黄丽琼，张元珍( 1咸宁市中心医院同济咸宁医院，湖北咸宁437000;武汉大学中南医院)

晚发型子痫前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盘COMT蛋白表达及意义

黄丽琼1，2，张元珍2
( 1咸宁市中心医院同济咸宁医院，湖北咸宁437000;2武汉大学中南医院)

摘要:目的探讨2-甲氧雌二醇( 2-ME)、儿茶酚胺氧位甲基转移酶( COMT)蛋白在晚发型子痫前期( PE)发病中的作用。方法选取孕周＞34周的晚发型PE患者25例(观察组)，同期正常单胎妊娠孕妇35例(对照组)。采用全自动酶标仪检测血清及尿液2-ME水平，Western blotting法检测胎盘组织COMT蛋白相对表达量。结果观察组血清、尿液2-ME分别为( 595.3±21.8)、( 407.8±16.3) pg/mL，对照组分别为( 407.8±23.9)、( 298.4±18.1) pg/mL;两组比较，P均＜0.05。观察组胎盘COMT蛋白相对表达量为1.48±0.66，对照组为1.39±0.58;两组比较，P＞0.05。结论晚发型PE患者血清、尿液2-ME水平升高，胎盘COMT蛋白表达无明显变化; 2-ME可能是其发病过程中的一种代偿性保护因子，而COMT蛋白可能与晚发型PE的发生关系不大。

关键词:晚发型子痫前期;儿茶酚胺氧位甲基转移酶; 2-甲氧雌二醇

子痫前期( PE)是一种以血压升高及蛋白尿为临床特征的疾病，早期妊娠时滋养细胞的浅植入导致胎盘功能不良是早发型PE的发病机制之一，而关于晚发型PE的发病机制尚不明确［1，2］。儿茶酚胺氧位甲基转移酶( COMT)是一种甲基化酶，17β雌二醇经细胞色素P450酶羟基化后，经COMT甲基化，继而形成2-甲氧雌二醇( 2-ME)。近期研究表明，早发型重度PE患者血清2-ME水平及胎盘COMT蛋白表达明显低于正常妊娠孕妇［3］，但是其在晚发型PE发生中作用的研究相对较少。为此，我们进行了如下研究。

1　资料与方法

1.1临床资料选择2013年1月～2014年1月咸宁市中心医院同济咸宁医院收治的孕周＞34周的晚发型PE［4］患者25例(观察组)，同期正常单胎妊娠孕妇35例作为对照组，两组均为单胎孕晚期、剖宫产分娩，排除合并慢性高血压、肝肾疾病、心脏病、糖尿病及甲状腺功能亢进或减退者。观察组年龄( 30.3±3.2)岁，孕周( 35.3±1.6)周，孕前BMI ( 23.0±2.8) kg/m2，收缩压( 172.8±13.5) mmHg、舒张压( 110.3±8.2) mmHg;对照组年龄( 30.4± 4.3)岁，孕周( 38.2±1.2)周，孕前BMI( 21.9± 2.8) kg/m2，收缩压( 115.8±12.4) mmHg、舒张压( 75.3±7.8) mmHg。两组基本资料除血压外均具有可比性。

1.2血清及尿液2-ME水平检测两组均于剖宫产术前30 min用EDTA抗凝管采集外周肘静脉血3 mL，1 000 r/min离心15 min，取上层血浆置于－80℃冰箱保存待测。无菌容器留取新鲜尿液5 mL，1 500 r/min离心20 min，取上清液置－80℃冰箱保存待测。采用全自动酶标仪检测血清及尿液2-ME，标本均同批测定，批内变异＜5%。

1.3胎盘COMT蛋白表达检测采用Western blotting法。两组胎盘娩出5 min内，避开钙化、坏死及出血区，于胎盘中央母体面取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的组织，立即置于液氮冷冻，－80℃低温冰箱保存待测。取适量组织样品采用RIPA裂解液充分匀浆，12 000 r/min离心5 min后取上清，提取组织总蛋白。BCA法测定蛋白浓度，SDS PAGE电泳后将目的蛋白和内参蛋白( GAPDH)转移到PVDF膜上( 4℃，100 V，120 min)，洗膜后5%脱脂奶粉封闭1 h。加入一抗4℃孵育过夜充分洗膜，加入二抗37℃孵育1 h。再次洗膜后加ECL化学发光液，暗室曝光显影。目的蛋白相对表达量以目的蛋白与GAPDH的条带灰度值的比值表示。

1.4统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计量资料以珋x±s表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

两组血清及尿液2-ME水平、胎盘COMT蛋白表达比较见表1。

表1　两组血清及尿液2-ME水平、胎盘COMT蛋白表达比较(珔x±s)

3　讨论

目前多数国内外学者认为，胎盘血管形成不良导致胎盘缺氧是PE发病的关键因素。2-ME是17β雌二醇的代谢产物之一，主要由胎盘COMT甲基化产生，大量研究证实其具有抗增殖、促进凋亡及抗血管生长等作用［5，6］。新近研究显示，2-ME在缺氧情况下可通过促进绒毛滋养细胞浸润生长和血管生成来改善胎盘血液循环，并影响胚胎生长［3，7］。可溶性血管内皮生长因子受体1( sFlt-1)是参与PE发病的重要因子，可导致促血管生成因子下降、内皮细胞损伤以及滋养层侵袭不足等。缺氧诱导因子1a ( HIF-1a)在缺氧状态下上调sFlt-1表达，而2-ME可以通过抑制HIF-1a的活化来改善胎盘缺氧状态［8］。

研究发现，重度PE患者胎盘组织中COMT表达降低［9］。有研究将孕鼠的COMT基因敲除后发现，孕鼠血清2-ME水平降低、HIF-1a升高，产生类似PE的表现;而补充2-ME后，HIF-1a水平降低，PE样症状减轻，表明COMT/2-ME缺陷在PE的发病中起重要作用［3］。本研究中，观察组血清、尿液2-ME水平均显著高于对照组，而两组胎盘COMT蛋白相对表达量比较则无统计学差异。表明晚发型PE患者血清中2-ME水平升高不是由于肾脏排泄减少而引起的，推测2-ME是晚发型PE发病过程中的一种代偿保护因子，而COMT蛋白可能与晚发型PE的发生关系不大。

COMT/2-ME如何参与PE的发病目前尚不明确。研究发现，2-ME可能通过抑制HIF-1a和sFlt1以外的机制保护血管并维持其正常功能［10］，其内皮血管舒张作用可能对高血压、肺动脉高压、肾病、缺血性脑损伤的防治均有积极意义［11］。研究发现，胎盘COMT表达降低与妊娠期高血压疾病的发生有关联。Lee等［12］研究发现，COMT缺乏可能是PE发生的启动因素。Hertig等［13］研究发现，PE孕妇孕早期时伴有血清2-ME水平下降，孕32～34周时与正常妊娠孕妇比较无明显差异，而晚发型PE患者血清2-ME水平高于正常妊娠孕妇。Palmer等［14］和Seol等［15］研究发现，重度PE患者胎盘COMT表达与正常足月妊娠孕妇比较无统计学差异。以上研究结果与本研究存在差异，可能与研究人群的种族、孕龄及检测方法不同有关。

参考文献:

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收稿日期:( 2015-01-07)

文章编号:1002-266X( 2015) 32-0070-02

文献标志码:B

中图分类号:R714.244

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.029