高效液相色谱法测定盐酸氟西汀的含量

2015-12-28吴荷琴,陈朝霞

药学实践杂志 2015年1期

·论著·

高效液相色谱法测定盐酸氟西汀的含量

吴荷琴，陈朝霞(常州四药制药有限公司，江苏常州 213004)

[摘要]目的建立测定盐酸氟西汀含量的高效液相色谱法。方法选用Agilent Eclipse XDB-C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：四氢呋喃-甲醇-三乙胺缓冲液(取三乙胺10 ml，置1 000 ml量筒中，加水980 ml，用磷酸调节pH值至6.0)(30:10:60)；流速为1.0 ml/min;检测波长：227 nm;进样量：10 μl；柱温：25 ℃。结果方法的线性范围为55.17～165.51 μg/ml(r=0.999 9)；最低检测限：0.15 μg/ml;回收率在99.9%～100.0%之间，重复性RSD为0.1%(n=6)。结论方法简便灵敏，结果准确可靠，可用于盐酸氟西汀的质量控制。

[关键词]盐酸氟西汀；含量测定；高效液相色谱法

[作者简介]吴荷琴，大专，工程师.研究方向：药品质量控制.Tel:13915832101；E-mail:784431028@qq.com

[中图分类号]R917[文献标志码]A

DOI[]10.3969/j.issn.1006-0111.2015.01.015

[收稿日期]2013-05-22[修回日期]2014-04-07

Determination of fluoxetine hydrochloride by HPLC

WU Heqin，CHEN Zhaoxia(Changzhou Siyao Pharmaceutical Limited Company，Changzhou 213004，China)

Abstract[]ObjectiveTo establish an HPLC method for assay determination of fluoxetine hydrochloride.MethodsAgilent Eclipse XDB-C8 (4.6 mm × 250 mm，5 μm) was used，mobile phase was tetrahydrofuran-methanol-triethylamine buffer (to 10 ml of triethylamine in a 1 000 ml flask，added 980 ml of water，pH was adjust to 6.0 by phosphoric acid) (30:10:60),flow rate was 1.0 ml/min,detection wavelength was 227 nm,injection volume was 10 μl,column temperature was 25 ℃.ResultsLinearity range was 55.17-165.51 μg/ml (r=0.999 9),minimum detection limit was 0.15 μg/ml,accuracy was between 99.9%-100.0%,repeatability RSD was 0.1% (n=6).ConclusionThe method was accurate and reliable，which could be applied for quality control of fluoxetine hydrochloride.

[Key words]fluoxetine hydrochloride；assay；HPLC

盐酸氟西汀(fluoxentine hydrochloride)是一种选择性的5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)，能有效地抑制神经元从突触间隙中摄取5-羟色胺，增加间隙中可供实际利用的这种神经递质，从而改善情感状态，治疗抑郁性精神障碍[1]。盐酸氟西汀含量测定有化学滴定法(指示剂)和高效液相色谱法[2-4]。化学滴定法指示剂的灵敏度较低。英国药典2011版[5]、欧洲药典7.0[6]、美国药典35版[7]中采用高效液相色谱法测定盐酸氟西汀含量。笔者综合不同国家药典特点，进行了条件优化，确定了本文方法，以三乙胺磷酸缓冲液、四氢呋喃和甲醇为流动相直接测定盐酸氟西汀含量，并按照中国药典的要求进行了方法学验证[8]。本法线性范围宽，灵敏度高，方法简便、准确，适用于盐酸氟西汀的质量控制，为将来收载于中国药典打下基础。

1仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国)；AG135电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；TOLEDO 320 pH 计 (瑞士梅特勒-托利多公司)。盐酸氟西汀(常州四药制药有限公司，批号：X07011、X07021、X07031)；盐酸氟西汀对照品(批号：G0F085)由美国药典委员会提供，购自上海东方科技实业有限公司，四氢呋喃、甲醇和三乙胺色谱纯均购自Merck公司，水为超纯水。

2溶液的制备

2.1　对照品溶液

取盐酸氟西汀对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成浓度分别为550 μg/ml和110 μg/ml的溶液，分别作为对照品贮备液和对照品溶液。

2.2　供试品溶液

取盐酸氟西汀11 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

3色谱条件和系统适用性

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：四氢呋喃-甲醇-三乙胺缓冲液(取三乙胺10 ml，置1 000 ml量筒中，加水980 ml，用磷酸调节pH值至6.0)(30:10:60)；流速：1.0 ml/min；检测波长：227 nm；进样量：10 μl；柱温：25 ℃。

4方法学验证

4.1　专属性试验

取浓度为110 μg/ml的盐酸氟西汀对照品溶液分别进行酸、碱、高温、光照、氧化破坏试验，结果表明，在上述色谱条件下，盐酸氟西汀与破坏后产生的降解产物均能较好分离，结果如图1所示。

图1　盐酸氟西汀专属性试验色谱图 A.酸降解;B.碱降解;C.高温降解;D.光照降解;E.氧化降解

4.2　线性范围

精密量取对照品储备液适量，用流动相稀释得到浓度分别为55.17、82.27、110.34、132.41、165.51 μg/ml的溶液，按上述色谱条件进样测定盐酸氟西汀峰面积。以盐酸氟西汀峰面积(Y)为纵坐标，以溶液浓度(X)为横坐标，进行线性回归，得到回归方程为Y=21.371 3X-38.253 2 (r=0.999 9)。结果表明，在盐酸氟西汀浓度为55.17～165.51 μg/ml(n=5)的范围内，线性关系良好。

4.3　定量限和检测限

取盐酸氟西汀对照品溶液，用流动相逐级稀释，按上述色谱条件进样，记录色谱图，以信噪比10:1时的浓度作为定量限，结果表明本法的定量限为0.5 μg/ml；以信噪比3:1时的浓度作为盐酸氟西汀检测限，其检测限为0.15 μg/ml。

4.4　精密度试验

4.4.1重复性取同批样品6份，精密称定，用流动相溶解并稀释制成110 μg/ml的盐酸氟西汀溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，计算测得含量的精密度，盐酸氟西汀含量平均值为99.9%，RSD为0.1%(n=6)，结果表明重复性良好。

4.4.2中间精密度由第2个分析员在不同日期、不同高效液相色谱仪上按照“4.4.1”项进行重复性试验。2名分析员所得12个含量结果的RSD为0.2%，结果表明本方法中间精密度良好。

4.5　稳定性试验

取“2.2”项下的供试品溶液，分别于配制后0、1、8、24 h测定盐酸氟西汀峰面积，RSD为0.3%，表明供试品溶液在室温条件下24 h内稳定。

4.6　回收率试验

取本品9份，均精密称定，分别用流动相溶解并稀释制成每毫升中含盐酸氟西汀约88、110、132 μg的溶液，每个浓度重复配制3次，按上述色谱条件进样，记录色谱图，计算回收率。结果低、中、高3种浓度的平均回收率分别为99.9%、100.0%和99.9%。

4.7　耐用性试验

保持色谱条件不变，更换色谱柱，分别用Zorbax Eclipse XDB-C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Phenomenex C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)和Lichrosphere C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)按“4.4.1”项方法测定本品含量，结果分别为99.7%、100.2%和99.9%，表明方法耐用性良好。

5含量测定

取3个不同批号样品，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，盐酸氟西汀含量测定结果见表1。另取3批样品约0.3 g，均精密称定，分别用冰乙酸溶解，用0.1 mol/L高氯酸滴定液滴定，计算含量，结果与HPLC法基本一致(见表1)。