

讨论

CMIA检测抗TP抗体已在国内广泛应用，但评价不一。袁明生[3]对CMIA检测抗TP抗体的试验进行了评价，指出该方法与荧光抗TP抗体吸收试验(fluorescent treponemal antibody absorption,FIA-ABS)检出率相当，可以用于抗TP抗体的筛查，而谭延国等[4]在CMIA与酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和TP血球凝集试验(treponema pallidum hemagglutination assay, TPHA)检测抗TP抗体符合情况中发现，CMIA敏感性较高(接近100%)，重复性好，但特异性较低。虽然国内大多数实验室遇到抗TP抗体阳性样本时一般都采用TPPA来确认，但TPPA检测也存在一定的假阳性率[5]，或CMIA与TPPA联合检测后出现一些抗TP抗体阳性不确定的结果[6]，出现上述情况可能的原因是由于TPPA与CMIA检测原理不同，TPPA是用密螺旋体本身作为抗原检测血清的抗TP抗体，而CMIA采用的是TP15、TP17和TP47这3种经典的诊断抗原来检测，当血清中抗体类型不全时，二者结果就会出现差异，因此用TPPA作为抗TP抗体的确证试验存在不足。本研究采用WB做为抗TP抗体确证试验，WB是目前较为公认的TP特异性抗体确证方法[7]，对梅毒的阳性诊断率达100%，其在试验操作过程中简便，阴阳性结果界线分明，易于判定[8]，但不适合大批量的样本检测。

在实际工作中，若对于初检所有的有反应性的样本都进行复检并经WB确认，势必会增加成倍的工作量和试剂的浪费。国外学者报道，抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)/人类获得性免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)抗体检测的S/CO比值与是否需要进一步确证具有相关关系，可用S/CO比值的高低来决定是否需要做确证试验[9]。另一项研究也提示，S/CO比值>均值能够用来预测补充确证试验的阳性结果[10]。因此，我们借鉴抗HCV抗体和抗HIV抗体筛查试验程序，探讨CMIA检测抗TP抗体的复检流程。

CMIA检测抗TP抗体分析结果显示， S/CO比值>8.1以上的样本315例，与CMIA复检的符合率为100.0%，与WB的符合率为95.6%。因此，以阳性预测值≥95%为目标，对于S/CO比值≥8.1的样本无需CMIA复检，可直接发出报告，结果报告应附有未进行旁证试验的注释。对于S/CO比值≥8.1结果的解释，提示机体既往感染或现在感染TP，未作血清学补充试验。S/CO比值≥8.1的样本可报告阳性(阳性预测值>95%)，但尚有<5%的可能为假阳性，如有需要，可要求进行特异性更好的补充试验。对于S/CO比值在1.0~8.0范围的样本，先经CMIA复检，仍呈阳性反应者用WB确认。因其中有假阳性，如果不加以鉴别，发出报告，可能会产生医疗纠纷和造成临床科室对实验室结果的不信任。若以阳性预测值≥98%为目标，则应将无需复检的S/CO比值定为≥9.1，并在检测报告中作出假阳性率的相应提示。另有文献报道，老年人和某些疾病产生的某些干扰物质会影响CMIA的准确性，CMIA测得的呈阳性反应的结果并非都是真阳性，必须通过复检和/或确证试验加以鉴别[11]。本研究结果显示，我们设计并提出复检流程，根据初检S/CO比值的范围选择复检试验，见图1，对于有条件的实验室可以选择WB证实，未开展WB的实验室，也可以选择TPPA来初步确认，但对于CMIA与TPPA不相符的结果，可在报告单备注中说明阳性结果只提示所测样本中有抗类脂抗体或抗TP抗体存在，不能作为患者感染TP的绝对依据，检测结果应结合临床综合分析。

综上所述，我们根据S/CO比值的范围设计的复检流程是建立在阳性预测值不低于95%的基础上，故仍有一定的误诊率，尚需大样本来充实资料并验证，进一步探索和总结，优化复检流程，以期为临床提供更准确的报告。

图1　建议CMIA检测抗TP抗体阳性样本的复检流程

参考文献

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(本文编辑：姜敏)

杨华，杨晓东，饶丽华

(三峡大学仁和医院检验科，湖北 宜昌 443001)

摘要：目的探讨化学发光微粒法(CMIA)检测抗梅毒螺旋体(TP)抗体的复检范围并进行流程改进分析。方法21 894份血清样本用CMIA筛查抗TP抗体，呈阳性反应的样本用CMIA相同厂家、相同批号的试剂复检，以免疫印迹法(WB)为确证试验。以信号/临界值(S/CO)比值进行分段统计。结果21 894份血清样本中CMIA初检阳性630例，按照CMIA初检抗TP抗体S/CO比值将样本分为7组：1.0~2.0、2.1~4.0、4.1~6.0、6.1~8.0、8.1~9.0、9.1~10.0、>10.1。各组CMIA复检结果符合率分别为62.5%(40/64)、80.0%(60/75)、93.9%(77/82)、100.0%(94/94)、100.0%(85/85)、100.0%(50/50)和100.0%(180/180)。各组CMIA复检结果与WB符合率分别为 35.0%(14/40)、46.7%(28/60)、75.3%(58/77)、81.9%(77/94)、88.2%(75/85)、96.0%(48/50)和98.8%(178/180)。结论在规范操作的前提下，以阳性预测值≥95%为目标，CMIA筛查抗TP抗体的复检范围S/CO比值设定为1.0~8.0，若S/CO比值≥8.1，可直接发出报告；1.0≤S/CO比值≤8.0，须采用WB确证，这样既能保证检验结果的准确性，又可减少须进行确证试验的样本量。

关键词：抗梅毒螺旋体抗体；复检；范围；化学发光微粒法；免疫印迹法

Investigation on the retesting procedure of anti-TP antibody determined by chemiluminescence microparticle immunoassayYANGHua，YANGXiaodong，RAOLihua. (DepartmentofClinicalLaboratory，RenheHospitalofChinaThreeGorgesUniversity，HubeiYichang443001，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the retesting range of ani-treponema pallidum (TP) antibody determined by chemiluminescence microparticle immunoassay (CMIA) and improve the retesting procedure. MethodsA total of 21 894 serum samples were screened by CMIA, the positive samples were retested duplicately by the same reagent kit of the same lot number and confirmed by western blotting (WB). The detection results were classifed into several groups for further analysis according to signal-to-cut off (S/CO) ratios. ResultsIn 21 894 serum samples, 630 cases were positive by CMIA. The samples were classified into 7 groups according to S/CO ratios：1.0-2.0, 2.1-4.0, 4.1-6.0, 6.1-8.0, 8.1-9.0, 9.1-10.0 and>10.1. The retesting coincidence rates by CMIA were 62.5%(40/64), 80.0%(60/75), 93.9%(77/82), 100.0%(94/94), 100.0%(85/85), 100.0%(50/50)and 100.0%(180/180).The coincidence rates for retesting by WB and CMIA were 35.0%(14/40)， 46.7%(28/60)，75.3%(58/77)， 81.9%(77/94)， 88.2%(75/85)， 96.0%(48/50) and 98.8%(178/180). ConclusionsThe S/CO ratio for retesting range by CMIA for the determination of anti-TP antibody is considered appropriate from 1.0-8.0 under a standardized laboratory condition and positive predictive value≥95% . Reports can be sent directly with S/CO ratio≥8.1. WB should be employed to confirmation assay with 1.0≤S/CO ratio ≤8.0. The appropriate retesting range not only can assure the accuracy of testing results, but also can reduce the sample numbers of confirmation assay.

Key words:Ani-treponema pallidum antibody; Retesting; Range; Chemiluminescence microparticle immunoassay; Western blotting

收稿日期：(2014-09-16)

作者简介：杨华，男，1983年生，学士，主管技师，主要从事临床生化检验工作。

中图分类号：

文章编号：1673-8640(2015)12-1181-04R446.61

文献标志码：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.12.004