施建国蒋宇丹 季晓燕( 上海禾丰制药有限公司 上海 201206)

HPLC法测定马来酸氯苯那敏注射液的有关物质

施建国*蒋宇丹 季晓燕
( 上海禾丰制药有限公司 上海 201206)

摘 要目的：建立HPLC法测定马来酸氯苯那敏注射液有关物质的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱(4.6 mm × 250 mm，5 µm)；流动相为乙腈-0.857%磷酸二氢铵溶液（20∶80）（用磷酸调节pH值至3.0）；流速：1.2 ml/min；检测波长：225 nm。结果：氯苯那敏峰与杂质A、B、C、D峰之间的分离度良好，氯苯那敏及四个杂质的最小检测限分别为0.017、0.016、0.077、0.030、0.053 µg/ml。结论：该法简便、准确、专属性好、灵敏度高，可作为马来酸氯苯那敏注射液有关物质的检查方法。

关键词HPLC法 马来酸氯苯那敏注射液 有关物质

Determination of related substances in chlorphenamine maleate injection by HPLC

SHI Jianguo*, JIANG Yudan, JI Xiaoyan
(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201206, China)

ABSTRACTObjective: To establish an HPLC method for the determination of related substances in chlorphenamine maleate injection. Methods: The HPLC was carried out on a C18column (4.6 mm×250 mm, 5 µm) with a mobile phase of acetonitrile - 0.857% of ammonium dihydrogen phosphate solution (20:80) (adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid) at the flow rate of 1.2 ml/min and the detected UV wavelength of 225 nm. Results: Good separation among the peaks of chlorphenamine and impurity A, B, C, D was obtained. The detection limits of chlorphenamine and 4 impurities were 0.017, 0.016, 0.077, 0.030 and 0.053 µg/ml, respectively. Conclusion: This method is simple, accurate with good specificity and high sensitivity and can be used for the analysis of related substances in chlorphenamine maleate injection.

KEY WORDSHPLC; chlorphenamine maleate injection; related substances

马来酸氯苯那敏为抗组胺药，临床上主要用于过敏性鼻炎、皮肤黏膜的过敏及药疹和接触性皮炎等[1-2]。马来酸氯苯那敏注射液为中国药典2010年版二部收载品种[3]，有关物质采用HPLC法，但仅对未知杂质进行控制。杂质A、C为马来酸氯苯那敏合成过程中产生的杂质，杂质B、D为合成过程中的中间体，这四种杂质均可能影响到马来酸氯苯那敏的质量。本法参考英国药典2013马来酸氯苯那敏原料有关物质检测方法[4]，建立了马来酸氯苯那敏注射液中有关物质检测的改进方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200和 Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilen公司，均配置VWD紫外检测器）； CPA225 D电子天平（德国Sartorius公司）；磷酸二氢铵(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；杂质A（批号1370-073A3）、B（批号1376-040A1）、D（批号1370-071A4）均购自TLC Pharmachem；C（批号Y0000437）购自European Pharmacopoeia；乙腈（色谱纯，Fisher Scientific公司）；马来酸氯苯那敏注射液（规格：1 ml∶10 mg，批号Y120301本公司产品）；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.857%磷酸二氢铵溶液（20∶80，用磷酸调节pH值至3.0）为流动相，流速1.2 ml/min，检测波长为225 nm，进样量20 µl。

2.2 专属性试验

取马来酸氯苯那敏注射液1 ml，共5份，分别以下列条件试验：①酸破坏 用稀盐酸溶液调pH值2左右，100 ℃水浴蒸干，用流动相稀释至10 ml；②碱破坏 用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调pH值12左右，100 ℃水浴蒸干，用流动相稀释至10 ml；③热破坏 于100 ℃水浴中加热10 h，用流动相稀释至10 ml；④氧化破坏 加30%的过氧化氢溶液2 ml，100 ℃水浴蒸干，用流动相稀释至10 ml；⑤光破坏 置紫外光（4 500 lx）下直接照射24 h后，用流动相稀释至10 ml。破坏后的样品按色谱条件进行分析，结果见图1。

图1 马来酸氯苯那敏注射液破坏试验色谱图

结果表明，经光、热破坏，马来酸氯苯那敏注射液无明显降解产物。经酸、碱及氧化破坏试验，马来酸氯苯那敏注射液明显产生降解产物，但峰分离度均良好。

2.3 杂质A、B、C、D相对保留时间的确定

取马来酸氯苯那敏注射液1 ml，置100 ml量瓶中，分别精密加入杂质A 5 mg、杂质B 50 mg、杂质C 10 mg、和杂质D 50 mg，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，配制成含马来酸氯苯那敏10 µg/ml及杂质A、B、C、D分别为5 、50 、10 、50 µg/ml的混合溶液。HPLC检测结果见图2。

图2 各杂质与马来酸氯苯那敏混合溶液

结果表明，杂质A、B、C、D的相对保留时间分别为0.2、0.25、0.8、3；校正因子分别为1.7、0.8、0.97、2.1。各杂质峰与氯苯那敏峰的分离度均符合要求。

2.4 有关物质测定

取马来酸氯苯那敏注射液适量，加流动相稀释制成每1 ml约含1 mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1 ml，置200 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。按色谱条件进样，记录色谱图至氯苯那敏峰保留时间的3.5倍。杂质A、B、D的校正响应分别为1.7、0.8、2.1。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，杂质A、B、C、D峰的相对保留时间分别为0.2、0.25、0.8、3。除溶剂峰与马来酸峰外，杂质A不得超过0.2%，杂质B、C、D均不得超过0.1%，其他单杂峰不得超过0.2%，各杂质峰面积的和不得超过1.0%。

2.5 检出限

取杂质A、B、C、D及马来酸氯苯那敏注射液，分

别不断稀释进样，按信噪比S/N=3计算，杂质A、B、C、D及马来酸氯苯那敏的最小检测限分别为：0.016，0.077，0.030，0.053，0.017 µg/ml。

2.6 精密度试验

取杂质A、B、C、D分别配制成含5，50，10，50 µg/ml的溶液，共配制6份，分别按色谱条件进样，按峰面积计，RSD分别为0.18%，0.14%，0.27%，0.23%。

2.7 耐用性试验

用Agela、Agilent、Kromasil等不同厂家的色谱柱（均为4.6 mm×250 mm，5 µm），分别在Agilent 1200高效液相色谱仪和Agilent 1260高效液相色谱仪上进行试验，结果表明不同色谱柱，不同高效液相色谱仪对杂质的保留和检出无显著性差异（表1）。

表1 耐用性试验结果

3 讨论

国内无杂质A、B、C、D对照品提供，只有进口，价格昂贵，故考虑用相对保留时间对杂质A、B、C、D进行定位，结果显示，该方法可行。此外，将同一样品分别采用该法及中国药典2010年版二部方法测定结果杂质检出分别为0.04%，0.02%，均为未知杂质。但是中国药典方法检出马来酸峰和氯苯那敏峰出峰时间较为接近，有文献[5-8]对色谱条件进行优化，以改进此现象。本法检出马来酸峰和氯苯那敏峰出峰时间距离较长，不易混淆。表明本法更适合马来酸氯苯那敏注射液的有关物质测定。

根据中国药典药品杂质分析指导原则[3]附录204-206，相对响应因子在0.9～1.1范围内，可以用主成分的自身对照法计算含量，超出范围时可采用相对响应因子校正后计算，根据实验结果本法采用相对响应因子计算不在范围内的杂质A、B、D的含量。

马来酸在特定条件下会转换成富马酸[9-11]，在本法的酸、碱和氧化破坏试验中，马来酸附近有新的杂质峰出现，有可能是马来酸部分转换成富马酸，需经试验进一步确实。

随着国家对药品杂质要求的提高，药品检查有关物质只控制未知杂质，已远远不够，对已知杂质的控制是未来的发展趋势。我们在英国药典原料标准的基础上，对马来酸氯苯那敏注射液有关物质检查进行改进，能更好地控制产品质量。

参考文献

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[2] 孙琛. 临床用药大全[M]. 上海: 中国大百科全书出版社, 1995: 431.

[3] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典: 2010年版（二部）[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 49-50.

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收稿日期：(2014-07-24)

作者简介：*施建国(1982-)，男，助理工程师，从事药物研发。E-mail：jian44072@126.com

文章编号：1006-1533(2015)01-0075-03

文献标识码：A

中图分类号：R927.1; O657.72