化疗对胃癌SPARC表型的影响

2015-11-23高永银韩如冰王霞葛少华李鸿立邓婷巴一黄鼎智

中国肿瘤临床 2015年6期

高永银韩如冰王霞葛少华李鸿立邓婷巴一黄鼎智

·临床研究与应用·

化疗对胃癌SPARC表型的影响

高永银韩如冰王霞葛少华李鸿立邓婷巴一黄鼎智

目的：本研究旨在探讨化疗对胃癌SPARC（secreted protein，acidic and rich in cysteine）表型的影响。方法：免疫组织化学方法检测132例胃癌组织中SPARC的表达情况。132例胃癌组织中，54例取自新辅助化疗后手术胃癌患者，78例取自无新辅助化疗手术的胃癌患者，以免疫组织化学方法检测各例组织标本中SPARC的表达，分析化疗对SPARC表型影响。结果：较正常胃组织及肿瘤细胞周围的间质组织，SPARC在胃癌细胞中高表达；SPARC高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期相关。新辅助化疗组的SPARC高表达比例较无新辅助化疗的对照组低（P＜0.05）。单因素分析表明大体类型、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、新辅助化疗后SPARC表型表达为新辅助化疗后手术组胃癌患者的预后影响因子；多因素分析表明淋巴结转移、组织学类型、新辅助化疗后SPARC表型表达为独立的预后影响因子。结论：SPARC表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及胃癌患者预后相关；新辅助化疗可改变胃癌SPARC表型。

SPARC 胃癌免疫组化化疗

胃癌为第四大常见恶性肿瘤，死亡率高居肿瘤死亡率第二位［1］。由于肿瘤细胞对药物敏感性有限，化疗整体疗效欠佳，缓解率约10%～40%，中位生存仅11个月［1］。研究显示对于HER-2阳性表型的胃癌患者在化疗基础上联合曲妥珠单抗可进一步延长生存期2.7个月［2］。胃癌是一种分子表型高度异质性的肿瘤，针对不同表型胃癌的个体化治疗是提高疗效的关键。有效的个体化治疗取决于对胃癌准确的分子分型和合理运用有效药物。

白蛋白紫杉醇（nanoparticle albumin-bound paclitaxel，nab-paclitaxel）是一种白蛋白与紫杉醇微粒结合的新型紫杉醇制剂，在乳腺癌［3］和胰腺癌［4］显示出显著的疗效，在晚期和复发胃癌的二线化疗也显示出令人鼓舞的疗效，达到缓解率27.8%，总生存9.2个月［5］，成为胃癌化疗的一个重要的新武器。研究表明白蛋白紫杉醇对肿瘤产生较高疗效的重要机制之一是通过与肿瘤组织中的SPARC结合，使进入肿瘤细胞的药物浓度增加［5-6］。

SPARC蛋白为一种细胞外基质糖蛋白［7］，其表达与多种肿瘤的增殖、迁移、抗黏附、血管生成等密切相

关［8］。在胃癌中，SPARC表达与肿瘤细胞的侵袭、迁移、胃癌患者的预后［9］及对多西他赛的疗效相关［10］。此外，有报道SPARC蛋白表达与胰腺癌患者预后［11］及白蛋白紫杉醇在头颈部肿瘤中的疗效相关［12］。这些研究提示SPARC蛋白是一种与紫杉醇类药物尤其是白蛋白紫杉醇疗效密切相关的重要的分子表型。在肺癌［13］及乳腺癌［14］的研究中发现肿瘤的分子表型可以在化疗后发生改变，但在胃癌中化疗是否会影响SPARC表型尚未明确。探讨在化疗干预下胃癌患者SPARC表型是否发生改变，对化疗药物的选择和治疗策略的制定有重要临床指导意义。

本研究旨在探讨化疗对胃癌SPARC表型影响；同时对SPARC在胃癌中的表达分布及其与临床病理因素的关系作进一步研究。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1临床资料132例胃腺癌组织标本均来自天津医科大学肿瘤医院2007年1月至2012年12月手术切除标本（因胃镜咬检组织过小故未采用），全部标本均经病理证实为胃腺癌，正常对照胃组织标本取自远离癌组织一侧的阴性切端。132例患者中，54例行新辅助化疗后术后的肿瘤标本（A组）和78例无新辅助化疗术后的肿瘤标本（B组），用于分析化疗对SPARC表型影响；A组中，15例行以紫杉类为主的新辅助化疗方案，39例行以铂类+氟尿嘧啶类为主的方案。本研究符合医院伦理委员会认可。

1.1.2主要试剂SPARC兔抗人多克隆抗体购自英国Abcom公司；二抗为即用型免疫组织化学Elivision plus试剂盒（鼠/兔），购自中国迈新生物技术有限公司。1.2方法

1.2.1免疫组织化学法检测胃癌组织中SPARC表达胃癌石蜡切片常规脱蜡水化，枸橼酸钠缓冲液抗原修复，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶活性；SPARC一抗4℃孵育过夜；滴加酶标记的二抗。DAB显色，显微镜下观察显色程度，待目的蛋白着色而背景未着色时终止显色；苏木精复染，常规酒精梯度脱水，封片镜检。以PBS代替一抗为阴性对照，胰腺癌组织为阳性对照。

1.2.2结果判定SPARC在胃癌中阳性染色为胞浆出现棕黄色颗粒。光镜下随机观察10个高倍镜视野，按着色程度评分［9］：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；再依据染色细胞所占百分比评分：阳性细胞数≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，≥51%为3分；两项乘积即染色指数为该例免疫组织化学得分，染色指数≥4为SPARC高表达，染色指数≤3为SPARC低表达。

1.3统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，相关性采用Spearman相关性分析；单因素Kaplan-Meier生存分析和多因素Cox生存分析模型分析胃癌患者预后的相关因素。随访时间以诊断时间为起点，死亡或到2014年6月为终点。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1SPARC蛋白在胃癌组织中的表达情况

在24例正常对照胃黏膜组织中（B组），SPARC低表达于70.8%（17/24）胃腺细胞及66.7%（16/24）间质细胞（图1）；在78例胃癌组织中（B组），SPARC高表达于70.5%（55/78）肿瘤细胞，SPARC在肿瘤周围的间质细胞均低表达；表达部位主要在肿瘤细胞胞浆（图1）。

图1 免疫组织化学方法检测SPARC在胃腺癌中的表达情况（IHC× 200）Figure 1SPARC expression in gastric cancer as determined by immunohistochemistry（IHC×200）

2.2SPARC蛋白表达与胃癌患者临床病理因素关系

78例（B组）无新辅助化疗患者的术后胃癌组织标本中，SPARC高表达与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期相关（P＜0.05，表1），与其他临床病理因素无相关性（P＞0.05，表1）。

2.3化疗对胃癌SPARC表型的影响

对54例新辅助化疗患者（A组）术后胃癌组织标本与78例无新辅助化疗患者（B组）的术后胃癌组织标本中的SPARC表达进行分析，结果显示A组中SPARC高表达的百分比较B组低（46.3%vs.70.5%，P＜0.05，图2）；进一步对A组新辅助化疗方案进行分

析，结果显示27.8%（15/54）胃癌患者行以紫杉类为主的方案化疗，其中60.0%患者化疗术后的SPARC低表达；72.2%（39/54）胃癌患者行以铂类+氟尿嘧啶类为主方案化疗，其中51.2%患者化疗术后的SPARC低表达。

表178 例无新辅助化疗胃癌患者SPARC蛋白表达与临床病理特征的关系Table 1Correlation between the SPARC expression and clinicopathologic features of gastric cancer patients without preoperative chemotherapy

2.4SPARC表型与胃癌患者预后关系

132例胃癌患者（A组+B组）中，SPARC表型与患者预后无显著相关性，SPARC高表达的胃癌患者2年生存率为60.6%，低表达的胃癌患者2年生存率为64.1%（P=0.193）；进一步对54例新辅助化疗后手术胃癌患者（A组）的生存分析显示，化疗后SPARC表

图2 化疗对胃癌SPARC表型的影响（IHC×200）Figure 2SPARC phenotype in relation to chemotherapy（IHC×200）

图3 新辅助化疗后SPARC表型与预后关系Figure 3SPARC phenotype after preoperative chemotherapy in relation to overall survival

对A组患者预后相关的其他临床病理因素进行单因素分析，结果表明大体类型（BorrmannⅠ/Ⅱ，BorrmannⅢ/Ⅳ；P=0.015）、组织学分型（肠型，弥漫型；P=0.042）、浸润深度（T1/T2，T3/T4；P=0.034）、淋巴结转移（N0，N+；P=0.002）、TNM分期（Ⅰ/Ⅱ，Ⅲ；P= 0.001）为预后影响因素；进一步多因素Cox分析显示，淋巴结转移（P=0.032）、组织学分型（P=0.027）及新辅助化疗后的SPARC表型（P=0.024）为A组患者的独立的预后影响因子。

3 讨论

SPARC蛋白在胃癌中过表达并与胃癌浸润、转移、凋亡及患者预后相关［9，15-16］。相关研究报道胃癌细胞中SPARC的高表达可促进癌细胞的侵袭［17］、淋巴结转移、远处转移，高表达患者预后差［9，18］；然而另有研究认为SPARC高表达抑制血管生成［19］、癌细胞增殖［15，20］，肿瘤间质细胞中SPARC高表达与临床病理因素呈负相关［15］。因此，本研究为进一步探讨SPARC与胃癌发生发展关系，对SPARC在胃癌组织中表达及部位进行检测，并分析与临床病理因素的关系。

SPARC主要表达于肿瘤细胞或肿瘤间质细胞，型与患者预后相关，SPARC高表达患者的1、2、3年生存率分别为43.5%、27.0%、13.0%；低表达患者的1、2、3年生存率分别为81.8%、72.7%、56.7%（P=0.002，图3）。

与肿瘤类型相关［18］。本研究中，SPARC主要高表达于胃癌细胞中，低表达于肿瘤间质细胞及正常胃黏膜组织；该结果与Zhao等［9］和Wang等［18］的研究结果一致。但在另外一些研究结果与之相反，SPRAC在肿瘤间质细胞中高表达［15，20-21］，且与临床病理因素［15］及Ki-67［20］呈负相关。因此，通过对以上研究分析，推测SPARC表达部位在胃癌细胞或间质细胞或许决定了其在胃癌发生发展中所发挥的作用，但需对相关分子机制进一步研究来证实。

本研究中，SPARC高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期相关，该结果与Wang等［18］和Zhao等［9］研究结果一致。研究表明SPARC可能在肿瘤侵袭转移过程的最初阶段发挥作用［22］，并可能通过活化相关基质降解酶来促进癌细胞的转移播散［23］。在胃癌中，既往研究报道SPARC高表达的患者预后较差［9，21］。与之不同，本研究中SPARC表型并未显示出明显预后价值。但亚组分析显示在新辅助化疗后手术组患者（A组）中，化疗后SPARC高表达者预后更差，可能与样本量较小有关。但值得关注的是，在一项最新的乳腺癌研究中也发现与本研究相似的现象，肿瘤分子标志物在新辅助化疗前与预后无关，但在新辅助化疗后的表达与预后明显相关［24］，其机制与意义仍需进一步探讨。

肿瘤的个体化治疗需要分子分型，但肿瘤分子标志物于化疗前后可出现变化［13-14］，分子表型的变化对后续治疗用药的选择无疑具有重要影响。本研究中，新辅助组化疗后的SPARC高表达百分比较无新辅助化疗的对照组减低（46.3%vs.70.5%），即新辅助化疗可改变胃癌SPARC表型。可能的机制包括SPARC高表达的癌细胞被杀灭后，肿瘤组织富集了SPARC阴性和低表达细胞，或者化疗药物引起癌细胞内在基因的变化。

对本研究中新辅助化疗组的化疗方案进行分析，结果表明以紫杉类为主方案化疗的患者中，60.0%患者在新辅助化疗后SPARC低表达，而以铂类联合氟尿嘧啶类为主方案化疗的患者中，51.2%患者在化疗后SPARC低表达。研究表明白蛋白紫杉醇在二线治疗晚期或复发性胃癌患者中显示了良好的疗效。值得注意的是，白蛋白紫杉醇疗效与SPARC蛋白表型相关［5］，但本研究结果显示对既往接受过化疗尤其是紫杉类药物胃癌患者其SPARC表型可能发生变化，在应用白蛋白紫杉醇前应考虑重新活检检测SPARC蛋白的表达。本研究探索化疗对胃癌SPARC分子表型影响，样本量仍显不足，未来需要进一步扩大样本验证。

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（2014-11-13收稿）

（2015-01-06修回）

（编辑：郑莉）

Effect of chemotherapy on the phenotype of secreted protein，acidic and rich in cysteine in gastric cancer

Yongyin GAO，Rubing HAN，Xia WANG，Shaohua GE，Hongli LI，Ting DENG，Yi BA，Dingzhi HUANG

Dingzhi HUANG；E-mail:dingzhih72@163.com

Objective:To investigate the influence of chemotherapy on the phenotype of secreted protein，acidic and rich in cysteine（SPARC）in gastric cancer（GC）.Methods:Immunohistochemistry was used to analyze SPARC expression in 132 GC patients.Among these patients，54 with preoperative chemotherapy and 78 without preoperative chemotherapy were selected to analyze the effect of chemotherapy on SPARC phenotype by comparing the postoperative specimens of the two cohorts.Results:SPARC expression was higher in GC lesions than in the desmoplastic stroma surrounding the tumor cells and noncancerous tissues.High SPARC expression was related to invasion depth，lymph node metastasis，and TNM staging.SPARC expression was lower in patients with preoperative chemotherapy than in controls（P＜0.05）.Gross type，histology，depth of invasion，lymph node metastasis，TNM staging，and SPARC phenotype correlated with the overall survival of the patients with preoperative chemotherapy.Further multivariate analysis suggested that lymph node metastasis，histology，and SPARC phenotype after chemotherapy were independent prognostic indicators of GC.Conclusion:SPARC expression was associated with invasion depth，lymph node metastasis，TNM staging and GC prognosis.Preoperative chemotherapy may change the phenotype of SPARC in GC patients.

SPARC，gastric cancer，immunohistochemistry，chemotherapy