刘 静，刘 梅，杨 波，马 静，鲁 毅，邱 彦

（解放军454医院药剂科，江苏 南京 210002）

地黄提取物对高尿酸血症小鼠的影响

刘 静，刘 梅，杨 波，马 静，鲁 毅，邱 彦

（解放军454医院药剂科，江苏 南京 210002）

目的：观察地黄提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响，初步探讨其可能的作用机理。方法：采用氧嗪酸钾腹腔注射诱导高尿酸血症小鼠模型，将成模小鼠随机分为模型组、地黄提取物低（2 g·kg-1）、中（4 g·kg-1）、高（8 g·kg-1）剂量组和别嘌醇（20 mg·kg-1）组。对小鼠血清尿酸、肌酐、一氧化氮，肝脏黄嘌呤氧化酶（XOD）和腺苷脱氨酶（ADA）等指标进行观察分析，并对小鼠肾脏进行病理检查。结果：给药干预14 d后，与模型组比较，地黄提取物中、高剂量组均可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸、肌酐含量（P ＜ 0.01），显著升高一氧化氮水平（P ＜ 0.05，P ＜ 0.01），并可显著抑制高尿酸血症小鼠肝脏XOD活性（P ＜ 0.01）。地黄提取物高剂量组对高尿酸血症小鼠肝脏ADA活性有显著的抑制作用（P ＜ 0.05）。病理检查结果显示，地黄提取物三个剂量组的肾脏组织病变程度要明显轻于模型组。结论：地黄提取物对高尿酸血症小鼠具有降低血清尿酸水平作用，其机制与抑制肝脏XOD和ADA活性有关。

地黄提取物；高尿酸血症；尿酸；黄嘌呤氧化酶；腺苷脱氨酶；小鼠

高尿酸血症又称为痛风，是一种嘌呤代谢异常及紊乱所致的疾病，其临床特点为高尿酸血症及由此引起的痛风性关节炎反复发作、痛风石沉积，痛风石性慢性关节炎及关节畸形，常累及肾脏而引起慢性间质性肾炎和形成尿酸结石。高尿酸血症已成为一种常见疾病，与肥胖症、高脂血症、高血压、糖尿病、动脉硬化、冠心病、尿路感染、肾功能衰竭等发病密切相关[1]，严重危害人类健康，并且近年来其发病率在全球大部分地区及我国均逐年上升[2]。因此，对高尿酸及痛风的防治研究日益重要。

地黄含梓醇、小檗碱、药根碱、木兰花碱、地黄碱等有效成分，其作为中药使用已有上千年历史，主要功效为降血糖、止血、强心、利尿、抗炎免疫和保肝等。本实验采用氧嗪酸钾盐诱导急性高尿酸血症小鼠模型，观察地黄提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸、肌酐、一氧化氮水平以及肝脏黄嘌呤氧化酶（XOD）与腺苷脱氨酶（ADA）活性的影响，以期为其治疗高尿酸血症和痛风药开发提供实验依据。

1 材料

1.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，60只，18 ～ 20 g，SPF级，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，实验动物许可证号：SCXK（沪）2013-0016。在室温22 ～ 26 ℃、湿度40% ～ 70%的动物房内饲养，光照时间随自然变化，自由饮食饮水。动物适应性饲养1周后进行实验。

1.2 药品及试剂

地黄提取物（梓醇含量≥94.8%，常州千杏生物科技有限公司）；别嘌醇片（上海信谊万象药业股份有限公司，规格：0.1 g，批号130301）；氧嗪酸钾（上海源叶生物科技有限公司，批号SF0328GD13）。考马斯亮蓝蛋白测试盒（批号20141115）、黄嘌呤氧化酶测定试剂盒（批号20141026）、腺苷脱氨酶测定试剂盒（批号20140717）、尿酸测定试剂盒（批号20140606）、肌酐（批号20140717）、一氧化氮（批号20140717）均为南京建成生物工程研究所产品。

1.3 实验仪器

BTS-370plus型全自动生化分析仪（西班牙BioSystems公司）；TDL-80-2B低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；梅特勒AL140电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；Thermo Multiskan MK3全自动酶标仪（美国Thermo Scientific公司）；DY89-Ⅰ电动玻璃匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；Leica RM2135滑动切片机（德国Leica公司）；Olympus DM750光学显微镜（日本Olympus公司）。

2 方法

2.1 分组及给药

轲左手把秦王袖，右手揕其胸，数之曰：“足下负燕日久，贪暴海内，不知厌足。于期无罪而夷其族。轲将海内报仇。今燕王母病，与轲促期。从吾计则生，不从则死。”秦王曰：“今日之事，从子计耳!乞听琴声而死。”召姬人鼓琴，琴声曰：“罗縠单衣，可掣而绝。八尺屏风，可超而越。鹿卢之剑，可负而拔。”轲不解音。秦王从琴声负剑拔之，于是奋袖超屏风而走。轲拔匕首擿之，决秦王，刃入铜柱，火出。秦王还断轲两手。轲因倚柱而笑，箕踞而骂曰：“吾坐轻易，为竖子所欺。燕国之不报，我事之不立哉！”

将60只小鼠随机分为6组，每组10只。分别为空白对照组、模型（高尿酸血症）组、阳性药别嘌醇（20 mg·kg-1）组、地黄提取物低剂量（2 g·kg-1）组、中剂量（4 g·kg-1）组和高剂量（8 g·kg-1）组，给药体积为0.2 mL·10 g-1小鼠体重。空白对照和模型组灌胃给予等体积的0.9%氯化钠注射液，连续灌胃给药14 d，每天1次，末次于造模1 h后给药。

2.2 高尿酸血症小鼠模型的建立[3-4]

选用氧嗪酸钾盐为化学诱导剂，抑制尿酸酶活性，抑制小鼠体内尿酸分解，增高血清尿酸水平，造成高尿酸血症小鼠模型。于末次给药前1 h，小鼠腹腔注射300 mg·kg-1氧嗪酸钾盐，空白对照组腹腔注射相应体积0.9%氯化钠注射液。

2.3 指标检测

2.3.1血清尿酸、肌酐和一氧化氮水平检测 末次给药1 h后，小鼠摘眼球后取血，全血3000 r·min-1，离心10 min，取血清置于4 ℃冰箱中，待测尿酸、肌酐、一氧化氮含量。参照试剂盒方法操作进行尿酸、肌酐、一氧化氮含量的检测。

2.3.2肝脏XOD及ADA活性测定 放血处死小鼠后，快速取肝脏组织块，立即投入液氮中速冻，取出后置于– 80 ℃冰箱中保存，待测肝脏XOD及ADA活性。肝脏组织块称重后，按重量体积比加入9倍量预冷的0.9%氯化钠注射液制成10%组织匀浆液，2500 r·min-1离心10 min，取上清按照试剂盒方法测定组织匀浆液蛋白含量、XOD和ADA活性。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 地黄提取物对高尿酸血症小鼠的尿酸、肌酐和一氧化氮水平的影响

与空白对照组比较，模型组高尿酸血症小鼠的尿酸、肌酐含量显著升高，一氧化氮水平显著降低，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05），说明高尿酸血症小鼠模型造模成功。与模型组相比，地黄提取物中、高剂量组和别嘌醇组均可不同程度抑制氧嗪酸钾盐引起的高尿酸血症小鼠的尿酸和肌酐水平的升高（P ＜ 0.01），同时升高高尿酸血症小鼠一氧化氮的水平（P ＜ 0.05）。详见表1。

表1 地黄提取物对高尿酸血症小鼠的尿酸、肌酐和一氧化氮水平的影响.Tab 1 Effect of Radix Rehmanniae extract on the level of serum uric acid, creatinine, nitric oxide in hyperuricemia mice. n =

表1 地黄提取物对高尿酸血症小鼠的尿酸、肌酐和一氧化氮水平的影响.Tab 1 Effect of Radix Rehmanniae extract on the level of serum uric acid, creatinine, nitric oxide in hyperuricemia mice. n =

注：与空白对照组比较，#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01；与模型组比较，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01Note: compared with blank control group,#P ＜ 0.05,##P ＜ 0.01; compared with model group,*P ＜ 0.05,**P ＜ 0.01

3.2 地黄提取物对高尿酸血症小鼠的肝脏XOD及ADA活性的影响

由表2可知，与空白对照组比较，模型组高尿酸血症小鼠肝脏XOD及ADA活性都显著性升高（P ＜0.01），说明高尿酸血症小鼠造模成功。与模型组相比，地黄提取物中剂量组显著降低高尿酸血症小鼠肝脏XOD活性（P ＜ 0.01）。与模型组比较，地黄提取物高剂量组均可显著降低高尿酸血症小鼠肝脏XOD及ADA的活性，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。

表2 地黄提取物对高尿酸血症小鼠的肝脏XOD及ADA活性的影响.Tab 2 Effect of Radix Rehmanniae extract on hepatic XOD and ADA activities in hyperuricemia mice.

表2 地黄提取物对高尿酸血症小鼠的肝脏XOD及ADA活性的影响.Tab 2 Effect of Radix Rehmanniae extract on hepatic XOD and ADA activities in hyperuricemia mice.

注：与空白对照组比较，##P ＜ 0.01；与模型组比较，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01 Note: compared with blank control group,##P ＜ 0.01; compared with model group,*P ＜ 0.05,**P ＜ 0.01

3.3 地黄提取物对高尿酸血症小鼠肾脏组织形态学的影响

病理结果显示，空白对照组：肾脏结构正常，肾小管无混浊肿胀，肾小球大小正常。模型组：肾小管紊乱，肾小球出血严重，小球周围有大量炎性细胞浸润。别嘌醇组：肾小管排列较为整齐，出血较少。地黄提取物低剂量组：肾小管排列趋于均匀化，炎性细胞少。地黄提取物中剂量组：肾小球排列较为均匀，炎性细胞较少，肾小管无明显出血。地黄提取物高剂量组：肾小管排列整齐，出血较少，炎性细胞浸润很少，肾小球结构相对完整。病理结果显示，地黄提取物三个剂量组的病变程度明显轻于模型组。详见图1。

图1 地黄提取物对高尿酸血症小鼠肾脏组织形态学的影响A – 空白对照组，B – 模型组，C – 别嘌醇组，D – 低剂量组，E –中剂量组，F – 高剂量组Fig 1 Effect of Radix Rehmanniae extract on the histomorphology of kidney in hyperuricemia miceA – blank control group, B – model group, C – allopurinol group, D –low dose group, E – middle dose group, F – high dose group

4 讨论

本研究采用尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾盐为化学诱导剂，抑制小鼠体内尿酸分解造成小鼠高尿酸血症模型，方法简便、灵敏度高、重复性好，该方法建模已经普遍用于抗高尿酸血症和痛风作用的药物评价[6]及其机制研究。

高尿酸血症导致机体尿酸水平升高，易引起肾功能损伤[7]，使得肌酐排泄障碍，从而引起机体肌酐水平的升高。研究报道[8-9]高尿酸血症可升高血清ET-1水平和降低NO水平，造成血管内皮功能障碍。XOD活性直接调控体内尿酸水平的高低，XOD和ADA活性的升高会促进核酸的分解代谢，导致尿酸生成量增加[10]。本实验结果显示，地黄提取物可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸和肌酐水平，具有明显的抗高尿酸血症效果，提示其对肾功能有保护作用。地黄提取物对高尿酸血症小鼠血清中NO含量有显著升高，说明其对血管内皮有一定的保护作用。地黄提取物能有效降低高尿酸血症小鼠肝脏的XOD和ADA活性，表明地黄提取物通过抑制XOD和ADA活性来减少尿酸的生成，降低血尿酸水平，从而达到改善高尿酸血症的效果。

地黄为补肾阴之主药，具有滋阴补肾的功效，临床应用作为补气养阴药治疗气阴两虚型肾炎和早期肾衰竭，对降低蛋白尿和改善肾功能均有疗效[11]。本实验结果显示，地黄提取物可明显改善高尿酸血症小鼠肾组织的病理变化，对高尿酸血症所致肾脏损伤有一定的保护作用。

地黄具有重要的临床应用价值，其药理作用广泛，对免疫、血液、内分泌、心脑血管及神经系统等方面均有一定的作用。梓醇是地黄的主要有效活性成分，其为小分子化合物，水溶性好，口服易吸收[12]。现代研究表明，梓醇具有抗炎[13]、止痛、神经保护[14]、抗肿瘤、降血糖[15]等作用。我国应用地黄的历史悠久，并积累了丰富的用药经验，其药用不良反应及毒副作用甚小，可长期服用，较安全可靠。实验研究表明，地黄提取物具有抗高尿酸血症作用，其药材资源丰富。因此，对地黄提取物在抗高尿酸血症和痛风方面的药用深入开发，有着极为广阔的应用前景。

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Effect of Radix Rehmanniae extract on hyperuricemia mice

LIU Jing, LIU Mei, YANG Bo, MA Jing, LU Yi, QIU Yan
(Department of Pharmacy, the No. 454 Hospital of PLA, Nanjing 210002, China)

Objective:To observe the effect of Radix Rehmanniae extract on the level of serum uric acid in hyperuricemia mice and investigate the mechanism preliminarily.Methods:The intraperitoneal injection of uricase inhibition potassium oxonate was used to induce the hyperuricemia in mice. The mice were randomly divided into model group, Radix Rehmanniae extracts treatment groups (with the doses of 2, 4 and 8 g·kg-1) and the allopurinol positive control group (20 mg·kg-1). The serum levels of uric acid, creatinine, nitric oxide, and the levels of xanthine oxidase (XOD) and adenosine deaminase (ADA) in liver were observed, and the pathological changes in kidney of mice were detected.Results:After 14 days of drug intervention, compared with the model group, the Radix Rehmanniae extract middle and high dose groups reduced the levels of serum uric acid and creatinine (P ＜ 0.01), increased serum levels of nitric oxide (P ＜ 0.05, P ＜ 0.01), and significantly inhibited the liver XOD (P ＜ 0.01). It showed that Radix Rehmanniae extract high dose group significantly inhibited the ADA in hyperuricemia mice (P ＜ 0.05). The results of pathological examination showed that the pathological changes in kidney of all extracts groups were lower than that of the model group.Conclusion:The Radix Rehmanniae extract can reduce the level of serum uric acid in the model of hyperuricemia mice, and the effect is related to the inhibition of the activity of liver XOD and ADA.

Radix Rehmanniae extract; Hyperuricemia; Uric acid; Xanthine oxidase; Adenosine deaminase; Mice

R96

A

1672 – 8157(2015)06 – 0347 – 04

2015-04-12

2015-07-11）

南京军区医学科研基金资助项目（09Z014）

邱彦，男，博士，副主任药师，主要从事临床药学工作。E-mail：qiuyan2189@163.com

刘静，女，主管药师，主要从事医院药学工作。E-mail：455379546@qq.com