吴 芳，阎 博，樊宝娟，黄 艳，杨瑞瑞，刘海静，

(1.陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710065;2.陕西中医学院，陕西咸阳 712046)

强力定眩胶囊为2012年国家药品标准提高品种，现行质量标准为国家食品药品监督管理局标准，处方由天麻、杜仲、野菊花、杜仲叶和川芎五味中药组成。降压降脂、定眩的功效，用于高血压、动脉硬化、高血脂症以及上述诸病引起的头痛、头晕、目眩、耳鸣、失眠等症。文献报道［1］:强力定眩胶囊在眩晕患者上的临床疗效显著，具有推广价值;另有报道［2］建立强力定眩胶囊的质量标准，对其中主要药味进行了薄层色谱定性研究和高效液相色谱的含量测定。

作为能体现中药整体特征的指纹图谱、特征图谱分析技术在近年来的质量标准研究中得到了广泛的关注和认可［3-8］，《中国药典》2010年版一部中增加了桂枝茯苓胶囊等制剂的指纹图谱项目和乌灵胶囊等的特征图谱项目。本文对处方中各味药材主要化学成分进行了分析，对强力定眩胶囊的HPLC特征图谱进行了系统的方法学考察并对试验结果进行了分析总结，以期合理提高该制剂的质控标准，控制该制剂的稳定性和有效性。

1 仪器、试剂及样品

1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪，2996二极管阵列检测器;SHISEIDO色谱柱;Sartorius AG ME电子天平、Mettler AE-240S电子天平、Sartorius BS 223S电子天平。

1.2 试剂及样品 乙腈为色谱纯，水为高纯水，其余试剂为分析纯。天麻素对照品(批号:110807-200205)、松脂醇二葡萄糖苷对照品(批号:11537-201103)、阿魏酸对照品(批号:0773-9910)、绿原酸对照品(批号:110753-200413)、蒙花苷对照品(批号:111528-200607)、天麻对照药材(批号120944-201009)，杜仲对照药材(批号:121202-200502)，野菊花对照药材(批号:120995-201105)，杜仲叶对照药材(批号:1068-9901)，川芎对照药材(批号:120918-200809)，均由中国食品药品检定研究院提供;强力定眩胶囊样品、生产用药材及阴性样品由生产企业提供。

2 方法

2.1 色谱条件 SHISEIDO MGⅡC18色谱柱;柱温35℃;流速为1.0 mL·min-1;进样量为10 μL，流动相为梯度洗脱，见表1。

表1 流动相及比例

2.2 对照品溶液的制备 取天麻素对照品、松脂醇二葡萄糖苷对照品、阿魏酸对照品、绿原酸对照品、蒙花苷对照品各约5 mg，精密称定，置同一50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1 mL各含0.1 mg的混合对照品溶液。

2.3 样品溶液的制备 取样品适量，研细，称取相当于5粒重，加稀乙醇50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈—水(3∶97)适量使溶解，并定容于10 mL容量瓶中。

2.4 测定方法 分别精密量取混合对照品溶液和样品溶液各10μL，注入液相色谱仪。以阿魏酸色谱峰为S峰，其余各峰的保留时间与之的比值为相对保留时间。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度试验 取同一批号的样品溶液，在相同色谱条件下连续进样6次，结果各色谱峰的相对保留时间RSD均小于0.05%。表明本实验仪器及色谱条件的精密度良好。

2.5.2 稳定性试验 取同批次样品供试品溶液在制备后0、5、15、20 h进样，结果各峰相对保留时间RSD均小于0.2%。表明样品制备后20 h之内稳定。

2.5.3 重现性试验 取同一批号的样品，按“2.3”项下方法，重复制备6份溶液，按上述色谱条件进样，结果各峰相对保留时间RSD均小于0.1%。表明方法重现性良好。

2.5.4 色谱峰归属 取企业提供的生产用药材及天麻对照药材、杜仲对照药材、野菊花对照药材、杜仲叶对照药材、川芎对照药材，按照处方量及“2.2”项下方法，制备溶液。比较企业提供的药材和对照药材的色谱图的一致性，确定各药材主峰的保留时间，与样品色谱图进行比较，结果各药材主峰均在样品色谱图中呈现，且分离良好。

2.5.5 专属性考察 取不含每种药材的阴性样品，按照“2.3”项下的方法制备阴性溶液，在相同色谱条件下进样，按照各峰的保留时间对主要色谱峰进行峰归属。

3 样品特征图谱的建立

取企业提供的9批样品，按照“2.2”项下的处理方法制备供试品溶液，并记录色谱图，通过对9批样品的色谱图的比较，选定其中10个峰为特征峰，并以阿魏酸峰为S峰，计算其余峰的相对保留时间。确定的强力定眩胶囊特征图谱见图1，各峰保留时间及峰归属结果见表2。

4 讨论

4.1 方法特点 该制剂处方由天麻、杜仲叶、杜仲、野菊花和川芎五味中药组成。其中杜仲和杜仲叶属于同一药用植物的不同药用部位，采用TLC法很难进行区分并鉴别。阿魏酸和绿原酸虽含量较高，很多质量标准中以此为含量测定的指标成分，但专属性不强，不能说明任何一种药材的质量。本实验通过筛选色谱条件，使这五味中药在同一色谱条件下得以鉴别，每种药材都呈现了具有专属性的色谱峰，为中药制剂中这五味药材的质量标准的研究提供了参考和依据。

表2 色谱峰归属结果

4.2 色谱峰归属 样品中各味药材的主要色谱峰在280 nm处均能体现，且在此波长处检测处的色谱峰数量较多，响应值较好，故选择280 nm为检测波长。在此波长处，五种药材均有特征峰呈现，根据峰归属结果，天麻的特征峰为1、2号峰，杜仲叶的特征峰为3、4号峰，杜仲特征峰为5号峰，川芎的特征峰为7、8号峰，野菊花特征峰为9号峰，S峰阿魏酸由野菊花、杜仲叶和川芎共同贡献，绿原酸由野菊花和杜仲叶共同贡献。

4.3 提取溶剂选择 比较了稀乙醇和甲醇分别作为提取溶剂时样品的色谱图，结果稀乙醇提取液比甲醇提取液的色谱图呈现更多的色谱峰，且峰面积相对较大，故选择稀乙醇作为提取溶剂。

4.4 关于系统适用性考察 从柱温、进样量、柱流速、色谱柱和仪器5个方面对方法的系统适用性进行了的考察。考察了柱温分别在30℃、35℃、40℃时各峰的相对保留时间，结果三者的相对保留时间RSD在1%之内;考察了进样量为5、10、20μL时各峰的相对保留时间，结果三者的相对保留时间RSD在1% 之内;考察了柱流速为 0.8、1.0、1.1 mL·min-1时，各峰的相对保留时间，结果3种色谱条件下，峰2的3个相对保留时间的RSD值超过了5%，所以规定流动相的流速为1.0 mL·min-1;换用了不同品牌的三根色谱柱，结果峰7、8、9的相对保留时间的RSD值均超出5%的范围，表明色谱柱对色谱峰具有较明显的影响，所以规定了色谱柱的品牌;另外，换用不同商品名称的液相色谱仪测定各峰的相对保留时间，结果三者的相对保留时间RSD在±1%之内，仪器对色谱峰相对保留时间的影响较小。

4.5 关于检测波长 标准中含量测定的指标性成分天麻素色谱峰在220 nm附近色谱峰明显，但在此波长处基线较高且其它色谱峰不能呈现。在280 nm处，各药材均有特征峰呈现。但企业提供的天麻药材和天麻对照药材呈现的色谱峰峰面积悬殊较大，关于此色谱峰我们将继续进行研究。

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