王瑞平

陕西中医学院(陕西 咸阳 712046)



EGFR在乳腺癌组织中的表达与临床病理特征相关性

王瑞平

陕西中医学院(陕西 咸阳 712046)

【摘要】目的探讨乳腺癌组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)的分布特点及其与乳腺癌的发病年龄、组织学分级、腋窝淋巴结有无转移、雌孕激素受体及人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)的关系，为乳腺癌的临床诊断、治疗及预后提供重要依据。方法利用免疫组化法检测144例乳腺癌组织中EGFR的表达情况。结果①144例乳腺癌组织中EGFR(+)表达百分率为38.2%。②EGFR的表达与患者年龄大小、淋巴结转移与否和组织学分级I与Ⅱ、Ⅱ与Ⅲ之间比较差异无统计学意义(P>0.05)；但在组织学分级I与Ⅲ,淋巴结转移<4枚与淋巴结≥4枚的患者间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。③EGFR的表达与ER、PR之间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。HER2(-)与HER2(+)、HER2(++)与HER2(+++)，差异无统计学意义(P>0．05)，但HER2(-)与HER2(++)、HER2(-)与HER2(+++)、HER2(+)与HER2(+++)之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论①EGFR的表达与ER、PR表达状况无明显相关。但EGFR在HER2强阳性乳腺癌患者中的表达明显高于HER2弱阳性患者，可能与乳腺癌侵袭、转移和预后存在关联性。②EGFR的表达在淋巴结转移<4枚与淋巴结≥4的患者间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，随着淋巴结转移数量的增加，其阳性表达率明显增高。

【关键词】乳腺肿瘤;表皮生长因子；免疫组织化学；临床病理

随着分子生物学的迅速发展，人们对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)在乳腺癌的发生、发展机制，特别是与乳腺癌细胞生长、增殖、侵袭、转移相关的信号传导机制有了更深入的了解，针对EGFR与乳腺癌发生、发展有关的癌基因及其相关表达产物进行治疗， 抗EGFR分子靶向药物越来越受重视[1]，但是EGFR的作用机制尚不十分明确，有待于进一步研究[2]，EGFR与临床病理的关系很多文献报道不一[3-4]。本研究采用免疫组化检测癌组织中EGFR的表达情况，并分析其与临床病理特征之间的关系，探讨其临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料收集陕西中医学院第一附属医院肿瘤外科2010年1月至2013年12月144例乳腺癌组织标本，均为女性，年龄28～70岁，中位年龄49岁。所有患者术前未经放、化疗，所有标本均经病理检查确诊。诊断、分级及分期标准参照WHO乳腺肿瘤病理学与遗传学。

1.2试剂与方法

1.2.1实验试剂EGFR检测使用鼠抗人单克隆抗体(抗体稀释浓度1∶100) 购买于北京中杉金桥生物技术有限公司，兔抗人ER单克隆抗体(抗体稀释浓度1∶150)、兔抗人PR单克隆抗体(抗体稀释浓度1∶125)、兔抗人C-erbB-2单克隆抗体(抗体稀释浓度1∶175)，均购买于上海西宝生物科技有限公司。按试剂说明书步骤进行免疫组化染色。

1.2.2免疫组化检测S-P法检测:①烤片，68℃，20min；②常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；③阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O237℃孵育10min，PBS冲洗；④抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(pH 6.0)中煮沸(95℃，15~20min)，自然冷却20min以上，再用冷水冲洗，加快冷却至室温，PBS冲洗；⑤正常羊血清工作液封闭，37℃10min，倾去勿洗；⑥滴加一抗鼠抗人单克隆抗体(稀释浓度1∶100) 4℃ 冰箱孵育过夜，PBS冲洗(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照)；滴加生物素标记多克隆羊抗兔、鼠二抗,37℃孵育30min,PBS冲洗;⑦滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min,PBS冲洗;⑧DAB染色，自来水冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。

1.3结果判定标准

1.3.1ER及PR判定标准[5-6]ER、PR表达于肿瘤细胞核内。阳性细胞为细胞核内有棕黄色颗粒。以视野内阳性细胞数小于全部肿瘤细胞的20%为表达阴性(-)；超过全部肿瘤细胞的20%为表达阳性，其中阳性细胞占20%~50%或癌细胞内颗粒染色为淡黄色为弱阳性(+)，阳性细胞>50%或癌细胞内颗粒染色为深棕黄色为阳性(++)。

1.3.2EGFR判定标准[7]EGFR阳性物质定位于细胞膜或细胞质，0级：无细胞棕黄色染色；1级：5%～20%肿瘤细胞膜或胞质呈弱棕黄染色；2级：20%～50%肿瘤细胞膜或细胞质呈弱到中棕黄染色；3级：50%～75%肿瘤细胞膜或细胞质呈中到强或强的阳性着色。

1.4统计学处理应用SPSS l7.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1EGFR在乳腺癌组织中的表达情况本组144例乳腺癌组织中EGFR(+)表达率为38.2%(55/144)，见表1。乳腺癌组织中EGFR表达情况，见图 1，图2。

2.2乳腺癌组织中EGFR表达与临床病理特征的关系①EGFR在乳腺癌中的表达与患者年龄、组织学分级和淋巴结有无转移均无统计学差异(P>0.05)。②EGFR的表达与乳腺癌腋窝淋巴结有无转移无关，但淋巴结转移<4枚与淋巴结≥4枚的患者间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，随着淋巴结转移数量的增加，其阳性表达率相应增高。③乳腺癌患者不同组织学分级的EGFR表达情况为I级(11.9%)、Ⅱ级(36.4%)、Ⅲ级(51.7%)，其中I级和II级的EGFR表达差异有统计学意义(P<0.05)，而Ⅱ与Ⅲ级的EGFR表达无统计学差异(P>0.05)。

表1　乳腺癌组织中EGFR表达与临床病理特征的关系

注①EGFR的表达在组织学分级I与Ⅱ、II与III之间比较差异无统计学意义(P>0.05)；但在组织学分级I与III,差异有统计学意义(P<0.05)。注②EGFR的表达与患者淋巴结有无转移无明显相关性，但是在淋巴结转移<4枚与淋巴结≥4枚的患者间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。注③HER2(-)与HER2(+)、HER2(++)与HER2(+++)，差异无统计学意义(P>0.05)，但HER2(-)与HER2(++)、HER2(-)与HER2(+++)、HER2(+)与HER2(+++)之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

图1　乳腺癌组织中EGFR强阳性表达 (SP×200)

图2　乳腺癌组织中EGFR弱阳性细胞表达(SP×200)

2.3EGFR表达与ER、PR和HER2的关系EGFR的表达与ER、PR结果之间比较，无统计学差异(P>0.05)，但在ER(-)、PR(-)的患者中，EGFR的阳性表达率较低；EGFR在HER2(-)与HER2(+)、HER2(++)与HER2(+++)，差异无统计学意义(P>0．05)，但HER2(-)与HER2(++)、HER2(-)与HER2(+++)、HER2(+)与HER2(+++)之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR在HER2强阳性乳腺癌患者中的表达明显高于HER2弱阳性患者，见表1。

3　讨论

EGFR也叫HER1，位于7q11．13，包含26个外显子，其表达产物是一种相对分子质量为170×103的连接糖蛋白，是与大多数上皮实体肿瘤密切相关的一种跨膜糖蛋白。广泛分布于哺乳动物的上皮细胞、胶质细胞等，其结构包括细胞外区、疏水跨膜区和胞内酪氨酸激酶区。研究发现EGFR酪氨酸磷酸化过表达与33%~50%的人类表皮肿瘤相关[8]。尤其是对EGFR在非小细胞肺癌、乳腺癌、结肠癌中高表达的研究，使我们对肿瘤生物学特性和行为进一步深入了解，靶向药物治疗已为抗肿瘤治疗开辟崭新领域。

本研究中EGFR在淋巴结转移<4枚与淋巴结≥4枚的患者之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，且随着淋巴结转移数量的增加，其阳性表达率相应增高，进一步证明EGFR过表达与乳腺癌的发生、转移及病理类型密切相关。但EGFR的表达与乳腺癌腋窝淋巴结有无转移之间无统计学差异(P>0.05),与邓再兴等[3]研究结果不尽相同，可能与本组病例数较少及与本调查用的方法检测受体以及阳性物的定点不同有关，有待于进一步研究分析。乳腺癌患者不同组织学分级的EGFR表达情况，其中Ⅰ级和Ⅲ级的EGFR表达差异有统计学意义(P<0.05)，而Ⅱ与Ⅲ级的EGFR表达无统计学差异(P>0.05)，但是随着组织学分级的升高，EGFR的阳性表达率逐渐升高，说明EGFR表达与肿瘤分化关系密切，即EGFR过度表达的肿瘤细胞分化差，有更强的分裂增殖能力，易发生转移。邓再兴研究结果显示浸润性乳腺癌中有41.1%表达EGFR，且EGFR表达随组织学分级升高而升高，淋巴结转移者表达率明显高于无淋巴结转移者，EGFR表达提示患者肿瘤恶性度高、预后不良，本研究与此基本一致。

EGFR家族在乳腺癌中存在高表达，有关文献报道[9]乳腺癌细胞系(MDA-68)中有EGFR基因扩增，其细胞膜上有高水平的EGFR表达，乳腺癌细胞常存在EGFR/HER2的高表达和(或)雌激素受体阳性，本研究发现EGFR在HER2阴性与HER2阳性之间比较差异有统计学意义(P<0.05)，且EGFR在HER2强阳性乳腺癌患者中的表达明显高于HER2弱阳性患者，进一步证明EGFR在浸润性和分化差的肿瘤中表达高，与本实验的结果相一致。Spyrator F等[10]研究结果表明：乳腺癌表达EGFR阳性的病人预后差，在淋巴结有转移者，预后不良。另外在淋巴结尚未出现转移，而EGFR测定为阳性结果者,同样预后不良,生存期短。这一结果对临床治疗有很大启示，即对于病理分化差，尤其EGFR高表达的乳腺癌，即使在术前或手术中未发现腋窝淋巴结肿大，也应做严格的腋窝组织切除，而且术后应给予局部放疗，以预防转移和复发。

随着分子生物学技术的发展，越来越多的研究证实乳腺癌预后与许多分子标志物密切相关。在临床上，检测ER、PR、HER2、EGFR的表达情况，可以较准确指导临床治疗及预测患者预后，为乳腺癌的临床治疗、预后判断和个体化治疗提供重要依据，但目前监测乳腺癌样本中EGFR水平的方法主要是传统的免疫组化，这种方法容易受多因素干扰，敏感性不稳定，EGFR与乳腺癌临床病理特征之间的研究结果在不同的报告中可能存在差异甚至相反的结果，有待进一步深入研究。

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EGFR Expression in Breast Cancer Tissue and Clinicopathological Characteristics

WANG Rui-ping

(ShanxiUniversityofChineseMedicine,Xianyang712046,China)

【Abstract】Objective To investigate EGFR distribution characteristic in the breast Cancer and its relationship with the breast cancer age, histological grad, with or without lymph node metastasis, estrogen and progesterone receptor so as to provide an important basis on diagnosis, clinical treatment and prognosis of the breast cancer.Methods Material taking and eosin staining, detect the expression of EGFR in 144 cases of breast cancer with the method of immunohistochemistry. Analyze the expression of EGFR in breast cancer tissue.Results ①The positive rate of EGFR is 38.2% in 144 breast cancer tissues,infiltrating ductal carcinoma 102 cases, invasive lobular carcinoma 26 cases. ②The relationship between the expression of EGFR menopause，histological grade,with or without lymph node metastasis,pathological grade Ⅰ and Ⅱ,Ⅱ and Ⅲ are not statistically significant (P>0.05),but the comparison of histological grade Ⅰ and Ⅲ,lymph node metastasis is less than 4 and greater than or equal to 4 significant differences(P<0.05).③There is no difference(P>0.05) in the comparison between EGFR expression on ER, PR results but in the ER (-), PR (-) of the patients, positive expression rate of EGFR is low; there was no statistically significant difference (P>0.05) in HER2 (-) and HER2 (+), HER2 (++) and HER2 (+++) expression,but in HER2 (-) and HER2 (++),HER2 (-) and HER2 (+++),HER2 (+) and HER2 (+++),statistically significant difference (P<0.05).Conclusion ①The expressions of EGFR are not related to ER and PR status.The expressions of EGFR in HER2 high positive breast cancer are more than in the negative breast cancer. That suggests the expression of EGFR is correlated to the invasion, metastasis and prognosis of breast cancer.②lymph node metastasis is less than 4 and greater than or equal to 4 significant differences(P<0.05).

【Key words】breast cancer; epidermal growth factor; immunohistochemical

[收稿日期2014-06-22]

【中图分类号】R737.9

【文献标识码】A

【文章编号】1008-8164(2014)03-0005-04

作者简介王瑞平(1986- )，女，河南周口人，硕士在读，研究方向：腺体肿瘤基础与临床。