成 彦，陈 伟

(1.江苏省南京市中医医院，江苏南京 210000;2.江苏省苏州市中医医院，江苏 苏州 215009)

复方血栓通胶囊是由中山眼科中心与广东众生药业股份有限公司联合研制的纯中药复方制剂，处方由君药三七、臣药丹参、佐使药黄芪和玄参组成，具有活血化瘀、益气养阴的功效，临床上常用于治疗血疲兼气阴两虚证的视网膜静脉阻塞，症见视力下降或视觉异常，眼底疾血征象，神疲乏力，嘲干，口干等。现代药理学研究表明该制剂具有扩张血管，提高肌体抗缺氧能力，降低血液黏度，促进血液循环，改善微循环等作用。大量研究证实，复方血栓通胶囊对于治疗眼科疾病尤其是糖尿病视网膜病变具有显著的疗效［1－6］。2010年版《中国药典》对该制剂的质量标准进行了修订［7］，采用HPLC法测定人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1的总量作为其含量测定控制项，随着药学研究的不断深入，对中药复方制剂的质量控制要求越来越高，旧的标准应当不断的提高。该药所用的君药三七，其总皂苷组成并非只有人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1这三种皂苷，故笔者参考另一制剂血栓通注射液质量标准，拟建立HPLC法同时测定5种皂苷类成分，以期更准确地反映复方血栓通胶囊的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters2695液相色谱仪(Waters 2489紫外检测器，EmpowerⅡ色谱工作站);Mettler Toledo XS105DU十万分之一电子天平;KQ－400GKDV超声波清洗机。

1.2 试药 三七皂苷R1(批号:201318)、人参皂苷Rg1(批号:201128)、人参皂苷 Re(批号:200822)、人参皂苷Rb1(批号:201223)、人参皂苷Rd(批号:201001)均购自中国药品生物制品检定所。复方血栓通胶囊(广东众生药业股份有限公司10个批次产品，批号为120523、121022、121134、121221、130213、130421、130512、130622、130714、130813)。甲醇、乙腈为色谱纯(德国Merk公司)，试验用水为超纯水(美国Millipore公司)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:YMC－Pack Pro C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);以乙腈为流动相 A，水为流动相B，按表1梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温为 35 ℃;流速为1.0 mL·min－1。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取三七总皂苷对照提取物12.55 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd对照品适量，加甲醇分别制成每毫升含三七皂苷 R10.501 0 mg、人参皂苷 Rg11.510 2mg、人参皂苷 Re 0.320 1 mg、人参皂苷 Rb11.022 3mg、人参皂苷 Rd 0.163 2 mg 的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的配制 取供试品，研细，混匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 空白溶液 以溶剂甲醇为空白，按照“2.1”的色谱条件，进样10μL。

2.2.4 测定法 精密吸取上述溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。三七皂苷R1对照品峰的理论板数为15 139，主峰和杂质峰分离良好，分离度为11.1，拖尾因子1.01，色谱图见图1 ～3。

2.3 方法学考查

2.3.1 线性关系考查 分别精密吸取上述对照品溶液1、2、4、8、10 μL，注入液相色谱仪，以进样量(ng)为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线并进行回归计算，五种对照品的线性方程、相关系数、检测范围见表2。

表2 线性方程、相关系数、检测范围

2.3.2 精密度试验 精密量取对照品溶液10μL，重复进样6次，测得对照品溶液峰面积，5种组分峰面积积分值的 RSD 分别为0.05%，0.03%，0.11%，0.69%，0.07%。表明仪器精密度较好。

2.3.3 稳定性试验 取同一对照品溶液，分别于0、2、4、8、16、24 h 各取10 μL 进样，测定对照品溶液中5个对照品峰面积，计算RSD，以此来测定5种皂苷在室温条件下的稳定性，其测得对照品的峰面积值积分的 RSD 分别为 0.07%，0.10%，0.12%，0.07%，0.21%。表明对照品溶液在室温条件下24 h内稳定。

2.3.4 重复性试验 精密量取同一批复方血栓通胶囊样品(批号:120523)，按“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，按上述色谱条件，分别测定5个皂苷峰面积，其 RSD 分别为 1.01%，0.98%，0.79%，1.03%，1.15%。表明该方法重复性好。

2.3.5 定量限试验 将上述对照品溶液分别稀释后进样，根据峰高以信噪比S/N=10确定定量限。三七皂苷 R1为5.43 ng、人参皂苷 Rg1为 4.34 ng、人参皂苷 Re为3.44 ng、人参皂苷 Rb1为 3.56 ng、人参皂苷Rd为5.78 ng。

2.3.6 检测限试验 同定量限测定方法，根据峰高以信噪比S/N=3确定检测限。三七皂苷R1为1.81 ng、人参皂苷 Rg1为 1.45 ng、人参皂苷 Re 为1.15 ng、人参皂苷 Rb1为 1.19 ng、人参皂苷 Rd 为1.93 ng。

2.3.7 加样回收率试验 精密称定已知含量的样品(取重复性项下的复方血栓通胶囊样品，批号:120523，每粒含三七皂苷R11.71 mg，人参皂苷Rg110.42 mg、Re 为0.40 mg、Rb15.23 mg、Rd 0.67 mg)6份，每份0.25 g，置具塞锥形瓶中，精密加入一定量的5种皂苷类对照品，按“2.2.2”项下方法制备，精密吸取上述溶液各10μL进样，计算回收率，结果见表3～7。

表3 三七皂苷R1加样回收率

表4 人参皂苷Rg1加样回收率

表5 人参皂苷Re加样回收率

表6 人参皂苷Rb1加样回收率

表7 人参皂苷Rd加样回收率

2.3.8 样品测定 测定10批复方血栓通胶囊中5种皂苷类成分含量，结果显示，10批样品三七总皂苷含量波动较小，且都符合标准规定的每粒含三七总皂苷为9.0 mg，表明该制剂的原料选择较为严格，工艺较为稳定(见表8)。

表8 样品含量测定结果/mg·粒－1

3 讨论

复方血栓通胶囊临床上广泛应用于血瘀兼气阴两虚证所致的视网膜静脉阻塞的治疗，其中三七皂苷类化合物是活血化瘀药发挥药效的主要物质基础。本实验针对复方血栓通胶囊中君药三七主要成分进行含量测定方法的探究，在原标准的基础上，增加了人参皂苷Rb1及人参皂苷Rd两个成分的含量测定，使得三七总皂苷的成分监测组达到5个，更为全面地反映了主成分含量。并进行方法学验证，结果表明本方法简便，专属性强，准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制［8］。

此外，药效学实验表明丹参的水溶性类成分为其活血化瘀的有效成分［9］，复方血栓通胶囊中臣药丹参，也应当是质量标准控制的重点。后续研究可增加丹参中有效成分丹参素、丹酚酸B、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ、隐丹参酮等的含量测定［10］。黄芪中的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷，玄参的中哈巴俄苷也可作为标准提升点［11］。可借鉴“一测多评”的理念［12－14］，通过一个对照品的检测，来实现该成方制剂的多组分同步测定，具有准确、简便、经济实用等优点，是适合中药特点多指标质量评价的新方法，为更全面评价复方血栓通胶囊的质量提供科学依据。

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