韩先森

(安徽省肥西县人民医院，安徽肥西 231200)

足癣是常见的皮肤病，是由真菌侵入皮肤所引起的浅部真菌病。该病发病率高，传播广泛，常引起继发细菌感染，且较难痊愈，复发率高［1］。复方紫荆皮水杨酸溶液为复方制剂，于2002年上市销售，已在临床使用多年，疗效确切，深受患者好评。本品由水杨酸、苯甲酸、紫荆皮、冰醋酸、乙醇(70%)等组成，主要用于足癣，亦用于手足多汗症［2］。所含苯甲酸、水杨酸、冰醋酸具有抑制真菌、溶解角质作用;紫荆皮具有杀虫、抑菌以及止痒作用［3］。其中水杨酸、苯甲酸这两种成分与全方药效密切相关，是全方主要有效成分，测定其含量对于复方紫荆皮水杨酸溶液的质量具有重要的意义［4］;现行药典中水杨酸、苯甲酸采用的均为酸碱中和滴定;有关复方紫荆皮水杨酸溶液中水杨酸、苯甲酸两成分的质量分析国内外未见报道［5-7］，本文采用UV法和酸碱滴定法测定两组分含量，可有效避免滴定过程中多组分干扰，方法简单快速，结果准确，重现性好。

1 仪器与试药

1.1 试药及来源 复方紫荆皮水杨酸溶液(批号:050911、050912、050913，规格:每支 20 mL):安庆市永生制药有限公司生产。

市售复方紫荆皮水杨酸溶液(批号:051001，规格:每支20 mL):锦州本天药业有限公司生产。

水杨酸对照品(批号:100106-200303;规格:100 mg):中国药品生物制品检定所提供。

1.2 仪器 TU-1221型紫外分光光度计(北京通用科学仪器有限公司);AG135电子天平(METTLER TOLEDO);水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 水杨酸的含量测定 采用紫外分光光度法测定本品中水杨酸的含量［8］，并对本法进行方法学试验［9］。

2.1.1 最佳检测波长的选择 (1)复方紫荆皮水杨酸溶液的光谱测定:精密称取水杨酸对照品约45 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水约80 mL摇匀后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取对照品溶液2 mL置25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2010年版二部附录Ⅳ A)测定，最大吸收波长为530 nm，因此选择在530 nm的波长处测定吸收度(图1)。

(2)阴性试验:精密量取不加入水杨酸的复方紫荆皮溶液，即阴性对照溶液1 mL，置500 mL量瓶中，加乙醇20 mL使溶解均匀，加水至刻度，摇匀。取15 mL，置 25 mL 量瓶中，加 0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2010年版二部附录ⅣA)测定，在400～700 nm的波长处测定吸收度(图2)。从谱图可以看出，阴性对照在530 nm波长处无吸收，提示处方中其他药味成分对测定无干扰。

2.1.2 线性试验 精密称取水杨酸对照品45.2 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水约80 mL摇匀后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取对照品溶液1、1.6、2、2.4、3 mL 置 25 mL 量瓶中，加 0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2010年版二部附录ⅣA)在530 nm波长处测定吸收度，结果见表1和图3。

表1 含量测定线性试验结果(n=5)

结果表明，复方紫荆皮水杨酸溶液的水杨酸在18.08 ～54.24 mg·L-1的浓度范围内，其浓度与吸收度呈良好的线性关系。

2.1.3 仪器精密度试验 取上述对照品溶液2 mL，置25 mL 量瓶中，加0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2010年版二部附录Ⅳ A)在530 nm波长处测定吸收度，测定6次，计算。测定结果分别为 0.431 2、0.430 8、0.431 7、0.431 1、0.430 9、0.430 2，平均为 0.431 0，RSD 为 0.12%，结果表明仪器的精密度良好。

2.1.4 测定溶液稳定性试验 精密量取本品1 mL，置500 mL量瓶中，加乙醇20 mL使溶解均匀，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液15 mL，置 25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，分别放置 0、1、2、4、8、12、24 h 后，测定其吸收度，结果分别为 0.430 2、0.430 9、0.430 0、0.431 2、0.429 6、0.430 5、0.429 1，平均为0.430 3，RSD为0.21%。试验结果表明，本品的水溶液室温放置24 h基本稳定。

2.1.5 回收率试验 精密量取已知含量(批号:050810，含量:99.8%)复方紫荆皮水杨酸溶液1 mL，共9 份，称取水杨酸对照品约 24、30、36 mg，各3份，分别置500 mL量瓶中;加乙醇20 mL使溶解均匀，加水至刻度，摇匀。精密量取供试品溶液15 mL，分别置50 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2005版二部附录IV A)，在波长530 nm处测定吸收度，精密称取水杨酸对照品约45 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水约80 mL摇匀后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取对照品溶液2 mL置25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，同法操作，在波长530 nm处测定吸收度，计算，测定结果见表2。

表2 含量测定回收率试验结果

从结果可以看出，本试验水杨酸回收率在98.5% ～101.0%之间，RSD 均小于 1.0%。说明辅料对检测结果无影响。

2.1.6 样品含量测定 对照品溶液的制备:精密称取水杨酸对照品约45 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水约80 mL摇匀后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备:精密量取本品1 mL，置500 mL量瓶中，加乙醇20 mL使溶解均匀，加水至刻度，摇匀。

测定法:精密量取对照品溶液2 mL与供试品溶液15 mL，分别置25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1盐酸液1 mL和5%硝酸铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2010年版二部附录IV A)，在波长530 nm处测定，计算。本品三批样品及市售对照样品检验结果见表3。

2.2 苯甲酸的含量测定 采用酸碱滴定法测定本品中苯甲酸的含量，并对本法进行方法学试验。

2.2.1 回收率试验 分别精密称取苯甲酸约80、100、120 mg，各3份，置烧杯中，分别按比例加入处方中其他原、辅料，于室温流通空气中挥发除去乙醇后，置装有五氧化二磷的干燥器中12 h以上，取出，加中性稀乙醇50 mL溶解后，加酚酞指示液3～5滴，用氢氧化钠滴定液(0.1 mol·L-1)滴定，按下式计算。每1 mL氢氧化钠滴定液(0.1 mol·L-1)相当于12.21 mg的 C7H6O2。计算其回收率。见表4。

F—氢氧化钠滴定液(0.1 mol·L-1)的标定校正值;V—消耗氢氧化钠滴定液(0.1 mol·L-1)的毫升数;W—分光光度法测得的每1 mL供试品中水杨酸的量(mg)。

从结果可以看出，本试验苯甲酸回收率在98.5% ～101.5%之间，RSD 均小于 2.0%。说明辅料对检测结果无影响。

表3 复方紫荆皮水杨酸溶液含量测定结果

表4 苯甲酸含量测定回收率试验

2.2.2 重复性试验 精密量取本品2 mL，置烧杯中，于室温流通空气中挥发除去乙醇后，置装有五氧化二磷的干燥器中12 h以上，取出，加中性稀乙醇50 mL溶解后，加酚酞指示液3～5滴，用氢氧化钠滴定液(0.1 mol·L-1)滴定，按公式计算。每1 mL氢氧化钠滴定液(0.1 mol·L-1)相当于12.21 mg的C7H6O2，重复测定6次。结果每次滴定液消耗量分别为 12.29、12.38、12.19、12.31、12.42、12.11 mL，RSD为0.95%。结果表明精密度试验良好。

2.2.3 样品的含量测定 精密量取本品2 mL，置烧杯中，于室温流通空气中挥发除去乙醇后，置装有五氧化二磷的干燥器中12 h以上，取出，加中性稀乙醇50 mL溶解后，加酚酞指示液3～5滴，用氢氧化钠滴定液(0.1 mol·L-1)滴定，按公式计算。每1 mL氢氧化钠滴定液(0.1mol·L-1)相当于12.21 mg的C7H6O2。本品三批样品及市售对照样品检验结果分别为 101.7%、100.8%、99.9%、98.6%。

3 讨论

目前临床上治疗足癣、手足多汗症的药品种类繁多，复方紫荆皮水杨酸溶液为我院常年销售品种，集传统中药与现代医药，复方而成，充分发挥中西医结合医药优势，临床疗效显著，价格低廉，在广大足癣、手足多汗症患者有着良好的口碑。

本试验采用紫外分光光度法测定复方紫荆皮水杨酸溶液中水杨酸含量，以530 nm为测定波长，灵敏度高，准确性和精密度好，操作简便，阴性空白样品溶液与溶剂无干扰，回收率高。可用于复方紫荆皮水杨酸溶液的质量控制。与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快;灵敏度高，选择性好;精确度与准确度好，用途广泛。

采用酸碱中和滴定法测定复方紫荆皮水杨酸溶液中苯甲酸含量，避免了样品中水杨酸干扰，试剂和器材廉价易得，相对而言，两种方法都是比较经典的分析方法，特别适合基层及实验条件欠缺的地区药学工作者使用。

综上所述，采用紫外分光光度法及酸碱中和滴定法测定复方紫荆皮水杨酸溶液中两组分含量取得较好的结果。但本实验受限于基层检测条件、启动资金等客观因素，所采用的仪器精密度和准确度相比时下流行的高效液相色谱法(HPLC法)存在一定的差距，检测指标有限，更大规模、高精密的实验研究将为复方紫荆皮水杨酸溶液中有效成分测定提供更为有力的客观支持。

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