中药组方对狼疮性肾炎患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的影响

夏嘉1，江丽红2，苏晓1*，姚重华1，夏菁1，张晓峰1，杨旭鸣1，陈薇薇1，唐华燕1，徐俊1

(1.上海中医药大学附属市中医医院风湿病科，上海 200071；2.上海市嘉定区中医医院内科，上海 201800)

摘要：目的观察自拟养阴清热、活血利水中药组、环磷酰胺组、中药组方联合环磷酰胺对狼疮性肾炎患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1表达的影响。方法收集狼疮性肾炎病例共95例，随机分为中医组、西医组和中西医结合组，西医组31例，中医组31例，中西医结合组33例。中医组服中药组方每日1剂，分2次口服；西医组静滴环磷酰胺1.0 g/月；中西医结合组在中药组方的基础上静滴环磷酰胺0.6 g/月。分别观察3组治疗前和治疗6月后外周血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的表达。结果治疗前后中医组、西医组IFN-γ、IL-4、TGF-β1的组内比较(P<0.05)，中西医组IFN-γ、IL-4、TGF-β1的组内比较(P<0.01)。治疗后IL-4 3个组的组间比较结果示中西医组在降低IL-4的水平方面分别优于中医组和西医组(P<0.05)。结论养阴清热、活血利水中药组方可能是通过改善狼疮性肾炎患者血清中干扰素-γ、IL-4及TGF-β1的表达,从而发挥治疗效果。

关键词：狼疮性肾炎；中药组方；细胞因子

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.04.016

中图分类号：R593.24文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)04-0367-03

基金项目:上海市教育委员会科研项目(07cz045)。

作者简介:夏嘉(1981-)，女，硕士，主治医师，主要从事中医、中西医结合治疗风湿免疫病研究。

收稿日期:(责任编辑：王丹2014-09-15)

*通信作者:苏晓，电话-13817608102，电子信箱-tcmfengshi@163.com

Effect of herbal formula for serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in lupus nephritis

XIA Jia2,JIANG Lihong2,SU Xiao1*,YAO Chonghua1,XIA Qing1,ZHANG Xiaofeng1,

YANG Xuming1,CHEN Weiwei1,TANG Huayan1,XU Jun1

(1.Affiliated Chinese Medicine Hospital to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200071,China;

2.Jiang Lihong for Traditional Chinese Medicine Hospital Medical Shanghai Jiading District,Shanghai 201800,China)

Abstract:ObjectiveTo observe serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in lupus nephritis patients treated with decoction of nourishing yin and clearing away heat,activating blood and promoting diuresis,cyclophosphamide or cyclophosp hamide plus the above decoction in accordance with syndrome differentiation.MethodsWe collected 95 lupus nephritis cases from rheumatology department and outpatient of shanghai municipal TCM hospital affliated to shanghai TCM University.They were divided into chinese medicine group (31 cases),western medicine group (31 cases) and integrative medicine group (33 cases) by random assignment.Chinese medicine group:traditionnal chinese medicine decoction taken twice a day;Western medicine group:intravenous cyclophosphamide 1.0 g/month;Integrative medicine group:chinese medicine decoction plus intravenous cyclophosphamide 0.6 g/month.All the patients were treated 6 months respectively.Serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 before and after treatment in the three groups was observed.ResultsBoth Chinese and western medicine groups improved IFN-γ,IL-4,TGF-β1 after treatment(P<0.05).Integrated medicine group improved IFN-γ,IL-4,TGF-β1 after treatment more(P<0.01).The analysis of three groups after treatment showed the integrated medicine group decreased IL-4 better than the other two (P<0.05).ConclusionHerbal formula with the function of nourishing yin and clearing away heat,activating blood and promoting diuresis may improve the expression of serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in LN patients to exert therapeutic effect.

Keywords:lupus nephritis;herbal formula;cytokine

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种多系统损害的、病程反复的自身免疫性疾病，可严重危害患者健康，影响生活质量。狼疮性肾炎(Lupus nephritis,LN)是其主要的预后不良因素，为我国常见的继发性肾脏病之一。LN的病因及发病机制尚不清楚，多种细胞因子参与其中[1]。本研究拟检测中药组、西药组及中西医结合组治疗前后的LN患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平，探讨LN的免疫机制，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料全部观察病例均来自上海市中医医院风湿科门诊及病房的病人，共95例。西医组31例，中医组31例，中西医结合组33例,3组性别、年龄、病程经检验无统计学意义(P>0.05)。

1.2诊断标准1)纳入标准：①18～65岁患者；②符合《美国风湿病协会1997年系统性红斑狼疮分类标准》四项或以上，并具备尿常规蛋白尿++以上或24 h尿蛋白1 g以上的患者;③经SLEDAI评分：记分统计≥5分；④中医辨证为阴虚内热、水瘀互结之证(参照2002年《中药新药临床研究指导原则》中的相关标准)；⑤自愿作为受试对象,签署知情同意书。2)排除标准：①不符合上述入选标准；②年龄在18岁以下或65岁以上者；③有严重的心脑血管疾病或并发症或肿瘤、艾滋病、精神病患者；④出现狼疮性脑病、肾功能不全衰竭期或尿毒症期等严重内脏损害的SLE患者。

1.3治疗方法3组激素的基线用量：根据SLEDAI积分，中重度患者为1 mg/(kg·d)，轻度活动≤0.5 mg/(kg·d)。1)西医组：环磷酰胺1.0 g/月，静滴。2)中医组：生地黄、丹参、接骨木、猫爪草、积雪草，每日1剂，分2次口服。3)中西医结合组：中药组方+环磷酰胺0.6 g/月，静滴。

1.4标本的检测

1.4.1标本收集用真空采血管收集患者清晨空腹静脉血5 mL，待血液凝固后，800转离心3 min，分离血清约1 mL,置于-40 ℃低温冰箱中保存待用。

1.4.2细胞因子测定采用流式荧光免疫微球术(flow fluorenscence immunmicrobeads assay,FFIA)检测人外周血清 IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平，所用试剂盒购自奥地利的Bender Medsystems公司。操作步骤如下：1)抗原吸附及检测：样本、标准品(根据说明书配置、用于做标准基线)、空白品各12.5 μL，分别加入包被了IFN-γ、IL-4、TGF-β1的微球共12.5 μL和生物素化抗体25 μL，每管共计50 μL，混匀，温室避光孵育2 h。2)加入Assay Buffer 1 mL洗涤2次，进行200 g 5 min离心(第一次加Assay Buffer 1 mL,移去上清液975 μL；第2次加Assay Buffer 1 mL，移去上清液1 mL)。3)标记荧光。每管分别加入25 μL Streptavidin-PE工作液(88 μL PE液+2 662 μL Assay Buffer)，混匀，温室避光孵育1 h。4)加入Assay Buffer 1 mL洗涤2次，200 g 5 min离心，每次移去上清液1 mL。5)每管加Assay Buffer 500 μL，用流式细胞仪检测细胞因子的荧光值(set微球用于调微球位置和基准电压)。

2结果

3组治疗前的IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平分别经方差分析P>0.05，组间差异无统计学意义,具有可比性。IFN-γ、TGF-β1治疗后组内比较，中医组和西医组治疗前后经t检验P<0.05,提示中医组和西医组能改善IFN-γ、TGF-β1；中西医组治疗前后IFN-γ、TGF-β1比较，t检验P<0.01，差异有显著性，提示中西医组改善IFN-γ、TGF-β1的水平较明显。但3组治疗后组间比较经方差分析P>0.05，差异无统计学意义。IL-4治疗前后的组内比较，中医组和西医组治疗前后组内经t检验P<0.05,提示中医组和西医组均能降低IL-4；中西医组治疗前后组内比较，t检验P<0.01,差异有显著性，提示中西医组能明显降低IL-4的水平。3组治疗后组间比较经方差分析P<0.05,差异有统计学意义；LSD-t检验两两比较结果显示中西医组分别和中医组、西医组比较P<0.05，差异有统计学意义，提示中西医组在降低IL-4的水平方面分别优于中医组和西医组(见表1)。

表1　3组外周血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1(pg/mL)的比较

注：与治疗前比较，△P<0.05，△△P<0.01；与中医组治疗后比较，*P<0.05；与西医组治疗后比较，#P<0.05

3讨论

流式荧光免疫微球分析术是建立在免疫荧光、免疫微球和流式细胞分析等实验技术基础上的一种血清学检测方法。人们将不同单克隆抗体偶联在微球表面用于自身抗原、肿瘤标志物以及病原微生物的检测[2]，也可以将抗原结合在微球表面用于血清梅毒螺旋体抗体[3]和红细胞血型抗体[4]以及血小板特异性抗体[5]的检测。有报道表明[6-7]其测定的重复性、线性范围和灵敏度均优于酶联免疫吸附试验，而且所需的样本量少、特异性高。LN是SLE死亡的常见病因,中晚期的病理改变主要是弥漫性细胞增生和纤维化[8]。有资料显示[9-10]，Th1细胞因子尤其是IFN-γ参与了LN的产生及病理过程。IL-4则属于Th2细胞因子之一，它在BXSB狼疮小鼠体内过度表达而加重病情[11]。因此，IFN-γ、IL-4等细胞因子不同程度的升高促进了炎症的发生及组织损伤从而导致了LN的发病[12]。近年来的研究[13-14]发现TGF-β1与LN也密切相关。TGF-β1可直接或间接地促使Ⅰ型、Ⅳ型胶原等细胞外基质的合成与积聚，诱导炎症细胞的浸润、成纤维细胞的积聚和血管生成[15]。本研究提示养阴清热、活血利水中药组方可能是通过改善LN患者血清中上述因子的表达，从而发挥治疗效果。

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